譚知涵,孫曉杰*,席北斗,盧雪霜,李秋虹,莫晶晶,張 軍
電場對污泥堆肥富里酸結構特征的影響
譚知涵1,2,孫曉杰1,2*,席北斗1,3,盧雪霜1,2,李秋虹1,2,莫晶晶1,2,張 軍1,2
(1.桂林理工大學,廣西環境污染控制理論與技術重點實驗室,廣西 桂林 541004;2.桂林理工大學,巖溶地區水污染控制與用水安全保障協同創新中心,廣西環境污染控制理論與技術重點實驗室科教結合科技創新基地,廣西 桂林 541004;3.中國環境科學研究院,國家環境保護地下水污染模擬與控制重點實驗室,北京 100012)
為了研究電場對污泥堆肥富里酸結構特征及電子轉移能力(ETC)的影響,以市政污泥和米糠為原料,設置施加5V的直流電場(T1)和不施加電場(CK)的兩個堆肥進行對比實驗.通過三維熒光-平行因子分析(EEM-PARAFAC)、紫外可見光譜(UV-vis)、傅里葉紅外光譜(FTIR)結合二維相關光譜(2DCOS)分析堆肥過程中富里酸結構和組成變化.通過電化學方法測定了堆肥富里酸的電子接受能力(EAC)和電子供給能力(EDC).結果表明,類色氨酸、類富里酸和類胡敏酸是堆肥FA的主要組分,隨著堆肥的進行,FA中類色氨酸物質減少,類富里酸和類胡敏酸含量增加,電場能夠促進FA在堆肥過程中類色氨酸的降解和類胡敏酸的形成,提高了FA的芳香性、分子量和腐殖化程度.電化學分析結果表明,FA的ETC呈現先增后減的趨勢.相比CK處理,施加電場降低了FA的EDC,但同時增強了其EAC,使得堆肥后期的FA具有更強的ETC.結果將有助于進一步了解污泥堆肥過程中FA的形成過程及其氧化還原特性.
污泥堆肥;電場;富里酸;二維相關光譜;平行因子分析;結構組成;電子轉移
堆肥是一種處理市政污泥的有效手段,其本質是在微生物作用下有機物的礦化和腐殖化過程.腐殖質作為堆肥過程的主要產物,不僅可以改善土壤理化性質,而且具有吸附和絡合污染物的功能[1].此外,腐殖質還具有氧化還原活性,能夠影響環境中重金屬和有機污染物的降解和轉化.因此,腐殖質的形成過程和腐殖質的質量是決定堆肥產品土地應用價值的關鍵因素[2].
不少研究表明,施加電場是一種促進堆肥腐殖化的有效手段.已有研究提出在堆肥中施加一個低壓直流電場,達到提高堆肥溫度,加速腐殖化過程的目的[3].還有研究表明,施加電場增強了堆肥過程微生物的代謝,堆肥產品中腐殖質和胡敏酸含量相比對照分別提高了19%和69%[4].電場還能夠加速溶解性有機質的芳香化和腐殖化,有效縮短堆肥腐熟時間[5].
富里酸(FA)是腐殖質的重要組分之一[6],是一種分子量較小的芳香性有機酸,具有良好的溶解性和流動性,已被廣泛用于改善土壤功能,如促進養分吸收,改善土壤結構,增強微生物活性等[7-9].同時,與腐殖質其他組分相比,FA 中含有更多具有氧化還原活性的官能團(如羧基、羥基等)[10-11],這使得FA具有良好的污染物親和力和電子轉移能力(electron transfer capacity,ETC),能夠影響土壤中的重金屬和有機污染物的氧化還原和轉化[12].而這些特性主要由FA的結構和組成決定[13].在堆肥過程中,FA的結構特征會發生轉化,導致其電子轉移能力的改變.有研究表明,腐殖質的電子接受能力與芳香性呈正相關關系[14].也有研究表明,污泥堆肥中溶解性有機質轉移電子的能力與有類腐殖質物質有關[15-16].因此,揭示 FA 在堆肥過程中結構特征及其電子轉移能力的變化是有必要的.
已開展的研究主要從光譜學角度研究電場對堆肥有機物結構特征的影響,而很少從電化學角度研究堆肥有機物演化規律,施加電場是否會影響腐殖質組分的氧化還原特性仍不清楚.基于此,本文假設在污泥堆肥中施加電場能夠促進腐殖化進而影響FA的結構特征及氧化還原特性.本研究通過設置施加電場和不施加電場的污泥堆肥進行對照實驗,并測定了堆肥各個階段FA的ETC,從電化學角度分析有機物演化規律.采用紫外-可見光譜,三維熒光光譜,紅外光譜等多種光譜學技術對堆肥FA結構和組成進行表征,結合二維相關光譜和平行因子分析等化學計量學方法,揭示了電場對堆肥FA結構特征及電子轉移能力的影響,分析施加電場強化堆肥腐殖質電子轉移能力的可行性.結果將有助于進一步了解污泥堆肥過程中FA的形成過程及其氧化還原特性.
堆肥反應器如圖1所示.堆肥在2個體積為60L的反應器(直徑 45cm,高度52cm)中進行,反應器的外壁包裹玻璃棉(厚度約5cm)用于保溫.反應器底部連接轉子流量計和空氣泵,底部鋪有兩層直徑為5cm的塑料空心球,空心球上部覆蓋一層紗網.參考付濤等[5]的方法,采用直流電源(UTP1306S,優利德科技)進行供電,在反應器的內壁周圍放置一塊圍繞成圓形的304不銹鋼板作為正極(長120cm,寬40cm,厚0.3cm),將石墨棒(直徑5cm,高40cm)放入堆體的中心作為負極,兩個反應器具有相同的構造.設置2個堆肥施加的直流電壓分別為0V(CK)和5V(T1).

