炎性細胞因子、DBH基因多態(tài)性、煙酒習(xí)慣與帕金森病相關(guān)性

宋秋霞 張曉鶯 劉燕 郭淼 王琳琳 王琳

(新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，新疆 烏魯木齊 830002)

帕金病病(PD)是一種常見的神經(jīng)退行性疾病，目前病因未明，神經(jīng)炎癥、基因遺傳、環(huán)境因素等均有參與其中。目前，針對炎癥-遺傳、炎癥-環(huán)境交互作用對PD影響的研究相對少見。本研究選擇白細胞介素(IL)-6、IL-1β、CXCL5 3個炎性指標，并在同一研究對象中分析其DBH-5-TaqⅠ多態(tài)性和收集其煙酒習(xí)慣特點，以探討神經(jīng)炎癥及神經(jīng)炎癥與DBH-5-TaqⅠ多態(tài)性或煙酒習(xí)慣聯(lián)合作用對PD的影響。

1 對象與方法

1.1研究對象 病例組：2017年2月至2019年5月在新疆喀什地區(qū)農(nóng)三師51團和53團、阿克蘇4團、芳草湖農(nóng)場、獨山子地區(qū)流行病學(xué)調(diào)查過程中及新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團醫(yī)院確診的PD患者，共94例。病例均符合英國腦庫的診斷標準〔1〕。排除標準：(1)特發(fā)性震顫；(2)繼發(fā)性帕金森疊加綜合征；(3)嚴重癡呆、構(gòu)音障礙影響情感表達；(4)同時患有其他精神疾患。對照組：同一時期收集的非腦部器質(zhì)性疾病，無錐體外系疾病史，無神經(jīng)系統(tǒng)變性病、精神疾患及家族史，在性別、年齡、文化上與PD組匹配的健康人，共110例。兩組性別、年齡、受教育年限差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。該項研究的受檢者均簽署知情同意書。

表1 兩組一般資料比較

1.2研究方法

1.2.1基本資料、煙酒習(xí)慣資料收集 采用統(tǒng)一的調(diào)查表，由一名研究生和副主任醫(yī)師對研究對象進行面對面調(diào)查。內(nèi)容主要包括一般資料(姓名、性別、年齡、民族、出生年月、職業(yè)、文化水平、受教育年限、家庭情況等)和煙酒習(xí)慣〔吸煙史：本人和(或)其配偶在3個月內(nèi)抽煙量超過100支。飲酒史：連續(xù)3個月以上每周至少飲酒1次，每次至少>50 g〕。

1.2.2血清炎性細胞因子表達水平和DBH-5-TaqⅠ多態(tài)性測定 研究對象均在空腹狀態(tài)下抽取靜脈血3 ml，乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，靜置30 min后進行離心處理(速度3 000 r/min，時間10 min)，離心后將標本分為血清和血細胞部分，均置于-80℃冰箱保存。(1)血清部分采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定IL-6、IL-1β、CXCL5表達含量，操作均嚴格遵守標準操作程序進行。(2)血細胞部分使用天根生化科技公司血液基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA。應(yīng)用PCR-RFLP法完成DBH基因5 TaqⅠ多態(tài)性分析，可見3種基因型：T/T純合子、C/C純合子、T/C雜合子。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件進行t檢驗、方差分析、χ2檢驗、非參數(shù)檢驗。

2 結(jié) 果

2.1炎性指標比較 病例組IL-6、IL-1β、CXCL5表達水平與對照組比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(均P>0.05)。將研究對象按照性別分層：男性病例組IL-6表達水平較對照組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；男性病例組IL-1β、CXCL5表達水平與對照組比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(均P>0.05)。女性病例組IL-6、IL-1β、CXCL5表達水平與對照組比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(均P>0.05)。將研究對象按照年齡分層：年齡>65歲病例組CXCL5表達水平較對照組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.024)；年齡>65歲病例組IL-6、IL-1β表達水平與對照組比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。年齡≤65歲病例組IL-6、IL-1β、CXCL5表達水平與對照組比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(均P>0.05)。見表2。

2.2兩組煙酒習(xí)慣比較 病例組和對照組間吸煙史(61 vs 79例)、飲酒史(40 vs 41例)均無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.288、0.442)。

表2 血清樣本中IL-6、IL-1β、CXCL5水平

2.3DBH-5-TaqⅠ多態(tài)性與PD的相關(guān)性 DBH-5-TaqⅠ 3種基因型的分布在病例組、對照組間無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；DBH-5-TaqⅠ兩種等位基因的分布在病例組、對照組間無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

2.4炎性指標、煙酒習(xí)慣聯(lián)合作用與PD的相關(guān)性分析 無吸煙史病例組IL-6表達水平較對照組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；無吸煙史病例組IL-1β、CXCL5表達水平較對照組比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。有吸煙史、有飲酒史、無飲酒史病例組IL-6、IL-1β、CXCL5表達水平較對照組比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(均P>0.05)。見表4。

表3 兩組DBH-5-TaqⅠ多態(tài)性分布比較〔n(%)〕

表4 炎性指標、煙酒習(xí)慣聯(lián)合作用與PD相關(guān)性

2.5炎性指標、DBH-5-TaqⅠ多態(tài)性聯(lián)合作用與PD的相關(guān)性 攜帶T/C基因型病例組CXCL5表達水平較對照組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；攜帶T/C基因型病例組IL-6、IL-1β表達水平較對照組比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。攜帶C/C基因型和T/T基因型病例組IL-6、IL-1β、CXCL5表達水平較對照組比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。見表5。

