一種方便快速的藥敏試驗方法在畜禽細菌病診斷中的應用

仝霄霄

（湯陰縣畜牧獸醫(yī)總站 456150）

近年來，雞大腸桿菌病﹑雞白痢﹑鴨疫里默氏桿菌病﹑豬水腫病等細菌性傳染病已成為危害養(yǎng)殖業(yè)的多發(fā)病[1]。由于耐藥菌株的增加，對畜牧業(yè)的發(fā)展造成極大的損失。同時，由于養(yǎng)殖過程中不科學的﹑盲目的濫用抗菌藥，很多致病性細菌產(chǎn)生了耐藥性，使得抗菌藥對細菌性疾病的控制效果越來越差，不但造成藥物浪費，而且還延誤病情，給養(yǎng)殖戶造成了很大的經(jīng)濟損失。如按照常規(guī)檢驗，則最少需要48h左右才能出來結果[2]。因此，在臨床用藥前進行快速﹑有效的藥物敏感試驗已成為正確使用抗菌藥物的必要手段。筆者在多年的試驗室診斷和臨床實踐中總結出一套簡易快速的藥物敏感試驗方法。經(jīng)過在臨床上反復實踐，效果顯著，有效給養(yǎng)殖戶挽回了損失，同時減少了藥物濫用情況。現(xiàn)將試驗情況報告如下，為有效診斷和治理畜禽細菌病提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗背景

2021年4月，安陽某養(yǎng)殖場雞群出現(xiàn)死亡，用藥治療效果差。本實驗室對病雞進行解剖，采集心臟﹑肝臟和腹腔液涂板，選養(yǎng)殖場現(xiàn)有藥物原粉進行藥敏試驗，確定敏感藥物，便于針對治療。

1.2 試驗方法

本試驗室隨機選取3只病雞解剖，觀察組織器官病變情況分別采集心臟﹑肝臟和腹腔液涂營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（Nutrient Agar，NA）平板。按照文獻[3]的方法并加以改良，稱量0.1g藥物原粉加入10mL生理鹽水溶解后混合均勻，稀釋10倍后備用，此時藥物濃度為1000μg/mL。移液器吸取20μL藥液（20μg）小心點種到上述已涂過病料組織的NA平板上，37℃培養(yǎng)14～16 h。取出平板觀察藥敏結果，用游標卡尺測量抑菌圈直徑，篩選敏感藥物。

2 試驗結果

2.1 解剖病理變化

解剖發(fā)現(xiàn)前2只病雞肝臟﹑心臟﹑肌胃和腺胃無明顯病變，腹腔無積液。第3只病雞肝臟破裂，出血，心臟纖維素滲出﹑附著。如圖1所示。

圖1 第3只病雞腹腔病變照片

2.2 藥敏試驗結果

試驗結果表明，第1只和第2只雞心臟﹑肝臟和腹腔涂板培養(yǎng)后，沒有出現(xiàn)致病菌，第3只雞心臟﹑肝臟和腹腔均出現(xiàn)均勻的疑似病原菌苔分布，測量抑菌圈直徑，病原菌對藥物敏感結果如圖2和表1所示。

圖2 第3只病雞各臟器藥敏結果

表1 各臟器病原菌對藥物敏感性試驗結果

藥敏結果表明，各組織臟器中的病原菌心臟中病原菌對7種藥物敏感順序為：

心臟：阿米卡星＞替米考星＞慶大霉素＞阿莫西林＞氟苯尼考＞頭孢噻呋鈉；

肝臟：替米考星＞慶大霉素＞阿米卡星＞頭孢噻呋鈉；

腹腔液：阿米卡星＞替米考星＞多西環(huán)素＞頭孢噻呋鈉＞慶大霉素＞氟苯尼考＞阿莫西林。

結合以上藥物敏感結果，建議采用替米考星拌料﹑阿米卡星和慶大霉素注射方式治療，觀察治療效果。

3 討論

針對病原微生物對養(yǎng)殖成本和利潤的威脅，畜禽養(yǎng)殖行業(yè)中常采用抗菌和抑菌藥物進行防控。其中，最常用的抗菌和抑菌藥物是移植于人藥﹑獸藥的抗生素[4]。由于缺乏科學的用藥指導，養(yǎng)殖生產(chǎn)中各種抗生素的用法與用量往往存在盲目性，因而不但成本高﹑藥物浪費﹑效果不理想，還會對生態(tài)環(huán)境健康造成嚴重影響。特別是對有益菌群的誤傷和病原菌抗藥性增加[5]。因此，在用藥前進行科學的藥物敏感試驗（Antimicrobial susceptibility testing，AST)是獸醫(yī)工作者必備的技能。

藥敏試驗即為測定目標藥物對細菌和真菌培養(yǎng)的表觀作用效果，主要包括基于細菌分離純化的稀釋法[6]﹑K-B紙片法[7]﹑牛津杯法[8]﹑E-test[9]法等。應用這些方法時，對貴重儀器的依賴性較小，成本較低，結果可以直接通過肉眼判斷，而且大多可以給出最小抑菌濃度MIC值。但是，這些方法往往操作繁瑣，且需要較長的時間，從而在一定程度上會錯過最佳投藥時機，增加損失[5]。近幾年來筆者根據(jù)臨床經(jīng)驗結合實驗室檢驗技術采用這種簡易快速藥敏試驗能在很短的時間內選擇出畜禽常見細菌性疾病的敏感藥物，可在細菌感染的最初時期選擇敏感藥物將細菌殺滅，減少藥物開支，為臨床治療爭取寶貴的時間。通過該方法對安陽某養(yǎng)殖場發(fā)病肉雞進行臨床細菌藥敏試驗，發(fā)現(xiàn)病原細菌對慶大霉素敏感度較高，這與羅薇等[10]報道的通過K-B法雞大腸桿菌藥敏試驗結果一致。王會生等[10,11]通過對規(guī)模化雞場大腸桿菌細菌分離純化培養(yǎng)，紙片法藥敏試驗，也得到和本試驗一致的結論。有意思的是，第3只病雞疑似分離到的病原菌對青霉素敏感度：心臟＞腹腔液＞肝臟，同時對多西環(huán)素敏感度：腹腔液/肝臟＞心臟，這可能是該發(fā)病雞群存在不止一種病原菌感染的情況，結合問詢該雞場以往用藥情況，發(fā)現(xiàn)存在用藥單一，藥物重復多次使用的問題，這也可能導致雞場存在的病原菌株對某些抗菌藥物的敏感性并不完全相同。因此，正確地選用抗菌藥物最好建立在進行分離病原菌做藥物敏感試驗的基礎上。

綜上，本試驗方法切實可行，尤其考慮到一般養(yǎng)殖場的現(xiàn)實試驗條件，比之實驗室流程化的藥敏試驗程序（病料采集﹑細菌分離純化﹑涂菌﹑貼藥敏片），存在周期短（最快12h出結果），便于操作的好處。該方法在臨床獸醫(yī)學上值得推廣和應用。