圖1 堆肥反應器示意
1:直流穩壓電源2:導線 3.石墨棒4:保溫材料(玻璃棉) 5:紗網 6:塑料空心球7:通氣導管 8:不銹鋼板9:轉子流量計 10:空氣泵
堆肥主料為桂林市雁山污水處理廠的板框壓濾脫水污泥,作為堆肥輔料的米糠購自雁山鎮田園米廠.表1顯示了堆肥物料的初始理化性質.將市政污泥和米糠按質量比為2:1的比例混合均勻,將含水率控制在60%左右后裝入兩個反應器中.采用連續強制曝氣方式,曝氣流量均設置為0.2L/(kg干物質×min).分別在第0,3,6,9,12,16,24,32,40d對堆體上、中、下3個不同的深度采集各100g樣品后混合均勻,每次取樣前進行翻堆.

表1 初始物料理化性質
采用國際腐殖酸協會(IHSS)提供的方法提取FA:稱取20g冷凍干燥過100目篩后的堆肥樣品與浸提液(0.1mol/L Na4P2O7和0.1mol/L NaOH以1:1混合所得)以比例1:10 (g/mL)混合后200r/min振蕩提取24h,后將混合液10000r/min高速離心20min,將離心后的上清液通過0.45μm纖維濾膜,濾液用6mol/L的HCl將pH值調節至1,靜置12h出現沉淀,4000r/min離心20min,收集上清液.將上清液通過XAD-8型樹脂并棄去出水,用超純水淋洗樹脂柱至中性.后用 0.1mol/L NaOH沖洗樹脂柱并收集洗脫液,洗脫液隨后通過IR120氫型陽離子交換樹脂,得到FA溶液.使用總有機碳分析儀(Multi N/C 3100,德國耶拿)測定FA溶液的DOC濃度,將一部分FA樣品DOC濃度調整到10mg/L用于紫外-可見光譜和熒光光譜分析,另一部分經冷凍干燥后用于紅外光譜分析.
采用熒光光度儀(Aqualog,法國HORIBA JY)測定三維熒光光譜,激發波長(x)掃描范圍為200~ 450nm,發射波長(m)掃描范圍為280~550nm;狹縫寬帶均設置為5nm.所有樣品測定時均需要扣除超純水空白以減少瑞麗散射和拉曼散射的影響[17].
紫外可見光譜采用紫外-可見分光光度計(UV– 6100,上海元析)測定,掃描范圍為200~800nm,掃描間隔為1nm.
將1mg冷凍干燥后的FA樣品與300mg烘干后的KBr(光譜純)混合,然后將混合物在100MPa下壓片后使用傅里葉變換紅外光譜儀(Nicolet iS20,美國賽默)測定紅外光譜,掃描波長范圍為4000~450cm-1,分辨率為4cm-1,掃描次數為32次.
使用電化學工作站(CHI660D,上海辰華)測定FA的電子轉移能力.采用的三電極電解池系統如唐朱睿等[16]所述,玻碳電極作為工作電極,鉑柱電極作為對電極,Ag/AgCl電極作為參比電極.采用Amperomentric i-t Curve法測定,整個測定過程中持續向電解池中通入氮氣以保持缺氧狀態.首先將2.5mL磷酸鹽緩沖溶液(0.2mol/L)和2.5mL KCl (0.2mol/L)作為電解質加入電解池中.將工作電極電位設置為+0.61V,ABTS(2,2-聯氨-雙(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽)作為介導劑測定電子供給能力(EDC),工作電極電位設置為-0.49V,DQ (1,1¢-乙撐-2,2¢-聯吡啶二溴鹽)作為介導劑測定電子接受能力(EAC).加入1mL樣品(DOC濃度統一調整為50mg/L)穩定運行1000s后獲得電流—時間曲線,計算其積分面積,使用He等[18]描述的公式計算EDC和EAC值,ETC為EDC和EAC之和.
將CK和T1共18個FA樣品的三維熒光光譜數據轉化為三維矩陣,使用MATLAB 2018a (Mathworks,Natick,MA)中的DOMFluor工具箱進行平行因子分析[19].腐殖化指數(HIX)為x在254nm下,m在435~480nm和300~345nm兩區間內的熒光積分值之比.x在370nm 波長下,Em在470和520nm波長處熒光強度的比值為熒光指數(FI).x在310nm時,m在380與430nm處的熒光強度比值記為生物源指數(BIX).
