利福平致小鼠非酒精性脂肪性肝炎作用機(jī)理研究

曾青山 趙豐娟 張莉 王淳 李曉媛 杜仕靜 華曉萍 黃利 張媛 譚正懷

摘要：目的 利福平為一線抗結(jié)核藥物，可誘導(dǎo)非酒精性脂肪性肝炎（NASH），但其相關(guān)作用機(jī)理有待進(jìn)一步闡明。

方法 幼年小鼠在出生后第二天皮下注射谷氨酸鈉（monosodium glutamate， MSG）5 g/kg以誘導(dǎo)肥胖、胰島素抵抗的肥胖小鼠，用于考察利福平致小鼠NASH與胰島素抵抗的相關(guān)性；采用靜脈注射氯膦酸脂質(zhì)體剔除小鼠肝臟Kupffer細(xì)胞，觀察Kupffer細(xì)胞在利福平致小鼠NASH中的作用。結(jié)果 MSG小鼠在50 d齡時(shí)明顯肥胖，Lees指數(shù)顯著增加，肝臟脂質(zhì)輕度堆積、肝功能輕度受損，肝臟組織病理出現(xiàn)輕微的炎癥反應(yīng)。連續(xù)灌胃利福平600、300和150 mg/kg 7 d可引起正常小鼠和肥胖小鼠肝功能受損，肝臟發(fā)生NASH樣病理改變，對(duì)肥胖小鼠的作用明顯強(qiáng)于正常小鼠。注射脂質(zhì)體剔除肝臟Kupffer細(xì)胞小鼠體重降低并伴隨著輕微的肝損傷，但未影響肝臟中TG和TC的含量；利福平可使Kupffer細(xì)胞剔除小鼠可使其體重降低，肝臟發(fā)生NASH樣改變，但與正常小鼠相比并無(wú)明顯差異。結(jié)論 研究結(jié)果表明利福平所致小鼠肝臟NASH變化與胰島素抵抗及肝臟脂質(zhì)堆積程度、肝組織功能狀態(tài)密切相關(guān)，這些作用與Kupffer細(xì)胞無(wú)明顯關(guān)聯(lián)，提示利福平在臨床用于結(jié)核病治療時(shí)應(yīng)加強(qiáng)檢測(cè)患者肝功能及脂肪肝，有利于預(yù)防利福平所致的肝損傷。

關(guān)鍵詞：利福平；胰島素抵抗；小鼠；Kupffer細(xì)胞；氯膦酸脂質(zhì)體；非酒精性脂肪性肝炎

中圖分類號(hào)：R978.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Study on the mechanism of rifampicin induced non-alcoholic steatohepatitis in mice

Zeng? Qingshan1，2， Zhao? Fengjuan2，3， Zhang Li2， Wang Chun1，2， Li Xiaoyuan2，

Du Shijing2， Hua Xiaoping2， Huang Li2， Zhang Yuan2， and Tan Zhenghuai2

（1 Chengdu University of Traditionnal Chinese Medicine， Chengdu 610072; 2 Sichuan Academy of Chinese Medicine Science， Chengdu 610041; 3 Southwest Medical University， Luzhou 646000）

Abstract Objective Rifampicin is a first-line anti-tuberculosis drug， which can induce non-alcoholic steatohepatitis（NASH）， but its mechanism remains to be further elucidated. Methods Juvenile mice were injected subcutaneously with monosodium glutamate （MSG） 5 g/kg on the second day after birth to induce obese and insulin-resistant obese mice， for examining the correlation between rifampicin-induced NASH and insulin resistance. the role of Kupffer cells in rifampicin-induced NASH in mice was observed using intravenous clodronate liposome excision of mouse liver Kupffer cells. Results At the age of 50 days， MSG mice were significantly obese， with a significant increase in Lees index， mild accumulation of liver lipids， mildly impaired liver function， and the liver pathology showed slight inflammatory reaction. Continuous gavage of rifampicin at 600， 300 and 150 mg/kg for 7 days could cause liver function damage and Nash-like pathological changes in the liver of normal and obese mice， and the effect on obese mice was significantly stronger than that in normal mice. Mice which Liposome knockout Kupffer cell decreased body weight and accompanied with mild liver injury， but did not affect the contents of TG and TC in the liver. Rifampicin could reduce body weight and NASH-like changes in the liver of Kupffer cell mice， but there was no significant difference compared with normal mice. Conclusion The results showed that the changes of liver NASH in mice caused by rifampicin were closely related to insulin resistance and the degree of hepatic lipid accumulation and functional status of liver tissues， and these effects were not significantly associated with Kupffer cells， It is suggested that rifampicin should be strengthened to detection of liver function and fatty liver when used clinically for tuberculosis treatment， which is beneficial to prevent rifampicin-induced liver injury.

