2016—2018年上海某醫院手足口病流行病學特征及病原學監測結果研究*

胡海贇，蔡明毅，葛 瑋，李曉露,喬 蓉△

1.上海市兒童醫院/上海交通大學附屬兒童醫院感染科，上海 200333；2.上海市靜安區疾病預防控制中心，上海 200072;3.上海市兒童醫院/上海交通大學附屬兒童醫院防?？?，上海 200333

手足口病是由腸道病毒引起的兒童急性傳染性疾病，以手、足部出疹和口腔黏膜皰疹或潰瘍為特異表現。2008—2018年，手足口病發病人數一直位于我國法定報告傳染病的首位，主要患病群體為12歲以下兒童，尤其以5歲以下兒童多見。該病患病人數多，影響范圍廣，盡管各級監管機構、醫療機構對手足口病進行了嚴格管理、監測和防控，但是每年發病人數仍居高不下。究其原因，引起手足口病的病原體為多種腸道病毒，主要有腸道病毒71(EV71)、柯薩奇病毒A組16型(CVA16)。此外，在亞太地區和歐美國家，手足口病流行期間也分離到其他腸道病毒，包括柯薩奇病毒A組2型(CVA2)、柯薩奇病毒A組4型(CVA4)、柯薩奇病毒A組10型(CVA10)、柯薩奇病毒A組6型(CVA6)、柯薩奇病毒B組1型(CVB1)、柯薩奇病毒B組2型(CVB2)、柯薩奇病毒B組3型(CVB3)、柯薩奇病毒B組4型(CVB4)、?？刹《?、?？刹《?、?？刹《?、?？刹《?、?？刹《?、埃可病毒11、?？刹《?7、?？刹《?0等[1-3]。因此，了解手足口病不同病原體的流行現狀及患病群體的流行病學特征，對于更好地制訂防控策略有著積極意義。為此，本研究收集了2016—2018年上海市兒童醫院診斷的手足口病患兒進行流行病學特征分析和病原學研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 對2016—2018年在上海市兒童醫院感染科門診診斷為手足口病的患兒進行流行病學特征分析，對其中部分患兒的咽拭子、肛拭子標本進行病原學檢測。手足口病診斷符合原衛生部發布的《手足口病預防控制指南(2010年版)》。2016-2018年在該院診斷為手足口病的患兒共20 104例，其中男12 022例，女8 082例；年齡7個月至16歲。共采集389例患兒的咽拭子、肛拭子標本，其中男240例，女149例；年齡1～12歲。

1.2儀器與試劑 核酸自動化抽提儀(羅氏MagNA Pure LC2.0)、核酸抽提試劑盒(QIAamp Viral RNA Mini Extraction Kit)、自動化抽提試劑盒(MagNA Pure LC Total Nucleic Acid Isolation Kit)、100%乙醇、PCR試劑盒[105×反轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR) Buffer，2.5 mmol/L dNTPs，Enzyme Mix，RNase inhibitor]、人腸道病毒核酸檢測通用引物、EV71核酸檢測引物、CVA16核酸檢測引物(均購自北京金豪制藥股份有限公司)。LightCycler 480 Ⅱ熒光定量PCR儀購自羅氏制藥有限公司。

1.3方法

1.3.1標本采集 同一患兒采集肛拭子和咽拭子標本各1份，標本采集后置于病毒采樣液內，24 h冷鏈轉運至所在地區疾病預防控制中心檢驗科進行處理、分裝，-70 ℃冰箱保存備用。將采樣液內的咽拭子和肛拭子標本充分震蕩后，用冷凍離心機于4 ℃條件下以10 000 r/min離心20 min，取上清液用于核酸抽提?；純簶吮静杉瘯r間均在病程3 d內。

1.3.2核酸抽提 針對臨床標本選擇核酸抽提試劑盒，操作嚴格按說明書進行操作。吸取140 μL標本上清液，使用羅氏MagNA Pure LC2.0核酸自動抽提儀對標本核酸進行抽提。

