貝伐單抗結合培美曲塞與順鉑化療對非小細胞肺癌患者血清lncRNA H19及lncRNA HOTAIR表達的影響

徐建群 王紅娟 郭紅榮 戴芹

(武漢市第三醫院，湖北 武漢 430060)

非小細胞肺癌是常見的惡性腫瘤之一，占肺癌的75%～80%，發病率及病死率較高，但是早期發現率較低，較多患者確診時已經處于中晚期，失去了最佳手術機會，5年生存率較低。因此化療是延長患者生存時間的主要治療方案，鉑類聯合第三代化療藥物方案是非小細胞肺癌的主要治療方法〔1～3〕。培美曲塞聯合順鉑治療非小細胞肺癌近年在臨床上應用較多，該方案療效較好，不良反應較少〔4,5〕。貝伐單抗是一種靶向治療藥物，可以抑制血管內皮生長因子，減少腫瘤新生血管形成，從而抑制腫瘤〔6〕，既往有研究發現貝伐單抗聯合紫杉醇和順鉑治療非小細胞肺癌的治療效果較好〔7〕，但是貝伐單抗聯合培美曲塞和順鉑的治療研究較少，本研究探討3種藥物對非小細胞肺癌的治療效果。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年1月至2019年12月在武漢市第三院治療的非小細胞肺癌患者150例，根據患者的治療方案分為觀察組和對照組各75例。對照組給予培美曲塞聯合順鉑治療，其中男41例，女34例，年齡56～74歲，平均(62.1±3.6)歲；病理類型：鱗癌54例，腺癌21例；分期：Ⅲa期26例，Ⅲb期31例，Ⅳ期18例；合并疾病：高血壓33例，糖尿病25例；觀察組給予貝伐單抗聯合培美曲塞和順鉑治療，其中男38例，女37例，年齡55～76歲，平均(62.9±3.3)歲；病理類型：鱗癌50例，腺癌25例；分期：Ⅲa期24例，Ⅲb期29例，Ⅳ期22例；合并疾病：高血壓29例，糖尿病22例；兩組性別、年齡等一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準；所有患者及家屬知情并同意。納入標準：①患者行病理檢查均符合非小細胞肺癌的診斷標準；②均為初診，未接受過放化療治療；③預計生存時間>3個月。排除標準：①合并嚴重心、肝、腎等臟器疾病者；②合并活動性肺間質病變者；③對本研究藥物過敏者；④合并急慢性感染者；⑤既往行手術治療、放化療者；⑥非原發性腫瘤或者腫瘤轉移至其他部位或合并其他部位腫瘤者；⑦合并神經、精神疾病者。

1.2方法 所有患者化療之前給予預防嘔吐、補充電解質等常規治療，在化療前連續口服3 d地塞米松8 mg/d；化療前14 d開始口服葉酸400 μg/d，補充維生素B12 1 000 μg/次。對照組給予培美曲塞聯合順鉑治療，第1天給予培美曲塞(南京制藥廠有限公司，國藥準字H20080176)500 mg/m2，在1 h內靜滴完成；化療第1～3天給予順鉑(齊魯制藥有限公司，國藥準字H37021356)75 mg/m2靜滴；28 d為1個療程，共治療4個療程。觀察組在對照組基礎上給予貝伐單抗(瑞士羅氏制藥有限公司，國藥準字S20100024)治療，給予7.5 mg/(kg·d)，28 d為1個療程，治療4個療程。

1.3觀察指標

1.3.1兩組治療效果 治療4個療程后使用《實體瘤治療療程評價標準》〔8〕評估治療效果，完全緩解表示病灶完全消失，部分緩解表示靶病灶的最大直徑總和減少≥30%，穩定表示病灶增加<20%或縮小<30%，進展表示病灶最大直徑總和增加≥20%或出現新病灶；總有效率=(完全緩解+部分緩解)/總例數×100%。

1.3.2兩組免疫功能 治療前、治療4個療程后空腹采集肘部靜脈血5 ml，使用流式細胞儀檢測T細胞水平，使用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測干擾素(IFN)-γ、白細胞介素(IL)-4、腫瘤壞死因子(TNF)-α、轉化生長因子(TGF)-β水平。