Key words Rifampicin; Insulin resistance; Mice， Kupffer cells; Clodronate liposomes; Non-alcoholic steatohepatitis

據(jù)世界衛(wèi)生組織估計(jì)，每年因結(jié)核病死亡的人數(shù)達(dá)到數(shù)百萬(wàn)，中國(guó)、印度是重災(zāi)區(qū)；近年來(lái)，我國(guó)因結(jié)核病死亡的人數(shù)在80萬(wàn)～120萬(wàn)，其主要流行病株為耐利福平菌株[1]。利福平（rifampicin，RFP）為利福霉素B衍生物，是抗結(jié)核一線藥物，但長(zhǎng)期大劑量服用可引起嚴(yán)重肝損傷，嚴(yán)重者不得不中斷治療，后者可引起耐藥菌株出現(xiàn)[2-3]。前期本項(xiàng)目研究發(fā)現(xiàn)短期、大劑量給予利福平即可誘導(dǎo)肝損傷，肝臟發(fā)生明顯的脂肪變，甚至發(fā)展成非酒精性脂肪肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，NASH）[4]，但其作用機(jī)理還沒有完全闡明。

NASH是非酒精性脂肪性肝病 （ nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD） 從脂肪變性發(fā)展到肝纖維化的進(jìn)展階段，主要病理特征表現(xiàn)為肝臟脂肪過度堆積、肝臟炎癥，可伴有纖維化[5]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，NAFLD發(fā)病率大多在25%以上[6]。從NAFLD發(fā)展到NASH的機(jī)理至今沒有得到系統(tǒng)闡明。早期“二次”打擊學(xué)說(shuō)（two-hit hypothesis）認(rèn)為胰島素抵抗（IR）在NASH的發(fā)生、發(fā)展中起著非常重要的作用 [7]。但近年學(xué)術(shù)界更為認(rèn)同多種平行打擊假說(shuō)（The multiple parallel hits hypothesis）：炎癥可以促進(jìn)脂肪肝的形成，NASH反應(yīng)了一種緊跟在炎癥之后的脂肪肝性疾病，也可能NAFL是抗脂毒性失敗的結(jié)果[8]。

胰島素抵抗與三大物質(zhì)代謝密切相關(guān)，但胰島素抵抗是否參與了利福平致小鼠脂肪肝作用，目前未見相關(guān)報(bào)道。在小鼠出生時(shí)，皮下注射適量谷氨酸鈉損傷大腦弓狀核攝食中樞及產(chǎn)熱中樞，可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生代謝紊亂，逐漸肥胖并出現(xiàn)胰島素抵抗[9]。為此，本文擬比較研究利福平致正常小鼠和肥胖小鼠NASH作用，以希從中闡明肝臟脂質(zhì)堆積以及胰島素抵抗在NASH發(fā)生、發(fā)展中的重要作用。

肝臟Kupffer細(xì)胞作為人體中最大的巨噬細(xì)胞儲(chǔ)存庫(kù)，在肝臟炎癥以及纖維化形成中發(fā)揮著重要作用，但是否參與了利福平誘導(dǎo)小鼠NASH，目前還未見相關(guān)報(bào)道。為此，本文采用靜脈注射氯磷酸鈉脂質(zhì)體以定向清除肝臟中的Kupffer細(xì)胞，以期發(fā)現(xiàn)Kupffer細(xì)胞在利福平誘導(dǎo)NASH中的作用。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物和試劑

一水L-谷氨酸鈉，批號(hào)20191008，BR（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），用生理鹽水配制成所需濃度的溶液備用；利福平，膠囊劑，每粒0.15 g，批號(hào)211010（成都錦華藥業(yè)有限責(zé)任公司），臨用前將膠囊中粉末倒出研磨后，加入0.5% CMC-Na配制至相應(yīng)濃度；生理鹽水，批號(hào)B20093704（四川科倫藥業(yè)股份有限公司）；羧甲基纖維素鈉（CMC-Na），批號(hào)2014102701，AR（成都市科龍化工試劑廠），臨用前用超純水配制成0.5%濃度的溶液備用；氯膦酸脂質(zhì)體，SKU：C-105，濃度 5 mg/mL，規(guī)格 15 mL，批號(hào) 2022446（荷蘭 Liposoma BV公司）。