在紫外-可見光譜中波長254和280nm處的吸光度與DOC比值的100倍分別記為SUVA254和SUVA280.253與203nm處吸光度的比值記為253/203,226~400nm區間內的吸光度面積積分記為226~400;275~295nm及350~400nm波長范圍內曲線斜率的比值記為R[20].
以堆肥時間為外界擾動,波數為變量,對兩個處理750~1800cm-1波長的紅外光譜進行二維相關分析,使用Origin2018繪制紅外光譜圖和二維相關光譜圖.
兩個處理共18個樣品的熒光光譜數據經平行因子分析后分離出3個組分(圖2),組分C1(x=250/ 320nm,m=438nm)為類富里酸物質組分[8].組分C2(x=275nm,m=334nm)位于傳統的T峰(x= 270~280nm,m=320~350nm)區域,為類色氨酸熒光峰,屬于類蛋白物質,該組分與微生物活動密切相關[21].組分C3(x=260/400nm,m=500nm)表現為一強一弱的雙峰,均為類胡敏酸物質.C1和C3均為類腐殖質物質.

圖2 通過平行因子分析得到FA的3個組分及其熒光載荷
通過最大熒光強度(Fmax)來反映堆肥不同階段各組分的相對含量.FA各組分的占比變化如圖3所示.C1和C3在堆肥前期均略有下降,這可能是由于一部分可溶性的腐殖質類物質被微生物分解導致,12d以后,C1和C3的相對含量穩步增加,說明逐步生成分子量大、結構復雜、共軛程度高的類腐殖質物質.FA中C2在堆肥前期有一定增長,這可能是由于堆肥高溫期微生物生長代謝活動劇烈,產生大量可溶性的代謝產物和殘體.隨著堆肥的進行,微生物活性降低,微生物代謝產物減少,類色氨酸等結構簡單、易降解的蛋白類物質被降解,逐漸生成結構更為穩定的類富里酸物質和類胡敏酸物質,C2的相對含量下降,C1和C3的相對含量增加.堆肥結束時,CK和T1處理的C1含量相差不大,C2含量分別為27%和24%,C3含量分別為19%和22%,這說明T1促進了堆肥過程中C2的降解和C3的形成.該結果與付濤等[5]的研究結果相似,該研究證明了電場能夠促進雞糞堆肥有機物中類蛋白物質的分解和類腐殖質物質的形成.
HIX可反映有機物中腐殖化程度[22].如圖4(a), T1處理的HIX在0~3d低于CK處理,而在6~40d高于CK處理,在堆肥結束時,CK和T1處理的HIX分別達到1.180和1.513,這說明施加電場顯著提高了FA的腐殖化程度,高腐殖化程度的FA相比低腐殖化程度的FA具有更強的污染物吸附和絡合能力,因此T1處理中的FA在土壤污染治理方面具有更高的應用價值[23].FI反映了芳香物質和非芳香物質對腐殖質熒光強度的相對貢獻率,可區分腐殖質的來源.堆肥過程中兩個處理FA的FI 略有上升,這可能是由于FA作為一種不穩定的小分子芳香物質,堆肥前期兩個處理FA的FI均小于1.4,說明堆肥過程中的FA主要來源于市政污泥-米糠物料中自身的FA.隨著堆肥的進行,兩個處理FA的FI逐漸增加到1.4左右,說明堆肥后期的FA來源同樣受到自身源作用的影響,可能由微生物分解有機物料產生[24].BIX反映了新產生的腐殖質組分在整體腐殖質組分中所占的比例.BIX在0.6~0.7之間時,FA具有較少的自生組分,在0.7~0.8之間時則具有中度新近自生源特征[25].堆肥過程中兩個處理的BIX在0.6~0.75之間波動,CK處理的BIX值有所下降,而T1處理的BIX呈緩慢增加的趨勢,這說明T1處理中新生成的FA含量更高.FI和BIX的結果表明,堆肥FA的來源以外源輸入為主,其次為堆肥過程中微生物活動產生.