2.6煙酒習(xí)慣、DBH-5-TaqⅠ多態(tài)性聯(lián)合作用與PD的相關(guān)性 通過表3可以看到研究對象中T/T基因型攜帶者在病例組和對照組均偏少，故此處統(tǒng)計C/C基因型與C/T基因型之和為C基因攜帶者，計T/T基因型為非C基因攜帶者。結(jié)果顯示，在有吸煙史、無吸煙史人群中，C基因攜帶率和非C 基因攜帶率的分布在病例組和對照組間均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；在有飲酒史、無飲酒史人群中，C基因攜帶率和非C 基因攜帶率的分布在病例組和對照組間均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；煙酒習(xí)慣和DBH-5-TaqⅠ多態(tài)性之間并不存在聯(lián)合作用影響PD的發(fā)生。見表6。

表5 炎性指標、DBH-5-TaqⅠ多態(tài)性聯(lián)合作用與PD相關(guān)性

表6 煙酒習(xí)慣、DBH-5-TaqⅠ多態(tài)性聯(lián)合作用與PD的相關(guān)性〔n(%)〕

3 討 論

一系列運動癥狀或非運動癥狀嚴重影響PD患者的生活質(zhì)量，由此帶來社會、家庭、經(jīng)濟及公共衛(wèi)生問題越來越嚴重。在本課題組的前期研究〔2，3〕中發(fā)現(xiàn)環(huán)境因素、基因位點多態(tài)性、基因-環(huán)境之間存在交互作用均可影響新疆地區(qū)PD的發(fā)病。神經(jīng)炎癥也是PD發(fā)病的重要機制，為此，本研究選擇部分炎性、環(huán)境、基因多態(tài)性指標，在同一研究對象中分析各自其分布特點，探討其是否存在單獨或者聯(lián)合作用對PD的發(fā)生影響。

本文未發(fā)現(xiàn)PD患者血清IL-6表達水平與正常人之間存在差異性，這雖然與研究〔4〕的結(jié)論一致，卻與眾多發(fā)現(xiàn)PD患者血清IL-6水平高于正常人群的研究〔5～9〕結(jié)果不同；當(dāng)進一步按照性別、年齡進行分組后發(fā)現(xiàn)男性PD患者血清IL-6表達水平明顯低于正常男性人群水平，這與研究〔10〕的發(fā)現(xiàn)存在一定的相似性，提示性別對炎癥細胞因子IL-6的釋放可能存在影響，其在男性PD組的釋放低于正常男性人群。本研究沒有發(fā)現(xiàn)PD患者血清IL-1β表達水平與正常人之間存在差異性，即使按照性別、年齡進行了分組分析，也沒有發(fā)現(xiàn)不同性別、年齡PD患者和正常人之間IL-1β的表達水平存在不同，這與發(fā)現(xiàn)PD患者血清IL-1β水平高于正常人群的研究〔6，8〕結(jié)論存在不一致性。中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生神經(jīng)炎癥的特點是小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞的激活，產(chǎn)生大量的炎癥因子、趨化因子對血腦屏障產(chǎn)生破壞作用、促進多巴胺能神經(jīng)元的退行性變性和壞死，目前尚無針對趨化因子與PD相關(guān)性的研究。本研究以CXCL5作為測定目標時，未發(fā)現(xiàn)CXCL5的表達在新疆地區(qū)PD患者和正常健康人群間存在差異。進一步按照性別、年齡進行分組后提示年齡可能對CXCL5的釋放存在影響，其在年齡>65歲PD患者的釋放低于年齡>65歲的正常人群。在DBH多態(tài)性、煙酒習(xí)慣與PD的相關(guān)性分析中，未發(fā)現(xiàn)DBH-5-TaqⅠ多態(tài)性、吸煙史、飲酒史與PD的發(fā)病之間并不存在相關(guān)性，這與其他發(fā)現(xiàn)3者可能是PD保護因素或危險因素的研究〔11～15〕結(jié)果不同。

基因多態(tài)性-環(huán)境因素層面分析中，本文沒有發(fā)現(xiàn)DBH多態(tài)性與煙酒習(xí)慣之間存在聯(lián)合作用影響PD的發(fā)生，這與楊武軍等〔13〕發(fā)現(xiàn)在恩施土家族人群中吸煙和DBH多態(tài)性存在協(xié)同作用影響PD發(fā)病的結(jié)論不同。在環(huán)境因素-炎癥因子、基因多態(tài)性-炎癥因子層面分析中，本研究結(jié)果提示不吸煙能減少炎癥細胞因子IL-6的釋放，二者之間的聯(lián)合可能是PD的保護因素。本研究結(jié)果提示DBH T/C基因型能減少炎癥細胞因子CXCL5的釋放，二者之間的聯(lián)合可能是PD的保護因素。不吸煙史與炎癥因子IL-6之間、DBH T/C基因型與炎癥因子CXCL5之間可能存在協(xié)同作用影響PD發(fā)生的結(jié)論目前在其他研究中未見到類似報道。

本研究局限在于納入的樣本量相對較少，并不能闡明結(jié)論產(chǎn)生的具體機制，因此還需要在大樣本量的病例對照研究中進一步分析進行驗證，同時需進行更深入的機制分析研究。