牛副結(jié)核病診斷與防控

何 春，吳利芳，周國燕，張 濤，黃劍鋒

（1.四川省涼山州農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，四川 西昌 615000；2.四川省西昌市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，四川 西昌 615000）

1 病原及危害

1.1 病原 牛副結(jié)核病的致病病原是副結(jié)核分枝桿菌，是一種寬在0.3～0.5 μm之間，長(zhǎng)在0.5～1.5 μm之間的革蘭氏陽性小桿菌，屬于分枝桿菌科分枝桿菌屬。

副結(jié)核分枝桿菌無鞭毛、無莢膜、無芽孢、需氧。根據(jù)菌株特性及致病力可將副結(jié)核分枝桿菌分為Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。其中，造成牛副結(jié)核病的為Ⅱ型菌株。

由于副結(jié)核分枝桿菌不能產(chǎn)生分枝桿菌素，因此無法在自然環(huán)境下進(jìn)行增殖。該菌有較強(qiáng)的抵抗力，在外界環(huán)境中11個(gè)月，在糞便和土壤中數(shù)月，在河水中5～6周仍能保持活性，其生長(zhǎng)的最適溫度在38～40 ℃之間，最適pH 值為7.0 左右。副結(jié)核分枝桿菌對(duì)高溫敏感，在63 ℃下30 min，在70 ℃下20 min，在80 ℃下5 min 失去活性。另外，3%來蘇爾和3%甲醛等消毒劑處理可使其失去感染性。對(duì)副結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基上生長(zhǎng)出無色、透明的半球形菌落，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，菌落顏色變暗，形狀變?yōu)槿轭^樣。

1.2 危害 副結(jié)核分枝桿菌主要感染牛的消化系統(tǒng)，導(dǎo)致病牛出現(xiàn)慢性腸炎。病菌最先感染小腸系膜以及腸淋巴結(jié)。前期感染不會(huì)導(dǎo)致牛出現(xiàn)臨床癥狀，感染嚴(yán)重時(shí)，病牛腸道嚴(yán)重病變，最終病菌分布于全身。副結(jié)核分枝桿菌可導(dǎo)致病牛嚴(yán)重腹瀉、腸道出血，產(chǎn)奶量下降、機(jī)體消瘦。該病在世界范圍內(nèi)廣泛流行，人感染后可發(fā)生腸道過敏或潰瘍性腸炎。

2 流行病學(xué)

2.1 傳染源 牛副結(jié)核病的主要傳染源是病牛和帶菌牛。

2.2 易感動(dòng)物 主要易感動(dòng)物是牛，尤其是6月齡以內(nèi)的犢牛，其次是鹿、山羊和綿羊等反芻動(dòng)物及犀牛、野牛、野羊等野生動(dòng)物。此外駱駝、馬、豬、猴、狐貍、斑鳩、烏鴉、鴿等動(dòng)物和人類也可感染。

2.3 傳播途徑 病菌主要通過飲水、飼料、用具等經(jīng)由消化系統(tǒng)傳播，少部分病例經(jīng)血液傳播。奶牛感染后可通過母乳將病菌傳播給犢牛，及通過子宮垂直傳播給胎兒。

2.4 流行特點(diǎn) 該病多呈地方性流行，發(fā)病率不高，發(fā)病緩慢，但死亡率極高，其可快速傳播，難以根除。本病潛伏期通常為半年至一年甚至更長(zhǎng)，其一年四季均可發(fā)生，春季、秋季發(fā)病率最高。妊娠期和哺乳期母牛出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)后，可誘發(fā)該病。

3 臨床癥狀

發(fā)病初期病牛食欲不振，消化不良，輕微腹瀉，排稀軟便，隨后水樣腹瀉，糞中伴有少量氣泡，其眼窩下陷，被毛干澀、無光澤，體重顯著減輕，消瘦。綿羊、山羊感染癥狀與牛相似，均以持續(xù)性腹瀉和漸進(jìn)性消瘦為主，部分病羊可保持食欲，病程后期可并發(fā)肺炎。

4 病理變化

主要病變發(fā)生在消化系統(tǒng)，病?？漳c、回腸和結(jié)腸前段腸壁增厚至正常的3～30 倍左右，其中回腸病變最為明顯。腸內(nèi)有少量氣泡和大量黏稠而混濁的液體，腸黏膜皺褶、充血。腸系膜和漿膜下的淋巴多呈暗褐色索狀，顯著腫大，切面外翻、多汁。

