血清miR-142在急性腦梗死患者中的表達及預后評估研究

周倩文 朱圓圓

1 湖北省第三人民醫院神經內科，湖北省武漢市 430000； 2 宜興市人民醫院老年科

腦梗死是一種以高發病率、高殘疾率和高死亡率為特征的急性缺血性腦血管病，也是導致死亡的第二大原因[1]。近年來，盡管缺血性卒中的診療有了巨大的進步，但大部分患者的預后依然不盡人意，因此，尋找早期評估腦梗死預后的指標是卒中領域研究的重點。microRNA(miRNA)在血清中可以穩定存在，在神經系統疾病的診斷、預后評估中具有良好的潛力。近年研究顯示，miR-142在缺血再灌注小鼠模型中顯著增加[2]，并與神經功能障礙程度密切相關，提示miR-142或可成為評估缺血性腦卒中病情和預后的外周血指標。本研究在此基礎上，觀察了急性動脈粥樣硬化型腦梗死患者血清miR-142的表達變化，并評估了其對腦梗死早期病情相關性及其對腦梗死預后的預測價值，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取 2018年1月—2021年12月在湖北省第三人民醫院神經內科住院治療的首發急性腦梗死患者(腦梗死組)。入組標準：(1)首次發作，符合中國急性缺血性腦卒中診治指南中急性腦梗死診斷標準，經CT或MRI證實為缺血性腦卒中；(2)發病時間在24～48h內；(3)TOAST分型符合大動脈粥樣硬化型腦梗死。排除標準：(1)既往有腦卒中、中樞神經系統感染、癲癇等神經系統病史；(2)合并嚴重的肝腎功能不全、血液系統疾病、腫瘤、自身免疫系統疾病、精神疾病等；(3)存在其他原因導致的肢體功能障礙，或其他原因不能配合完成量表評分；(4)合并其他原因經研究者判斷不宜入組。所有腦梗死患者接受腦梗死常規治療，3個月后進行改良Rankin量表(mRS)評分，mRS≤2分的患者納入預后良好組(共125例)，mRS>2分納入預后不良組(共41例)。同時納入年齡、性別與腦梗死組患者匹配的我院健康體檢人員100例作為對照組，排除標準同上一致。本研究通過湖北省第三人民醫院醫學倫理委員會審核批準，所有受試者均簽署知情同意書。

1.2 一般資料收集 所有受試者收集一般人口學資料，包括年齡、性別、吸煙史、飲酒史、高血壓史、糖尿病史。

1.3 血清生化指標及miR-142測定 所有受試者入組后，于次日空腹采取黃色促凝管抽取靜脈血5ml，靜置30min后于3 000r/min離心10min，收集上清液檢測糖化血紅蛋白、空腹血糖、膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、同型半胱氨酸。取500μl血清樣品，Trizol法提取miRNA，并測定其RNA濃度。按照FastQuant RT Kit(with gDNase)試劑盒反轉錄cDNA。根據miRcute增強型miRNA熒光定量檢測試劑盒(SYBR Green)加樣上機檢測，以U6為內參，采用2-ΔΔct法分析miR-142相對表達水平。

1.4 NIHSS量表和mRS量表評分 所有腦梗死患者入組后由固定的兩名經驗豐富的神經內科醫生進行NIHSS量表評定并記錄，并在90d隨訪時進行mRS評分判斷預后。

2 結果

2.1 各組一般資料比較 腦梗死組患者男性比例、吸煙史、高血壓比例、糖尿病比例、糖化血紅蛋白、空腹血糖、甘油三酯、低密度脂蛋白、同型半胱氨酸明顯高于對照組(P<0.05)，而年齡、飲酒史、膽固醇、高密度脂蛋白與對照組比較未見明顯差異(P>0.05)。腦梗死預后良好組年齡、高血壓比例、糖尿病比例、低密度脂蛋白和同型半胱氨酸明顯低于預后不良組。見表1。

表1 各組一般資料比較

2.2 腦梗死患者血清miR-142水平表達變化 腦梗死患者血清miR-142相對表達水平為5.37±1.07，對照組為2.90±1.17，腦梗死組miR-142水平明顯高于對照組(P<0.01)。腦梗死預后良好組miR-142相對表達水平為4.79±0.95，預后不良組為5.91±1.14，預后良好組miR-142表達低于預后不良組(P<0.01)；差異均具有統計學意義(見圖1)。

