Ki-67、Her-2及CD147在老年女性乳腺癌中的表達及意義

鄧姣 陳寬冰

(中國醫科大學附屬盛京醫院外科第二胸外科,遼寧 沈陽 110020)

乳腺癌作為一類發病率較高的外科常見病，也是對女性患者而言較為常見的惡性腫瘤性疾病，盡管在近年來的研究中發現，隨著診斷及治療技術的不斷提升，乳腺癌早期救治率有所提升，生存期有所延長，但其總體病死率仍然未觀察到明顯降低，嚴重危害著女性患者的生理健康。有研究報道指出，乳腺癌本身的發生發展是一個多因素共同作用，且多階段的過程，在疾病發生發展中多伴隨著不同的病理特征，但其具體發生發展機制仍無定論，仍然需要進一步的分析及探討〔1〕。細胞增殖核抗原(Ki-67)作為一個用于判斷細胞增殖及凋亡的有效指標，在乳腺癌治療及預后評估方面具有重要的意義〔2〕。人表皮生長因子受體(Her)-2表達被認為是一種能夠在細胞內外執行不同生理功能的指標，在既往的研究報道中被證實與細胞的增殖、遷移及分化具有密切的關系，同時還可對細胞的凋亡進行抑制，促進增加腫瘤細胞的侵襲性〔3〕。而細胞外基質金屬蛋白酶(MMP)誘導因子(CD147)作為一種糖基化程度較高的跨膜蛋白，在原發性乳腺癌及卵巢癌等組織中具有較高的表達水平，且在其病理表現中發揮了重要的作用。本研究則就癌組織中Ki-67、Her-2及CD147在老年女性乳腺癌患者中的表達水平及意義進行分析，旨在為疾病的診斷及治療提供可參考價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取自2019年7月至2021年4月在中國醫科大學附屬盛京醫院接受乳腺癌手術切除術的105例患者的病理組織標本作為乳腺癌組，將距離腫瘤邊緣>5 cm的乳腺組織作為癌旁正常組。該組患者年齡60～75歲，平均(68.47±4.14)歲。納入標準：患者均在醫院行臨床癥狀及體征、影像學及病理學檢查后確診；屬于乳腺浸潤性導管癌診斷標準；無患側乳腺手術史；尚未進行放療、化療或者激素類藥物治療；具有完整的臨床資料。排除標準：合并心腦肝腎等重要臟器功能障礙或者損傷；合并存在結締組織疾病；存在惡性腫瘤疾病史；因各種原因導致的中途出院放棄治療所導致的臨床資料缺失。

1.2試劑與儀器 Ki-67單克隆抗體、Her-2單克隆抗體及CD147單克隆抗體，上述抗體均購買自北京中杉生物技術開發有限公司。華速 HS-2205輪轉手動切片機(山東博宇醫療器械有限公司)。徠卡DM750正置顯微鏡(上海躍河生物科技有限公司)。I-Solution形態學分析系統(加拿大IMT公司)等。

1.3實驗方法 樣本均給予常規脫蠟至水、透明、包埋、切片，切片的厚度為4 μm，在石蠟切片之后給予常規二甲苯脫蠟處理，酒精梯度水化，抗原修復，冷卻等，隨后在3%H2O2，37℃的環境中孵育，5%的正常山羊血清37℃封閉處理，向其中加入50 μl一抗，放入至-4℃環境中保存過夜；第二日復溫，向其中加入二抗，即鏈霉素親和素-生物素復合物液，二氨基苯基碘顯色5 min；采用蘇木精對其實施染色處理后，二甲苯透明，中性樹膠封片，再烤干〔4〕。標本均在同一個條件下采用免疫組織化學(SABC)方法對其進行染色處理，之后再設置陰性和陽性對照。分別在乳腺癌組及癌旁正常組中隨機選取10個視野(×400倍)，陽性表達的評估標準：在經過染色之后的胞質及薄膜可以觀察到棕黃色或者黃褐色的沉淀物。

1.4判定指標 按照美國臨床腫瘤學會/美國病理學家協會(ASCO/CAP)相關病理指南公式〔5〕，結合DAKO Hercept Test評分系統判斷如下：(-)無細胞染色或者<10%細胞膜呈現出了較弱染色；(+)表示10%細胞膜部分呈現出了較弱染色；()表示10%細胞膜呈現出完全較弱或者中等染色；()為10%的細胞膜呈現出了完全強染色。按照陽性細胞占全部觀察細胞的半定量情況進行分級，分級標準：以(-)、(+)、()作為陰性表達，()作為陽性表達〔6〕。