圖3 堆肥不同階段形成的FA組分占比變化

圖4 堆肥過程中FA的HIX, FI和BIX的變化
SUVA254和226~400通??煞从秤袡C物中芳香化合物及不飽和C=C雙鍵的變化,與FA的芳香性成正比[26].SUVA254在堆肥過程中呈現逐漸增加的趨勢,且T1處理的SUVA254顯著高于CK處理,說明施加電場可以提高堆肥過程中FA的芳香化程度.兩個處理的226~400隨著堆肥的進行逐漸上升,但兩個處理間的差異不大.253/203可評價FA中苯環上取代基的種類,253/203的值增大說明取代基上的羰基、羧基、羥基、酯類等含氧活躍基團含量增加,該值減小說明取代基上的脂肪鏈等穩定基團增多.兩個處理的253/203值變化相近,總體上呈增加的趨勢,這說明堆肥過程中FA芳香環上的脂肪鏈降解生成羥基、羰基等官能團,這些官能團能夠配位絡合重金屬,因此堆肥過程能夠提高FA絡合重金屬的能力[27].兩個處理的253/203值在12~16d都出現了明顯的下降,這可能是由于部分含氧官能團(如羧基)轉化為CO2釋放到環境中[28].R和SUVA280可表征FA的分子量大小[18].R與分子量具有負相關關系,而SUVA280與分子量具有正相關關系.兩個處理的R隨著堆肥的進行逐漸下降,而SUVA280逐漸增加,說明FA從結構簡單的小分子物質逐步向結構復雜的大分子物質轉化子物質轉化,堆肥結束時,T1處理的R小于CK處理而SUVA280大于CK處理,這說明T1處理中的FA具有更高的分子量.結果表明,相對CK處理,T1處理中FA的分子量較大,芳香性和腐殖化程度更高.

圖5 堆肥過程中紫外-可見光譜參數的變化
堆肥過程FA的紅外光譜變化如圖6所示.在3300, 2940, 1720, 1660, 1540, 1450, 1410, 1225和1070cm-1處都觀察到吸收峰.3300cm-1處的吸收峰來自于酚類化合物—OH官能團的伸縮振動,通常在碳水化合物中出現[29];2940cm-1處的吸收峰來自于脂肪族化合物的C—H伸縮振動[30];1720cm-1處的吸收峰由羧基C=O伸縮振動引起[31];1660cm-1附近的強吸收峰由芳香環上的C = C伸縮振動引起[32],在堆肥結束時(40d),T1處理的該峰明顯強于CK處理;1570cm-1處吸收峰由酰胺II型化合物的N—H變形和C=N伸縮引起;1225cm-1處的吸收峰代表酰胺 III 或芳香醚的C—O—C鍵[33].1070cm-1處的吸收峰代表多糖類物質,一般由植物中的淀粉纖維類物質引起,可能來源于堆肥的原料米糠.
由于使用了完全相同的物料進行堆肥,兩個處理FA的紅外吸收光譜都非常相似,因此可用主峰間強度的比值來評估不同官能團的分解程度.兩個處理的1660/2940(芳香碳/脂肪碳)都呈現先下降后上升的趨勢,這可能是由于堆肥初期脂肪族化合物和FA分解為小分子有機質,而堆肥中后期微生物利用難降解的木質素產生芳香族結構物質,使得芳香碳含量增加[34].CK組的1660/1540(芳香碳/酰胺II)在堆肥過程中略有增加,而T1處理出現下降,這說明CK處理對酰胺化合物的降解效果更好.CK處理的1660/1070(芳香碳/多糖碳)在堆肥過程中略有下降,而在T1處理中從1.60增加到2.09,顯著高于CK處理,這說明電場可能促進FA中多糖類物質的降解.

