TBX2表達(dá)與前列腺癌臨床病理特征及其上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的相關(guān)性

胡君程 蘇瑜嬌 葉承祖

前列腺癌(PCa)為前列腺上皮細(xì)胞惡性增生所致的一種腫瘤，為男性泌尿生殖系統(tǒng)最常見的一種惡性腫瘤，臨床主要表現(xiàn)為排尿異常、勃起功能障礙等[1]。PCa的早期診斷、準(zhǔn)確評(píng)估病情進(jìn)展對(duì)制定臨床治療方案及患者預(yù)后有重要意義[2]。T-BOX轉(zhuǎn)錄因子2(TBX2)為T-BOX基因編碼轉(zhuǎn)錄因子家族的成員之一，在心臟、胚腎、乳腺等器官發(fā)育過程中均有表達(dá)，且發(fā)揮著重要作用[3]。目前關(guān)于TBX2的研究發(fā)現(xiàn)其在乳腺癌、宮頸鱗癌等多種惡性腫瘤中有較高表達(dá)，且參與了細(xì)胞周期調(diào)控，在腫瘤形成及發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[4]。本研究觀察了TBX2表達(dá)與前列腺癌臨床病理特征及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的相關(guān)性，旨在為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月至2020年3月于我院行前列腺癌根治術(shù)的患者68例(PCa組)，取經(jīng)中性甲醛固定、石蠟包埋的前列腺癌組織標(biāo)本68份，患者年齡42～72歲，平均(57.89±2.51)歲，AJCC分期Ⅰ期12例，Ⅱ期17例，Ⅲ期21例，Ⅳ期18例。選取同期于我院進(jìn)行前列腺電切術(shù)的良性前列增生患者68例(BPH組)，取蠟塊標(biāo)本68份，患者年齡41～71歲，平均(57.82±2.45)歲。兩組年齡差異不明顯(P>0.05)。前列腺組織芯片制作：所有標(biāo)本均來自我院病理科，蠟塊均保存完好，可直接行組織芯片制作，136個(gè)樣品點(diǎn)，前列腺癌組織68例、良性前列腺組織68例。

1.2 試劑

小鼠抗人TBX2單克隆抗體由上海研生生化試劑有限公司提供，工作液濃度為1∶350。

1.3 免疫組織化學(xué)染色

經(jīng)中性甲醛固定、石蠟包埋的前列腺癌組織切成厚約5 μm的切片，并置于60 ℃恒溫箱內(nèi)1 h，目的為將組織表面蠟融化，常規(guī)脫蠟、水化操作，應(yīng)用3%H2O2溶液滅活內(nèi)源性過氧化氫酶，并將切片置于枸櫞酸鈉緩沖液(0.01 mol/L)內(nèi)行微波修復(fù)，應(yīng)用10%山羊血清封閉液行室溫封閉20 min，然后于切片上滴加小鼠抗人TBX2(1∶350)單克隆抗體，以4 ℃過夜。第二天以超敏SP試劑盒及DAB顯色，以自來水沖凈后行蘇木精復(fù)染，最后經(jīng)脫水、透明、中性樹膠封片。邀請(qǐng)病理科兩名副主任及以上職稱醫(yī)師于鏡下行雙盲閱片。

1.4 結(jié)果判定

著色標(biāo)準(zhǔn)以雙評(píng)分法半定量法[5]評(píng)估，染色強(qiáng)度(I)與陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比(P)之間乘積為切片染色評(píng)分，0分：未著黃色，細(xì)胞全無著色；1分：著淺黃色，著色<10%；2分：黃色，著色在10%～30%間；3分：棕色，著色在30%～50%間，4分：著色>50%。總分≤3分(-)，4～6分(+)，7～9分(++)，10～12分(+++)，≤6分判定為陰性，>6分判定為陽(yáng)性。

1.5 觀察指標(biāo)

比較TBX2在前列腺癌組織與良性組織中表達(dá)情況；分析TBX2與PCa臨床病理特征的關(guān)系，包括年齡、臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血清前列腺特異性抗原(PSA)；比較PCa患者TBX2陽(yáng)性者與陰性者EMT相關(guān)蛋白表達(dá)量，應(yīng)用Westeern blotting法對(duì)EMT相關(guān)蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin進(jìn)行檢測(cè)；分析TBX2表達(dá)與前列腺癌EMT標(biāo)志蛋白表達(dá)的相關(guān)性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 TBX2在前列腺癌組織及良性組織中陽(yáng)性表達(dá)情況