1.5觀察指標 采用免疫組織化學法測量并對比乳腺癌組與癌旁正常組標本中Ki-67、Her-2及CD147的表達水平，并將上述指標表達水平與臨床病理關系進行分析；對Ki-67、Her-2及CD147的表達水平采用Spearman相關性分析，對全部患者實施為其1年的乳腺癌手術后隨訪，對隨訪后乳腺癌患者的生存情況進行統計，生存的患者為生存組，死亡的患者為死亡組，對比Ki-67、Her-2及CD147的表達水平在不同生存情況下表達的差異性。

1.6統計學處理 采用SPSS23.0軟件進行χ2檢驗、t檢驗、Spearman相關性分析。

2 結 果

2.1兩組組織標本中Ki-67、Her-2及CD147蛋白光度值對比 乳腺癌組組織標本中Ki-67、Her-2及CD147蛋白光度值顯著高于癌旁正常組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組組織標本中Ki-67、Her-2及CD147蛋白光度值對比

2.2Ki-67、Her-2及CD147蛋白表達與臨床病理指標的關系 Ki-67、Her-2及CD147蛋白表達分別在腫瘤>5 cm、病理類型為浸潤性導管癌、組織分型為中低分化、有淋巴結轉移、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有脈管侵襲的患者中具有更高的陽性表達率，差異有統計學意義(P<0.05)。 Ki-67、Her-2及CD147陽性表達在不同腫瘤患側中未呈現出明顯的差異性(P>0.05)。見表2。

2.3生存組與死亡組組織標本中Ki-67、Her-2及CD147的蛋白陽性表達對比 死亡組組織標本中Ki-67、Her-2及CD147蛋白陽性表達水平顯著高于生存組(P<0.05)。見表3。

表2 Ki-67、Her-2及CD147蛋白表達與臨床病理指標的關系(n=105，n)

表3 生存組與死亡組組織標本中Ki-67、Her-2及CD147陽性表達對比〔n(%)〕

2.4Ki-67、Her-2及CD147的相關性 Ki-67與Her-2、CD147呈正相關(r=0.614，0.711；均P<0.05)；Her-2與CD147呈正相關(r=0.641，P<0.05)。

3 討 論

盡管對乳腺癌患者實施積極有效的手術、放化療及靶向給藥等方法治療可在一定程度上抑制乳腺癌的進展，但絕大多數患者的整體預后仍然較差，治療后仍然存在著一定的復發率及轉移率，同時也是導致患者死亡率增高的重要原因〔7〕。

Ki-67作為一種由10號染色體長臂所屬基因轉錄翻譯而成，在一般正常情況下可表現在除去G0期及G1早期以外的各個細胞分裂階段，多用于反映細胞當前的增殖狀態〔8〕。有研究資料顯示，Ki-67多與腫瘤細胞的增殖及轉移具有密切的相關性，同時也與患者的預后相關，由此認為，通過對Ki-67進行檢測可用于檢測當前腫瘤進展狀態。Her-2作為一種位于17號染色體q21區上的人類表皮生長因子受體家族成員，在一般情況下，Her-2的表達水平較低，且處于一個非激活的狀態下，而一旦需要Her-2蛋白中的酪氨酸在發生磷酸化后，則會通過介導細胞內的磷酸化、DNA合成代謝等一系列功能，而由此表現出較高的表達水平，此時也會導致腫瘤細胞快速增殖，導致癌癥的發生及發展〔9，10〕。CD147被認為是一種屬于IgSE類的細胞黏附分子(CAM)，在細胞內可對基質細胞的MMPs生產產生一定的刺激作用，并對細胞外基質(ECM)的降解與重建可產生刺激效果，加快癌細胞的進一步侵襲與轉移〔11〕。另外，有研究報道指出，CD147也屬于一種與炎癥反應、腫瘤進展等諸多病理過程相關的多功能分析，可從多個方面影響乳腺癌的發生〔12，13〕。

本研究就癌組織中Ki-67、Her-2及CD147在老年女性乳腺癌患者的表達水平及意義進行分析，結果與既往研究〔14，15〕報道基本一致。在觀察預后表現上證實了Ki-67、Her-2及CD147蛋白陽性可對乳腺癌患者的預后帶來諸多不利影響，在臨床工作中可將三者作為分析并判斷老年乳腺癌患者腫瘤浸潤、轉移及預后的重要指標〔16，17〕。 而Ki-67、Her-2及CD147之間是否會互相促進機制尚無定論，在接下來的研究中仍然需要深入分析〔18〕。

綜上，Ki-67、Her-2及CD147在乳腺癌組織中多呈現出表達異常的情況，三者之間互相呈現出了明顯的正相關性，且上述指標與乳腺癌病理特征、生存預后具有一定的關系。在接下來的研究中可深入對Ki-67、Her-2及CD147與乳腺癌發生發展之間的關系進行分析，為后續乳腺癌的治療及預后判斷提供可靠可參考依據。