圖6 FA的紅外光譜圖

表2 堆肥過程中FA的紅外光譜主要吸收峰的強度比值
如圖7所示,在兩個處理的同步圖中共出現了6個正的自動峰:1720/1720, 1660/1660, 1570/1570, 1450/1450, 1225/1225和1070/1070,其中1660/1660處的峰強度明顯高于其他峰,說明FA的芳香族化合物在堆肥過程中的變化最為顯著.同步圖中出現的交叉峰均為正峰,這意味著各官能團在堆肥過程中變化方向一致,可能均為降解過程.根據Noda規則[35],有機物轉化次序為:1570cm-1>1070cm-1> 1450cm-1>1225cm-1>1720cm-1,故CK處理堆肥過程中FA轉化順序為:酰胺II類>多糖>酚類>酰胺III類或芳香醚>羧基.對于T1處理,轉化次序為: 1720cm-1>1225cm-1>1570cm-1>1450cm-1>1070cm-1,即羧基>酰胺III類或芳香醚>酰胺II類>酚類>多糖.相比之下,T1處理中羧基結構的降解先于蛋白質和多糖,而羧基是形成腐殖質的重要前體[36].以上結果表明,兩個處理堆肥過程中FA的轉化順序存在差異,施加電場可能會促進羧基結構的優先降解,從而加速了FA的腐殖化進程.

FA具有電子穿梭體特性,可加快還原性電子供體和氧化性污染物之間反應的速率,從而加速污染物的轉化和降解[37].堆肥過程FA的電子轉移能力的變化如圖8所示.兩個處理的EDC在堆肥過程中呈現先增加后減少的趨勢,T1處理的EDC在171.85~294.49μmol/gC范圍內變化,CK處理的EDC在173.43~382.2μmol/gC范圍內變化,這說明CK處理的FA可能含有更多的供電子基團.CK處理的EAC在158.06~242.971μmol/gC之間波動,T1處理的EAC在175.49~385.14μmol/gC之間波動,這說明T1處理中的FA具有更強的得電子能力.電場可能促進了堆肥過程中電子向O2的流動,加強了堆肥過程中的好氧反應,使得FA的官能團被氧化,從而具有更強的得電子能力[3].如圖8所示,兩個處理FA的ETC呈現先增加后降低的趨勢,在堆肥結束時兩個處理的ETC均高于堆肥初始值,這說明堆肥過程提高了FA的氧化還原能力,CK處理在堆肥前期具有更強的ETC,而T1處理在堆肥后期ETC更強.說明FA在堆肥的中期階段具有更強的氧化還原活性,而在堆肥后期腐殖化過程中,FA逐漸降解或轉化為腐殖質前體或更為穩定的類胡敏酸物質,導致其氧化還原活性降低[38].

圖8 FA在堆肥過程中電子轉移能力的變化
(a)電子供給能力和電子接受能力;(b)電子轉移能力
相關性分析結果顯示(圖9),兩個處理的HIX與C1,C3呈現極顯著正相關(<0.01),說明類富里酸,類胡敏酸的形成和芳香性的增強有利于FA腐殖化程度的提高.兩個處理的C1和C3與SUVA254呈極顯著正相關,T1處理的253/203與C1和C3呈顯著正相關,而在CK處理中相關性不明顯.說明FA中腐殖質組分的增加和芳環上極性含氧官能團的增多有關.SUVA254和A226~400與HIX,C1, C3呈現不同程度的正相關關系,這說明FA的腐殖化程度,類富里酸和類胡敏酸的形成受到芳香族苯環結構的影響.在T1處理中R與HIX,C1,C3呈負相關關系,這說明小分子聚合成大分子能夠促進腐殖化過程.兩個處理中各參數和電化學指標之間沒有觀察到顯著的相關性,其原因還需要進一步探討.