5 診斷

5.1 糞便檢查法 采取病牛糞便中的黏液或血絲與3倍量的0.5%氫氧化鈉液混合均勻，隨后通過55 ℃水浴進(jìn)行30 min 乳化，在充分過濾后，1000r/min離心5min，取上清3000r/min離心30min后，使用沉淀進(jìn)行涂片，抗酸染色，鏡檢，若發(fā)現(xiàn)呈堆或叢狀的紅色細(xì)小桿菌，則判為陽性。

5.2 變態(tài)反應(yīng)法 此方法僅適用于發(fā)病前期，通?？稍诓∨Ｗ髠?cè)頸部中上1/3 處皮內(nèi)注射0.5 mg/mL副結(jié)核菌素，并測(cè)量皮厚。72 h后注射部位出現(xiàn)紅、腫、熱、痛等炎性反應(yīng)，并且注射前后的皮厚差大于等于4 mm，則判為陽性。

5.3 血清學(xué)診斷 可采用的血清學(xué)診斷方法有補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、ELISA、間接血凝試驗(yàn)、免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)、對(duì)流免疫電泳及免疫熒光抗體實(shí)驗(yàn)等。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)具有良好的特異性和敏感性，可與變態(tài)反應(yīng)法配合使用。瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)操作便捷，具有良好的特異性，但其敏感性低，不適于診斷隱性感染病牛。ELISA具有良好的敏感性和特異性，可代替補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)進(jìn)行廣泛使用。

5.4 分子生物學(xué)方法 常用的是特異性DNA探針法和PCR 法，DNA 探針法能夠準(zhǔn)確快速地檢測(cè)出糞便中副結(jié)核分枝桿菌的DNA 片段。PCR 能夠高效快速地檢測(cè)出乳、乳制品和反芻動(dòng)物中的副結(jié)核分枝桿菌，是可靠且實(shí)用的診斷方法。

6 防控措施

6.1 治療 中藥治療，可選用蒼術(shù)30g、陳皮30g、厚樸30 g、豬苓30 g、砂仁30 g、澤瀉30 g，大青葉50 g、黃連50 g、黃白頭翁50 g、老鸛草250 g 研磨成粉，用開水和陳醋進(jìn)行沖調(diào)，候溫給病牛灌服，每天1次，連續(xù)灌服20 d左右。腹瀉嚴(yán)重的病牛可增加雙花50g、連翹50g、郁金50 g、知母30 g、焦梔子30 g、大黃30 g。若病牛食欲下降，可在配方中添加山楂、龍膽草等，提高食欲。脫水嚴(yán)重的病牛可在配方中添加車前子等。用開水沖調(diào)時(shí)還可在藥液中添加1%的鹽水，防止病牛因嚴(yán)重脫水而死亡。

6.2 免疫接種 預(yù)防牛副結(jié)核病的疫苗有菌體成分苗、全菌苗和活苗等。疫苗并不能夠全面防控，還應(yīng)通過加強(qiáng)飼養(yǎng)管理等對(duì)本病進(jìn)行預(yù)防。

6.3 定期檢疫 可采用變態(tài)反應(yīng)等檢測(cè)方法對(duì)牛群進(jìn)行檢疫。檢疫每隔三個(gè)月進(jìn)行一次，連續(xù)三次檢疫均為陰性的判定為健康牛，健康牛每年也應(yīng)進(jìn)行兩次檢疫。檢疫結(jié)果為陽性的病牛及時(shí)撲殺，同群的牛實(shí)施緊急免疫和隔離，必要時(shí)也應(yīng)撲殺。被污染的牛舍、地面和用具等用漂白粉、生石灰、苯酚及氫氧化鈉等進(jìn)行嚴(yán)格消毒，牛糞進(jìn)行發(fā)酵處理。

6.4 飼養(yǎng)管理 禁止從疫區(qū)引入種牛，牛引入前進(jìn)行嚴(yán)格的隔離和檢疫。根據(jù)牛的體況和生長(zhǎng)階段進(jìn)行分群飼養(yǎng)，保持合理的飼養(yǎng)密度和通風(fēng)良好。根據(jù)牛的不同生長(zhǎng)階段調(diào)整飼料配方，及時(shí)補(bǔ)充維生素和微量元素，不喂發(fā)霉、變質(zhì)的日糧。做好牛群凈化工作，犢牛出生后立即進(jìn)行隔離飼養(yǎng)，同時(shí)禁止給犢牛喂食帶菌母乳，初乳應(yīng)消毒后再喂。犢牛6月齡以內(nèi)應(yīng)進(jìn)行副結(jié)核病檢疫，陽性犢牛立即淘汰。犢牛飼養(yǎng)區(qū)與病牛隔離區(qū)保持適當(dāng)距離，避免病原傳播。