1.3.3RT-PCR擴增 PCR反應體系按操作說明進行設定，反應在LightCycler 480 Ⅱ熒光定量PCR儀(羅氏)上進行。人腸道病毒核酸檢測通用引物序列：通用引物PE2(上游)5′-TCC GGC CCC TGA ATG CGG CTA ATC C -3′，通用引物PE1(下游)5′-ACA CGG ACA CCC AAA GTA GTC GGT CC-3′；EV71核酸檢測引物序列EV71-S(上游)5′-GCA GCC CAA AAG AAC TTC AC-3′，EV71-A(下游)5′-ATT TCA GCA GCT TGG AGT GC-3′；CVA16核酸檢測引物序列CVA16-S(上游)5′-ATT GGT GCT CCC ACT ACA GC-3′，CVA16-A(下游)5′-TCA GTG TTG GCA GCT GTA GG-3′。同一患兒采集的兩種標本中任意一項檢測陽性即判定為該病例實驗室檢測陽性結果。

1.4統計學處理 采用SPSS19.0統計軟件進行數據統計，計數資料以例數或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1腸道病毒檢測結果 389例患兒共采集778份標本(咽拭子389份、肛拭子389份)進行RT-PCR，667份標本檢測陽性，檢出率為85.73%。其中檢出EV71陽性標本99份，判定EV71陽性患兒55例，占實驗室采樣患兒數的14.14%；檢出CVA16陽性標本137份，判定CVA16陽性患兒74例，占實驗室采樣患兒數的19.02%；檢出CVA6陽性標本391份，判定CVA6陽性患兒210例，占實驗室采樣患兒數的53.98%；檢出CVA10陽性標本11份，判定CVA10陽性患兒8例，占實驗室采樣患兒數的2.06%；其他腸道病毒(PE)陽性標本29份，判定PE陽性患兒10例，占實驗室采樣患兒數的2.57%。檢出陰性標本111份，判斷陰性患兒32例，占實驗室采樣患兒數的8.23%。

對手足口病病原體的檢出結果分析發現，2016-2018年各年的病毒總檢出率均在90.00%以上，差異無統計學意義(P>0.05)。3年內感染病毒類型檢出情況見表1。2016年EV71檢出率為18.03%，CVA16為24.59%，CVA6為46.72%；2017年EV71檢出率為21.17%，CVA16為16.79%，CVA6為45.99%；而2018年EV71檢出率為3.08%，CVA16為16.15%，CVA6為69.23%。與2016年比較，2018年EV71檢出率明顯下降，CVA6檢出率顯著增加，差異均有統計學意義(χ2=38.61，P<0.001)。

表1 2016-2018年手足口病不同病原體檢出情況分析[n(%)]

2.2手足口病的患病人群分布情況

2.2.1性別分布 2016—2018年該院報告確診的手足口病患兒數分別為8 080、3 543、8 481例。3年來男性構成比均>50.00%，女性構成比在40.00%左右，男女比例為1.49∶1。3年的性別構成差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

2.2.2戶籍分布 2016—2018年3年的戶籍分布結果顯示，本市戶籍患兒數占比最高，且有逐年增高的趨勢；外市和外籍患兒數占比為0.09%～6.77%。3年戶籍構成情況比較，差異有統計學意義(χ2=23.94，P<0.001)。見表2。

2.2.3職業分布 根據流行病調查卡上職業標準進行分類，2016—2018年3年散居構成比為50.72%～60.95%，均>50.00%；幼托兒童占30.59%～42.47%；學生占4.50%～6.36%。3年職業分布構成情況比較，差異有統計學意義(χ2=663.07，P<0.001)。見表2。

表2 2016—2018年手足口病人群分布情況 [n(%)]

2.3手足口病的發病時間分布

2.3.1手足口病發病時間分布 2016、2018年的月度病例報告數分析發現，流行高峰通常在該年的5—8月，2017年的總病例數僅為3 543例，較2016年和2018年明顯減少，但2017年的流行高峰出現在當年的10—12月。見表3。

表3 2016—2018年手足口病發病時間分布[n(%)]