1.3.3血清印跡基因H19長鏈非編碼RNA(lncRNA H19)、同源盒基因轉錄長鏈非編碼RNA(lncRNA HOTAIR)水平比較 治療前、治療4個療程后空腹采集肘部靜脈血5 ml，以2 000 r/min離心10 min，收集上清液，檢測lncRNA H19、lncRNA HOTAIR的表達情況。

1.3.4血管內皮生長因子水平比較 治療前、治療4個療程后空腹采集肘部靜脈血5 ml，以3 000 r/min離心15 min后收集血清，使用ELISA檢測血管內皮生長因子(VEGF)-A、VEGF-B、VEGF-C水平。

1.3.5不良反應 觀察治療期間兩組骨髓移植、惡心嘔吐、白細胞減少等不良反應。

1.4統計學方法 采用SPSS21.0軟件進行χ2檢驗、t檢驗。

2 結 果

2.1兩組治療效果比較 治療后觀察組治療總緩解率(78.67%，其中部分緩解59例、穩定13例、進展3例)顯著高于對照組(58.67%，其中部分緩解44例、穩定20例、進展11例；χ2=6.970，P=0.008)。

2.2兩組VEGF水平比較 治療前兩組VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C水平比較差異無統計學意義(P>0.05)，治療后兩組VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C水平均較治療前顯著下降，且觀察組顯著低于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組VEGF水平比較

2.3兩組免疫功能比較 治療前兩組免疫功能比較差異無統計學意義(P>0.05)，治療后兩組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平較治療前明顯升高，Treg、CD8+細胞水平較治療前明顯下降，且觀察組較對照組改善更顯著(P<0.05)，見表2。

表2 兩組免疫功能比較

2.4兩組細胞因子水平比較 治療前兩組細胞因子水平比較差異無統計學意義(P>0.05)，治療后兩組IFN-γ、IL-4、TNF-α水平較治療前明顯升高，TGF-β水平較治療前明顯下降，且觀察組改善較對照組更顯著(均P<0.05)，見表3。

表3 兩組細胞因子水平比較

2.5兩組血清lncRNA H19、HOTAIR水平比較 治療前兩組lncRNA H19、HOTAIR水平比較差異無統計學意義(P>0.05)，治療后兩組lncRNA H19、HOTAIR水平較治療前明顯下降，且觀察組較治療組下降更顯著(均P<0.05)，見表4。

表4 兩組血清lncRNA H19、HOTAIR水平比較

2.6兩組的不良反應比較 觀察組不良反應發生率(64.00%，其中惡心嘔吐和血小板減少各7例,發熱和皮疹各8例,骨髓抑制、白細胞減少、脫發各6例)與對照組(50.66%，其中惡心嘔吐、脫發、骨髓抑制、白細胞減少各5例，發熱、血小板減少和皮疹各6例)差異無統計學意義(χ2=2.725；P=0.099)。

3 討 論

非小細胞肺癌發病早期臨床癥狀缺乏特異性，確診時常已經是中晚期了，治療的目的主要是緩解癥狀，提高生活質量及延長生存期。化療是臨床上的主要治療方法，鉑類聯合第三代細胞毒藥物可提高治療效果，但是患者的生存預后仍然有限。隨著對非小細胞肺癌發病機制、分子靶向藥物的研究，化療聯合靶向藥物治療逐漸成為研究熱點。培美曲塞是一種新型的化療藥物，是一種多靶點抗葉酸化療藥物〔9〕，貝伐單抗可阻斷新生血管的生成，使腫瘤的供血和供氧受到影響〔10〕，本研究聯合3種藥物觀察治療效果。

培美曲塞可干擾DNA合成的代謝途徑并且可以直接整合到DNA上阻斷細胞的復制和有絲分裂，從而發揮抗腫瘤的作用，主要是因為培美曲塞的多聚谷氨酸鹽可抑制葉酸依賴酶，從多種途徑抑制了嘌呤、嘧啶的合成。而且培美曲塞可阻斷DNA復制、細胞分類所需要各種酶，使細胞分裂停止在S期，從而控制腫瘤細胞的生長〔11〕。有研究發現培美曲塞聯合順鉑方案的中位生存時間長于多西他賽方案〔12〕。貝伐單抗是VEGF的人源化單克隆抗體，可內源性競爭、結合VEGF受體，可抑制內皮細胞的有絲分裂，抑制血管的聲場，阻斷腫瘤血供，從而抑制腫瘤的生長。而且貝伐單抗還可以促進腫瘤血管的正常化，增加了血管的通透性，使組織間隙壓降低，可提高化療藥物濃度，從而增強腫瘤殺滅效果〔13，14〕。本研究結果說明，貝伐單抗結合培美曲塞與順鉑化療對非小細胞肺癌患者的治療效果較好，主要是因為3種藥物聯合可協同增效，促進了抗腫瘤作用。