1.2 生化檢測(cè)試劑盒

肝組織檢測(cè)：甘油三酯測(cè)定試劑盒（GPO-PAP法），批號(hào)2022001；膽固醇測(cè)定試劑盒（CHOD-PAP法），批號(hào)2022001（長(zhǎng)春匯力生物有限公司）。

用于血清檢測(cè)：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）測(cè)定試劑盒，批號(hào)0522022；天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）測(cè)定試劑盒，批號(hào)0322012；甘油三酯（TG）測(cè)定試劑盒，批號(hào)0122011；膽固醇（TC）測(cè)定試劑盒，批號(hào)1021031；總膽汁酸（TBA）測(cè)定試劑盒，批號(hào)1021041；直接膽紅素（DBIL）測(cè)定試劑盒，批號(hào)0222012；總膽紅素（TBIL）測(cè)定試劑盒，批號(hào)0222012；高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）測(cè)定試劑盒，批號(hào)1121041；低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）測(cè)定試劑盒，批號(hào)042031。以上試劑盒均購(gòu)自新健康成生物股份有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

電子天平（JA1003A，d=1 mg，e=10 d，上海龍騰電子儀器有限公司）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（TST101A-1B，成都特思特儀器有限公司）；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（TGL-16，長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司）；多功能酶標(biāo)儀（Varioskan Flash ，美國(guó)Thermo公司）；全自動(dòng)生化分析儀（日立7180型，日本株式會(huì)日立高新技術(shù)）。

1.4 動(dòng)物及環(huán)境

SPF級(jí)昆明種小鼠，由四川省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（川）-2018-19，用于肥胖小鼠培育實(shí)驗(yàn)；由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（湘）-2019-0004，用于Kupffer細(xì)胞缺乏實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物飼養(yǎng)于四川省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心屏障系統(tǒng)中，合格證號(hào)：SYXK（川）-2018-100，室溫22 ℃～25 ℃，濕度50%±5%，明、暗各12 h，試驗(yàn)期間小鼠自由攝食和飲水。

1.5 方法

1.5.1 利福平誘導(dǎo)肥胖小鼠NASH作用研究

從乳鼠出生開始計(jì)為第1天，從第2天開始，一組乳鼠頸后皮下注射谷氨酸鈉5 g/kg，另一組乳鼠頸后皮下注射生理鹽水，注射體積均為0.2 mL/10 g。

隔天一次，連續(xù)給藥3次。6～8周齡時(shí)用于實(shí)驗(yàn)研究。取正常小鼠，雌雄兼用，隨機(jī)分為對(duì)照組、利福平600、300和150 mg/kg等實(shí)驗(yàn)組，每組數(shù)量分別為10、9、9和9只。另取肥胖小鼠，雌雄兼用，隨機(jī)分為肥胖對(duì)照組、利福平600、300和150 mg/kg

等實(shí)驗(yàn)組，每組數(shù)量分別為10、9、9和10只。分別灌胃藥物或等體積0.5%CMC-Na，1次/d，連續(xù)7 d。末次給藥24 h并禁食不禁水16 h后，取血分離血清測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase， ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase， AST）、甘油三酯（triglyceride， TG）、 總膽固醇（serum total cholesterol， TC）、高密度脂蛋白膽固醇（high density liptein cholesterol， HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoproteins cholesterol， LDL-C）、總膽汁酸（total bile acid， TBA）、總膽紅素（total bilirubin， TBIL）、直接膽紅素（direct bilirubin， DBIL）水平； 取肝臟稱濕重并計(jì)算其臟器指數(shù)，取部分肝臟組織置于-80 ℃冰箱中用于測(cè)定其 TC和TG含量。取肝大葉用10%甲醛固定進(jìn)行組織病理學(xué)觀察。