圖9 堆肥富里酸各參數之間的相關性分析
*表示顯著相關,<0.05, **表示極顯著相關,<0.01
光譜學表征顯示,類色氨酸、類富里酸和類胡敏酸是堆肥FA的主要組分,隨著堆肥的進行,FA中類色氨酸物質減少,類富里酸和類胡敏酸含量增加,電場能夠促進FA在堆肥過程中類色氨酸的降解和類胡敏酸的形成,提高了FA的芳香性、分子量和腐殖化程度,其中羧基結構的快速降解可能是關鍵的結構變化.電化學分析結果表明,堆肥過程能夠提高FA的ETC,堆肥過程中FA的ETC呈現先增后減的趨勢.相比對照處理,施加電場降低了FA的EDC,但同時增強了其EAC,使得堆肥后期的FA具有更強的ETC.
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Effect of electric field on structure of fulvic acid during sludge composting.
TAN Zhi-han1,2, SUN Xiao-jie1,2*, Xi Bei-dou1,3, LU Xue-shuang1,2, LI Qiu-hong1,2, MO Jing-jing1,2, Zhang Jun1,2
(1.Guangxi Key Laboratory of Environmental Pollution Control Theory and Technology, Guilin University of Technology, Guilin 541004, China;2.Collaborative Innovation Center for Water Pollution Control and Water Safety in Karst Area, Guangxi Key Laboratory of Environmental Pollution Control Theory and Technology for Science and Education Combined with Science and Technology Innovation Base, Guilin 541004, China;3.State Environmental Protection Key Laboratory of Simulation and Control of Groundwater Pollution, Chinese Research Academy of Environmental Sciences, Beijing 100012, China)., 2023,43(1):244~254
Fulvic acid (FA) is an important component of compost-derived humic substances, and its structure and electron transfer capacity are vital factors causing environmental effects. In order to investigate the influence of electric field on structural characteristics and electron transfer capacity (ETC) of FA that was formed during sludge composting, municipal sludge and rice bran were applied as raw materials, and two composting experiments, i.e.,one with a 5V direct current electric field and the other with no electric field (CK),were set up. Excitation-emission matrix florescence spectra coupled with parallel factor analysis, ultraviolet and visible spectroscopy, and Fourier transform infrared spectroscopy combined with two-dimensional correlation analysis were employed to investigate the evolution of the structure and composition of FA during composting. In addition, electrochemical methods was applied to determine the electron accepting capacities (EAC) and electron donating capacities (EDC) of the compost-derived FA. The results revealed that the major components of compost-derived FA were tryptophane-like, fulvic-like, and humic-like substances. Tryptophane-like substances in FA decreased during composting, whereas fulvic-like and humic-like substances increased during the process. Notably, the electric field promoted the degradation of tryptophan-like substances and the formation of humic-like substances, which inceased the aromatic degree, molecular weight, and humification of the FA. Results obtained from electrochemical analysis showed that the ETC of compost-derided FA increased initially and then decreased, Compared to the CK treatment, electric field application enhanced the EAC of compost-derided FA, though it reduced the EDC of FA, resulting the ETC of the FA from the later stage of composing was the highest. These results facilitated to elucidate the formation process of the FA and its redox properties during sludge composting.
sludge compost;electric field;fulvic acid;two-dimensional correlation spectrum; parallel factor analysis;structural composition;electron transfer
X705
A
1000-6923(2023)01-0244-11
譚知涵(1998-),男,貴州安順人,碩士研究生,主要從事固體廢物處理與資源化研究.發表論文2篇.
2022-05-31
廣西自然科學基金資助項目(2018GXNSFGA281001);國家自然科學基金資助項目(51868011);廣西科技計劃項目資助(AD18126018);廣西研究生教育創新計劃項目資助(YCSW2022310)
* 責任作者, 教授,sunxiaojie@glut.edu.cn