腫瘤患者化療治療后可殺死部分免疫細胞，可抑制免疫功能，同時腫瘤的發生發展與免疫狀態有較大關系。在抗腫瘤的免疫中T淋巴細胞是重要的一種免疫細胞，T淋巴細胞可直接殺傷腫瘤細胞，通過激活免疫系統的其他成分來發揮抗腫瘤的效果，T淋巴細胞亞群可反映機體的免疫功能，T淋巴細胞減少可降低機體的免疫功能。Treg是一種具有負向調控作用的細胞，在正常機體內其表達水平較低，而惡性腫瘤可激活Treg細胞，使其成為具有免疫抑制功能的細胞，從而抑制免疫系統，并且促進了腫瘤發展，與肺癌的生成、發展、治療及預后有較大關系。Treg細胞可抑制CD3+、CD4+細胞，有研究發現在癌癥患者中Treg細胞水平升高，數量增多，并且和預后之間呈負相關〔15，16〕。本研究結果說明，貝伐單抗結合培美曲塞與順鉑治療后對患者的免疫能力提升效果較顯著，延緩腫瘤發展的效果較好，可能是因為貝伐單抗可調節免疫能力，抑制肺癌患者的Treg細胞，有效調節機體的免疫應答，升高T淋巴細胞水平，從而改善免疫功能。金珊珊等〔17〕研究發現，貝伐單抗聯合化療藥物治療非小細胞肺癌后可提高患者的免疫功能，與本研究結果較一致。

Treg細胞是一種免疫抑制細胞之一，可分泌抑制性的細胞因子，如TGF-β、IL-10等，從而抑制效應T細胞活化，本研究結果說明，3種藥物聯合作用抑制了TGF-β等免疫抑制因子的表達，調節了Th1與Th2的平衡，從而提高了免疫細胞的活性，增強了免疫殺傷的功能。

近年隨著對RNA等分子生物學技術的研究，較多研究發現LncRNA有較復雜的生物學功能，在多個方面參與了細胞分化、個體發育調控，并與腫瘤的發生發展有較大關系。有研究發現HOTAIR在多種癌癥中表達水平升高，如乳腺癌、胃癌、胰腺癌、食管癌、腎癌、卵巢癌等〔18〕。有研究發現，在非小細胞肺癌患者的腫瘤組織中HOTAIR水平高于正常肺組織，而且過表達HOTAIR促進A549細胞遷移、侵襲，并且與耐藥性有關〔19〕。譚楠等〔20〕研究發現，在非小細胞肺癌患者腫瘤組織>3 cm時血清中HOTAIR水平顯著高于腫瘤組織≤3 cm患者，并且Ⅲ期、Ⅳ期非小細胞肺癌血清中HOTAIR水平高于Ⅰ期、Ⅱ期，說明HOTAIR與腫瘤負荷、TNM分期有較大關系。隨著研究的逐漸增多，HOTAIR水平可能成為肺癌早期診斷的指標之一。H19基因長度是kb，定位在11p15，有研究發現lncRNA H19在胃癌、結直腸癌、腎細胞癌、乳腺癌等腫瘤組織中表達水平異常，并且和腫瘤的發生發展、治療效果、預后有較大關系。有研究發現，在非小細胞肺癌組織中lncRNA H19表達水平升高，并且和腫瘤的分期、大小、淋巴結轉移有較大關系〔21,22〕。在非小細胞肺癌組織中lncRNA H19可促進A549的增殖、侵襲和上皮-間質轉化〔23〕。本研究結果說明，貝伐單抗結合培美曲塞與順鉑治療非小細胞肺癌可顯著降低lncRNA H19、lncRNA HOTAIR水平，可能是因為3種藥物聯合抗腫瘤作用效果較好，從而降低了lncRNA H19、lncRNA HOTAIR水平。本研究結果說明，貝伐單抗結合培美曲塞與順鉑治療相對的較安全。

綜上，貝伐單抗結合培美曲塞與順鉑治療非小細胞肺癌患者的治療效果較好，并且可改善機體免疫功能，改善細胞因子水平。