1.5.2 利福平誘導(dǎo)肝Kupffer細(xì)胞缺失小鼠NASH作用研究

選取體重為18～20 g的雄性KM小鼠，隨機(jī)分為對(duì)照組、利福平300 mg/kg、脂質(zhì)體、利福平300 mg/kg加脂質(zhì)體，每組數(shù)量分別為10、8、9和9只。在實(shí)驗(yàn)開始第1天和第4天，各組動(dòng)物分別靜脈注射氯膦酸脂質(zhì)體0.1 mL/10 g或等體積生理鹽水。在第一次注射24 h后，分別灌胃藥物或等體積0.5%

CMC-Na，1 次/d，連續(xù)7 d，末次給藥后24 h并禁食不禁水16 h取血分離血清測(cè)ALT、AST、TG、TC、HDL、LDL、TBA、TBIL和DBIL的水平；取肝稱濕重并計(jì)算臟器指數(shù)，取部分肝組織測(cè)TG和TC，另取肝大葉置于福爾馬林中固定后進(jìn)行組織學(xué)觀察。

1.5.3 肝臟組織病理學(xué)評(píng)分

肝臟組織經(jīng)10%福爾馬林充分固定，梯度酒精脫水、石蠟包埋，制成3～5 μm病理切片，在光學(xué)顯微鏡下觀察動(dòng)物肝臟結(jié)構(gòu)。參考文獻(xiàn)[10]并結(jié)合本實(shí)驗(yàn)實(shí)際情況，擬定“肝細(xì)胞壞死”和“肝細(xì)胞脂肪變性”為觀測(cè)指標(biāo)。病變程度采用半定量分析[11]。

1.5.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)采用x±s表示，比較采用t檢驗(yàn)和析因分析。

2 結(jié)果

2.1 利福平對(duì)正常小鼠和肥胖小鼠肝指數(shù)和肝臟脂質(zhì)的影響

肥胖小鼠在給予利福平600 mg/kg 3次后死亡了2只動(dòng)物，其余各組動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)期間均未發(fā)生死亡。

由表1可見，肥胖小鼠Lees指數(shù)明顯增加，肝臟指數(shù)有所減少，但肝臟脂質(zhì)含量有所增加，利福平各劑量組均可程度相似地降低正常和肥胖小鼠體重，增加其肝臟脂質(zhì)以及肝臟指數(shù)，其中利福平300和150 mg/kg增加肥胖小鼠肝臟TG的作用明顯強(qiáng)于對(duì)正常小鼠的作用。與正常對(duì)照小鼠相比，肥胖小鼠各給藥組小鼠Lee's指數(shù)、肝臟指數(shù)、肝臟TC和TG均明顯增加，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2.2 利福平對(duì)正常小鼠和肥胖小鼠肝臟功能的影響

由表2可知，肥胖小鼠血清ALT水平升高，與正常小鼠比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。利福平各劑量組均可損傷正常小鼠和肥胖小鼠肝臟功能，使其血清ALT、AST、TBIL、DBIL和TBA水平均顯著升高，與各自的對(duì)照組存在明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。其中利福平300和150 mg/kg對(duì)肥胖小鼠的作用明顯嚴(yán)重于正常對(duì)照組，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3 利福平對(duì)正常小鼠和肥胖小鼠血脂水平的影響

由表3可知，肥胖小鼠血清TG和LDL水平降低，TG/HDL比值降低，與正常小鼠比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。利福平600 mg/kg可引起正常小鼠和肥胖小鼠血清TC、HDL和VLDL水平均降低，與各自的對(duì)照組存在明顯差異。利福平150 mg/kg卻可升高正常小鼠和肥胖小鼠血清TC、HDL、LDL和VLDL水平，與各自的對(duì)照組存在明顯差異。

2.4 利福平對(duì)正常小鼠和肥胖小鼠肝臟病理組織學(xué)的影響

在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組肝組織結(jié)構(gòu)正常，肥胖組動(dòng)物存在肝細(xì)胞輕度脂肪變性、少量肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死伴炎細(xì)胞浸潤(rùn)，各給藥組均可引起小鼠肝臟組織發(fā)生脂肪變性和肝細(xì)胞壞死，利福平對(duì)小鼠肝臟的損傷呈明顯的劑量依賴性，相同劑量的利福平對(duì)肥胖小鼠肝臟的損傷作用明顯強(qiáng)于正常小鼠（圖1和表4）。