圖1 腦梗死患者血清miR-142水平表達情況

2.3 腦梗死患者血清miR-142水平與NIHSS評分相關性分析 對腦梗死患者血清miR-142水平與NIHSS評分行pearson相關性分析，結果顯示血清miR-142水平與NIHSS評分具有正相關關系，其相關系數r=0.576，P<0.001，見圖2。

圖2 腦梗死患者血清miR-142與NIHSS評分相關性分析散點圖

2.4 腦梗死患者預后不良危險因素的Logistics回歸分析 以腦梗死患者預后為因變量，對預后不良組和預后良好組的年齡、高血壓、糖尿病、低密度脂蛋白和同型半胱氨酸血清miR-142水平和NIHSS評分進行Logistics回歸分析，結果顯示，miR-142、低密度脂蛋白和NIHSS評分為腦梗死預后不良的危險因素。見表2。

表2 腦梗死患者預后不良危險因素Logistics回歸分析

2.5 miR-142對腦梗死診斷和預后的評估價值 分別繪制miR-142應用于腦梗死診斷和預后不良預測的ROC曲線，結果顯示，miR-142在腦梗死診斷的ROC曲線下面積為0.849，敏感性82.00%，特異性74.29%。miR-142在腦梗死預后預測的ROC曲線下面積為0.771，敏感性73.17%，特異性70.40%，而當聯合低密度脂蛋白和NIHSS評分后，ROC曲線下面積為0.858，敏感性82.93%，特異性76.80%，見圖3。

圖3 miR-142在腦梗死診斷和預后評估中ROC曲線分析

3 討論

腦梗死是腦卒中的常見類型之一，其中動脈粥樣硬化型腦梗死占約60%，是人類致殘和死亡的主要原因之一[3]。目前臨床上腦梗死的診斷依據于客觀的影像學數據及顯著的臨床特征，但預后因個體化差異仍局限于主觀的臨床經驗[4]。miRNAs是真核生物中具有調控基因表達作用的一類內源性非編碼RNA，可參與調節各種生理病理過程，甚至在疾病的早期診斷、治療和預后評估中都發揮著重要作用[5]。既往大量研究顯示，miR-142可參與調控炎癥反應及免疫細胞功能，而卒中后炎癥反應程度已被廣泛認為是影響腦梗死預后的核心要素[6-7]。盡管諸多動物和細胞層面的證據表明miR-142在參與了腦缺血和再灌注的調控[8-9]，但miR-142在腦梗死患者中如何變化，能否作為腦梗死病情和預后評估的有效生物學標記物，目前尚未明確。在此基礎上，本研究通過比對腦梗死患者與健康人群血清miR-142的表達水平，發現miR-142在AIS患者血清中表達升高，并且在不同預后分組中，亦發現了miR-142存在表達差異，高度提示了血清miR-142或可應用于早期評估腦梗死患者的預后。

影響腦梗死預后的因素眾多，在本研究中，盡管一般資料的收集仍不全面，但腦梗死組與對照組間的差異因素及不同預后腦梗死患者間的差異因素均在既往研究中獲報道[10-11]，而由于樣本量和病例組成的差異，不同研究中呈現的結果也具有一定的差別。不僅如此，本研究在發現血清miR-142與腦梗死預后存在對應關系的基礎上，分析了miR-142與NIHSS評分的相關性，高度提示了miR-142與神經功能缺損程度密切相關，可用于腦梗死早期的病情評估。隨后跟進的Logistics回歸對組間差異因素進行了進一步評估，結果顯示血清miR-142、低密度脂蛋白和入院的NIHSS評分均為腦梗死不良預后的獨立危險因素。結合既往文獻報道，推測miR-142可能通過調控卒中后的炎癥反應及免疫細胞功能從而影響了預后結局，這也需要動物和細胞實驗進一步探索。此外，ROC曲線分析遞呈的結果顯示，miR-142在腦梗死的鑒別和預后結局的預測中均具有良好的應用價值，而在將低密度脂蛋白、入院時NIHSS評分和miR-142聯合分析后，相應的ROC獲得更好的曲線下面積、敏感性和特異性，值得臨床推廣和使用。

綜上所述，血清miR-142在腦梗死患者血清中表達升高，可作為評估腦梗死病情和預后的良好外周血標記物。但本研究為小樣本單中心研究，樣本量較小，且僅關注了TOAST分型中的大動脈粥樣硬化性腦梗死患者，相關研究仍待進一步完善。