續表3 2016—2018年手足口病發病時間分布[n(%)]

2.3.2不同病原體的檢出時間分布 分析EV71、CVA16、CVA6、CVA10及PE的每月檢出情況，發現EV71、CVA6、CVA16檢出率在時間分布上差異有統計學意義(P<0.01)，EV71、CVA16在1—6月(上半年)檢出率高于其他月份，CVA6在7—12月(下半年)的檢出率高于其他月份。見表4。

表4 不同病原體的檢出時間分布分析[n(%)]

3 討 論

手足口病是一種兒童感染性出疹性疾病，發病群體主要為5歲以下幼齡期兒童，癥狀主要表現為手足部位的皰疹樣皮疹和口腔黏膜的損害。

本研究對2016—2018年診治的手足口病患兒流行病學資料進行回顧性分析，3年共收集20 104例患兒，男女發病比例為1.49∶1，與蘭瑩瑩等[4]研究的結果基本接近。對手足口病的戶籍分布數據分析發現，本研究收集的20 104例患兒中本市戶籍的占比最高，且逐年增高；外市和外籍的患兒數占比為0.09%～6.77%。3年戶籍構成情況比較，差異有統計學意義(P<0.05)，該結論與文獻[5-6]報道的結論并不一致，分析原因可能是收集病例的所屬地域范圍不同所致。

自2008年安徽阜陽EV71感染出現手足口病重癥和死亡病例后，近年來該病發病率雖高但致死率低，重癥病例報告數少[7-8]。有研究開展手足口病的流行病學調查發現，2013年流行病毒株以EV71為主，CVA16次之，而目前以CVA6為主，EV71的檢出率逐年下降[9]。本研究各病原體檢出情況：2016年EV71為18.03%，CVA16為24.59%，CVA6為46.72%；2017年EV71為21.17%，CVA16為16.79%，CVA6為45.99%；而2018年EV71為3.08%，CVA16為16.15%，CVA6為69.23%。這提示2018年相對于2016年EV71的檢出率明顯下降，CVA6的檢出率有增加，差異有統計學意義(P<0.05)。該結論與張曉玲等[10]的研究結果基本一致。黃威等[11]報道湖南省自2013年起CVA6成為優勢病原體；全國其他省份也陸續報道CVA6暴發流行，檢出率逐年升高[12]。不僅國內如此，2008年芬蘭暴發CVA6感染引起的手足口病[13]，同年新加坡報道引起手足口病的前3位病原體分別是CVA6、CVA10和EV71，其中CVA6和CVA10檢出率較高[14]；2011—2012年美國部分州報道CVA6檢出率高達74.0%[3]。既往研究者多關注EV71，隨著手足口病流行病毒株的變化，CVA6需要引起重視。

本研究對2016—2018年這3年的月度病例報告數統計分析發現，2016、2018年流行高峰在該年的5—8月，2017年的總病例數僅為3 543例，較2016和2018年的8 000例以上明顯減少，呈現一年高發一年低發的表現，但2017年的流行高峰出現在當年的10—12月。具體分析病原體的檢出時間分布情況，發現EV71、CVA16大致在每年的上半年流行，CVA6在下半年出現一波流行，并且CVA6在2016—2018年檢出率較高，流行季節在每年的7—12月。該結論與葛艷玲等[15]研究手足口病的季節流行特征的結果基本一致；與蔡明毅等[9]研究上海地區某醫院手足口病病例春夏季EV71和CVA16檢出率較高，秋冬季CVA6檢出率較高相符。PODIN等[16]報道每隔兩年手足口病呈現周期性高峰流行現象，由于本研究累計年度僅3年，故對該結論不敢斷言，需進一步持續監測手足口病病例數據以期得到更準確的結論。

綜上所述，手足口病發病病例數多，主要感染年幼兒童，男性感染多于女性，散居和幼托兒童占發病病例的大多數，感染的優勢病原體出現轉換，故對手足口病的持續監測對防控政策的制訂和疾病的防治具有重大意義。