2.5 利福平與動(dòng)物體質(zhì)狀態(tài)交互作用分析

從表5方差分析結(jié)果可以看出，肥胖小鼠在體重、肥胖指數(shù)、肝臟TG水平、血清ALT、TBIL、DBIL、TG、LDL以及TG/HDL水平起主要作用；利福平在肝臟指數(shù)、肝臟TC及TG水平、血清ALT、TBIL、DBIL、TBA、TC、HDL、LDL以及VLDL水平起主要作用；肥胖小鼠與利福平在肝臟指數(shù)、血清TBIL、DBIL水平存在明顯的交互作用；而在肝臟TG水平、血清ALT水平存在明顯的相加作用。

2.6 利福平對(duì)Kupffer細(xì)胞缺乏小鼠肝指數(shù)及肝臟脂質(zhì)的影響

由表6可見，在注射脂質(zhì)體、灌胃利福平，脂質(zhì)體與利福平聯(lián)用后，小鼠體重明顯下降，與對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。灌胃利福平，可引起正常小鼠以及Kupffer細(xì)胞缺乏小鼠的小鼠肝指數(shù)、肝臟中的TG和TC明顯升高，與對(duì)照組相比存在明顯的差異。靜脈注射脂質(zhì)體引起小鼠Kupffer細(xì)胞缺乏對(duì)小鼠的肝臟指數(shù)、肝臟脂質(zhì)均無(wú)明顯影響，與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.7 利福平對(duì)Kupffer細(xì)胞缺乏小鼠肝臟功能的影響

由表7可知，給藥利福平1周后，小鼠ALT、AST、TBil、DBil和TBA含量均明顯上升；靜脈注射脂質(zhì)體兩次后，ATL、AST和TBA含量顯著上升，DBil含量下降；脂質(zhì)體和利福平聯(lián)用后，小鼠ALT、AST、TBil、DBil和TBA含量均明顯上升；與對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.8 利福平對(duì)Kupffer細(xì)胞缺乏小鼠血脂水平的影響

由表8可知，給藥利福平一周后，小鼠血清中TC含量和VLDL下降，LDL上升；靜脈注射脂質(zhì)體兩次后，血清中TC、HDL和LDL含量顯著上升，脂質(zhì)體和利福平聯(lián)用后，血清中LDL含量上升；與對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.9 利福平對(duì)Kupffer細(xì)胞缺乏小鼠肝臟組織病理學(xué)的影響

小鼠灌胃利福平7 d后，可誘導(dǎo)肝細(xì)胞脂肪變性。小鼠尾靜脈注射氯膦酸脂質(zhì)體，可誘導(dǎo)輕度的肝細(xì)胞壞死伴炎細(xì)胞浸潤(rùn)。小鼠尾靜脈注射氯膦酸脂質(zhì)體后再給予利福平7 d，未見明確的肝細(xì)胞壞死，但肝細(xì)胞脂肪變性較單用利福平稍有加重。各組切片觀察具體結(jié)果如圖2。

2.10 利福平和脂質(zhì)體對(duì)小鼠的交互作用分析

從表10方差分析結(jié)果可以看出，脂質(zhì)體在小鼠體重、ALT、AST以及血脂水平變化起主要作用；而利福平在小鼠血脂TC、HDL以及VLDL水平、小鼠體重、肝臟指數(shù)、肝臟TG以及TC、肝臟功能指標(biāo)上均起主要作用；脂質(zhì)體與利福平在小鼠血清TG以及TG/HDL比值變化上存在明顯的交互作用。

3 討論

NASH的發(fā)病機(jī)理至今沒有得到系統(tǒng)闡明，盡管NASH患者以肥胖者居多，但仍有大約25%的患者為“瘦子”；同樣肝臟脂肪堆積以及血脂水平提高，在NASH的發(fā)生、發(fā)展中作用和地位所起的作用如何，至今無(wú)定論。本研究發(fā)現(xiàn)：初生小鼠皮下注射谷氨酸鈉后50 d，其體型變得肥胖，Lees指數(shù)顯著增加，其血清TG及LDL水平顯著低于同年齡正常小鼠，肥胖小鼠肝臟少量肝細(xì)胞輕度脂肪變性、少量肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死伴炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肝臟生化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其TG、TC含量顯著增加，但其血中TG水平降低，TG/HDL比值顯著降低，肝功能受損，肝臟處理TG的能力顯著下降。利福平大劑量可引起小鼠血清脂質(zhì)（TG和TC）降低（對(duì)正常小鼠或肥胖小鼠），顯著增加肝臟脂質(zhì)特別是TG水平，肝臟組織及功能受損，對(duì)肥胖動(dòng)物的作用明顯強(qiáng)于正常小鼠，在利福平300 mg/kg表現(xiàn)最為明顯（高劑量的敏感性可能與其有動(dòng)物死亡有關(guān)），說(shuō)明胰島素抵抗以及肝臟脂肪堆積在利福平所致NASH中發(fā)揮了重要作用。