PCa組 TBX2陽(yáng)性表達(dá)率為69.12%，較BPH組(16.18%)高(P<0.05)，見表1。

表1 前列腺癌組織及良性組織中TBX2陽(yáng)性表達(dá)情況

2.2 TBX2表達(dá)與PCa臨床病理特征的相關(guān)性

TBX2陽(yáng)性表達(dá)與PCa患者年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理特征無關(guān)(P>0.05)，與臨床分期、PSA水平有關(guān)(P<0.05)，見表2。

表2 TBX2表達(dá)與PCa不同病理特征的相關(guān)性

2.3 PCa組TBX2陽(yáng)性者與陰性者EMT相關(guān)蛋白表達(dá)量比較

PCa組TBX2陽(yáng)性者EMT相關(guān)蛋白表達(dá)量與陰性者比較有顯著差異(P<0.05)，見表3。

表3 PCa組TBX2陽(yáng)性者與陰性者EMT相關(guān)蛋白表達(dá)量比較

2.4 TBX2表達(dá)與前列腺癌EMT標(biāo)志蛋白表達(dá)的相關(guān)性

TBX2表達(dá)與E-cadherin呈正相關(guān)性，與N-cadherin、Vimentin呈負(fù)相關(guān)性(P<0.05)，見表4。

表4 TBX2表達(dá)與前列腺癌EMT標(biāo)志蛋白表達(dá)的相關(guān)性/例

3 討論

PCa為男性泌尿生殖系統(tǒng)最常見的一種惡性腫瘤，具有較高發(fā)病率，且近年來發(fā)病率逐年上升，成為威脅男性生殖健康的主要疾病。部分PCa惡性程度較低，進(jìn)展較緩慢，無需規(guī)范化治療，但部分患者惡性程度較高，具有較強(qiáng)侵襲性，需及時(shí)治療以改善預(yù)后[6]。目前臨床無確切PCa進(jìn)展評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，多綜合患者臨床分期、血清PSA等資料對(duì)病情進(jìn)展進(jìn)行預(yù)估。

TBX2為-T-BOX基因家族的重要成員之一，在生物體內(nèi)具有調(diào)控發(fā)育的作用，屬發(fā)育調(diào)控相關(guān)基因，其廣泛表達(dá)于各種組織的胚胎發(fā)育過程中，可指導(dǎo)胚胎及組織器官軸向發(fā)育[7]。近年來多項(xiàng)研究表示TBX2在多種惡性腫瘤中有較高表達(dá)，并與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡有密切關(guān)系，在乳腺癌等腫瘤中可通過一些重要生長(zhǎng)調(diào)控因子參與細(xì)胞分化、凋亡及衰老中[8]。TBX2可經(jīng)多條途徑參與腫瘤形成過程，TBX2可通過對(duì)P19ARF表達(dá)抑制封閉細(xì)胞衰老途徑，從而抑制細(xì)胞凋亡，當(dāng)TBX2異常累及到一定程度后可導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生惡性病變[9]。TBX2高表達(dá)可使癌組織突破基底膜向肌層浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，利于提高癌組織侵襲能力，促進(jìn)前列腺癌組織向增殖更快、惡性程度更高的方向演變[10-11]。本次研究結(jié)果顯示，PCa組TBX2陽(yáng)性表達(dá)率較BPH組高，提示PCa患者存在TBX2高表達(dá)。目前臨床認(rèn)為EMT未腫瘤遷移侵襲的開始，其過程主要表現(xiàn)為上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin缺失，N-cadherin、Vimentin水平上升[12-13]。本次研究結(jié)果顯示，PCa患者中陽(yáng)性組臨床分期、PSA水平、EMT相關(guān)蛋白表達(dá)量均與陰性組有顯著差異，TBX2表達(dá)與前列腺癌EMT標(biāo)志蛋白中E-cadherin呈正相關(guān)性，與N-cadherin、Vimentin呈負(fù)相關(guān)性，提示TBX2基因具有癌基因顯著特征，與腫瘤浸潤(rùn)侵襲有密切關(guān)系，可有效評(píng)估病情進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)，為腫瘤預(yù)后及生物治療提供新的關(guān)鍵因子[14-15]。

綜上所述，TBX2高表達(dá)在PCa發(fā)生及發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，其陽(yáng)性表達(dá)水平可能與Pca惡性程度呈正相關(guān)性，研究TBX2陽(yáng)性表達(dá)在評(píng)估PCa進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)、制定臨床治療方案中有潛在價(jià)值，TBX2表達(dá)也是影響PCa預(yù)后的關(guān)鍵因素。