Kupffer細(xì)胞作為人體中最大的巨噬細(xì)胞儲(chǔ)存庫(kù)，當(dāng)肝臟受損傷時(shí)，Kupffer細(xì)胞活化，具有吞噬活性并分泌促炎癥細(xì)胞因子和活性氧，致使肝臟形成最早的肝臟脂質(zhì)沉積和肝損傷。因此耗竭Kupffer細(xì)胞可引起炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)減少，炎癥和肝細(xì)胞死亡（壞死性炎癥）減弱[12]。但在一項(xiàng)對(duì)喂養(yǎng)高脂奶粉的小鼠的研究中，Kupffer細(xì)胞的耗竭減少肝臟內(nèi)前列腺素E2（PGE2）的釋放，減弱了對(duì)胰島素的反應(yīng)，導(dǎo)致肝臟脂質(zhì)合成增加，增強(qiáng)了肝臟中脂肪的含量[13]。

氯膦酸鹽（Cl2MBP）是一種親水性分子，當(dāng)氯膦酸鹽包裹在脂質(zhì)體中時(shí)，巨噬細(xì)胞通過胞吞攝取脂質(zhì)體，隨后在磷脂酶介導(dǎo)下破壞脂質(zhì)體雙層，并在細(xì)胞內(nèi)釋放C12MDP，將不可逆地?fù)p傷誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡[14]。

本次實(shí)驗(yàn)中，有兩只肥胖小鼠在灌胃利福平600 mg/kg3次后出現(xiàn)死亡，解剖后發(fā)現(xiàn)氣管、胃和肺組織均未出現(xiàn)損傷，但肝組織存在嚴(yán)重的損傷效果。后期其他同組動(dòng)物血清和切片檢測(cè)也發(fā)現(xiàn)利福平600 mg/kg組小鼠存在嚴(yán)重肝損傷，ALT和AST含量遠(yuǎn)高于肥胖小鼠其他給藥組，推測(cè)死亡小鼠可能是肝損傷過于嚴(yán)重，加上多次給藥加重了損傷效果導(dǎo)致了死亡，提示利福平對(duì)肥胖動(dòng)物的敏感性高于正常小鼠，與肝損傷結(jié)果一致，可進(jìn)一步佐證研究結(jié)論。

本文研究發(fā)現(xiàn)注射氯膦酸脂質(zhì)體后，小鼠體重下降，其血清ALT、AST和TBA水平顯著升高，肝組織炎癥反應(yīng)加重，但對(duì)肝臟中脂質(zhì)含量無(wú)影響，提示注射氯膦酸脂質(zhì)體這種剔除Kupffer細(xì)胞的方法會(huì)對(duì)肝組織以及功能造成一定的影響，但沒有參與NASH早期階段的發(fā)生和發(fā)展；利福平用于Kupffer細(xì)胞剔除小鼠，同樣會(huì)引起肝臟發(fā)生相似程度的NASH樣改變，且其程度有明顯加重的趨勢(shì)，這種作用趨勢(shì)可能與氯膦酸脂質(zhì)體清除Kupffer細(xì)胞所引起的肝損傷有關(guān)，也表明利福平致小鼠NASH變化與肝臟Kupffer細(xì)胞無(wú)明顯關(guān)聯(lián)。

綜上所述，利福平所致NASH作用與胰島素抵抗、肝臟脂質(zhì)堆積程度密切相關(guān)，與肝組織功能狀態(tài)密切相關(guān)，但與Kupffer細(xì)胞無(wú)明顯關(guān)聯(lián)。提示利福平在臨床用于結(jié)核病治療時(shí)應(yīng)增加檢測(cè)患者肝功能以及脂肪肝，對(duì)于預(yù)防利福平所致的肝損傷具有重要的參考價(jià)值。

參 考 文 獻(xiàn)

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