子宮頸鱗狀細胞癌組織中SIAH2、CARM1 的表達與意義

陳湧彧

（福建省漳浦縣醫院病理科 漳浦 363200）

子宮頸癌是原發于宮頸部位的惡性腫瘤，也是女性生殖道最為常見的婦科惡性腫瘤。根據2018 年世界衛生組織（WHO）發布，在全球范圍內宮頸癌的發病率在10 萬人中約有13 人，死亡率為每10 萬中約有7 人[1]。近年來，隨著我國健康教育、人乳頭狀瘤病毒（HPV）疫苗接種及宮頸癌篩查的加強，宮頸癌的發病率與死亡率已有明顯下降趨勢，但呈年輕化趨勢發展。宮頸癌大多數為鱗癌，約占總發病率的90%[2]。目前，臨床認為HPV 病毒持續感染是引起子宮頸癌的主要原因，且幾乎所有的宮頸癌都與HPV感染有關，但單純病毒感染無法促進腫瘤的全部進展[3]。因此，對子宮頸癌患者進行早期篩查并分析可能產生影響的因素對制定診療方案、改善患者預后具有重要意義。近年來，已有眾多學者從基因、分子等方面研究子宮頸癌的發病機制，并分析子宮頸癌病變潛在的細胞與分子機制，這在后期治療中具有重要指導作用[4]。SIAH2 屬于E3 泛素連接酶，是臨床應用較為廣泛的腫瘤因子，可促進腫瘤細胞增殖，與惡性腫瘤的發生與發展密切相關。CARM1 屬于蛋白質精氨酸甲基轉移酶家族成員，在乳腺癌、結腸癌、前列腺癌等多種癌癥中均可發揮促進作用，在DNA修復、mRNA 剪接、轉錄調控中具有重要價值[5]。鑒于此，本研究將探討子宮頸鱗狀細胞癌組織中SIAH2、CARM1 的表達及與臨床特征間的關系?，F報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 前瞻性選取2020 年5 月至2022年5 月漳浦縣醫院收治的120 例子宮頸鱗狀細胞癌患者為研究對象，年齡28～70 歲，平均年齡（46.78±4.31）歲；體質量指數（BMI）22.8～30.4 kg/m2，平均BMI（24.58±2.64）kg/m2；國際婦產科聯盟（FIGO）分期：Ⅰ期 35 例，Ⅱ期 50 例，Ⅲ期 20 例，Ⅳ期 15例；病理分級：低分化71 例，中高分化49 例。本研究經院內醫學倫理委員會批準（批準文號：福建省漳浦縣醫院倫理字2019000034 號）。

1.2 入組標準 納入標準：子宮頸癌符合《中國子宮頸癌篩查及異常管理相關問題專家共識（二）》[6]中相關診斷標準，且經臨床確診為鱗狀細胞癌；均簽署知情同意書。排除標準：合并其他惡性腫瘤者；嚴重心、肝、腎等臟器功能不全者；合并嚴重自身免疫系統功能障礙者；合并凝血功能障礙者；認知功能及精神功能障礙依從性差者；入組前接受過相關放化療及其他治療者。

1.3 研究方法

1.3.1 SIAH2、CARM1 檢測方法 取所有子宮頸鱗狀細胞癌及癌旁子宮組織進行檢查，癌旁組織需經臨床形態學證實為正常子宮頸組織且無病變殘留，具體方法如下：將子宮頸鱗狀細胞癌組織及癌旁組織樣本離體后取少量放入液氮后置入-80℃的環境中保存；采用免疫組化SP 法染色，所有組織需經10%的中性福爾馬林固定并采用石蠟包埋，行4 μm厚度的連續切片；使用二甲苯脫蠟處理，梯度乙醇脫苯、水化，并采用高溫高壓下抗原修復，根據SP 試劑盒說明書進行對應染色處理。SIAH2、CARM1 采用磷酸鹽緩沖液（Phosphate Buffered Saline,PBS）進行3 次洗滌后使用封閉液封閉，分別購自上海西格生物科技有限公司、上海谷研實業有限公司。染色結果由兩位經驗豐富的病理醫師進行閱片審核，每張切片隨機選擇5 個高倍視野進行觀察，每個視野計數200 個腫瘤細胞。（1）按照陽性細胞百分比進行計分：無陽性細胞記0 分，陽性細胞數≤10%則記1分，11%≤陽性細胞數≤50%則記2 分，51%≤陽性細胞數≤80%則記3 分，陽性細胞數＞80%則記4分。（2）根據著色強度進行計分：若細胞未著色則計0 分，淺黃色計1 分，棕黃色計2 分，黃褐色記3 分。將兩項得分相乘作為最終結果，若結果＜3 分則為陰性，若≥3 分則為陽性。

1.3.2 臨床病理特征 統計所有患者的年齡（＜50歲，≥50 歲）、腫瘤直徑（≤4 cm，＞4 cm）、分化程度（低分化，中高分化）、FIGO 分期（Ⅰ～Ⅱ期，Ⅲ～Ⅳ期）、肌層浸潤深度（＜1/2，≥1/2）及有無淋巴結轉移（有，無）等。

1.4 統計學方法 采用SPSS23.0 軟件處理數據。計量資料以（）表示，采用t檢驗；計數資料以%表示，采用χ2檢驗；多因素采用Logistic 回歸分析；P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 SIAH2、CARM1 表達情況 子宮頸鱗狀細胞癌組織中SIAH2、CARM1 的陽性表達率明顯較子宮頸鱗狀細胞癌旁組織高，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表 1。

表1 子宮頸鱗狀細胞癌中SIAH2、CARM1 表達情況對比[例（%）]

2.2 SIAH2、CARM1 表達與臨床病理特征SIAH2、CARM1 通路相關蛋白陽性表達與年齡、腫瘤直徑無關（P＞0.05），但可能與分化程度、肌層浸潤深度、FIGO 分期、淋巴結轉移有關（P＜0.05）。見表2。

表2 SIAH2、CARM1 表達與臨床病理特征的單因素分析

2.3 多因素分析 由Logistic 回歸分析結果得出，子宮頸鱗狀細胞癌組織SIAH2、CARM1 陽性表達率在低分化、肌層浸潤深≥1/2、FIGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結轉移的患者中較高，差異有統計學意義（OR＞1，P＜0.05）。分別見表 3、表 4、表 5。

表4 SIAH2 表達與臨床病理特征的多因素分析

表5 CARM1 表達與臨床病理特征的多因素分析

3 討論

子宮頸癌是女性生殖道最為常見的惡性腫瘤，由于該病早期多無明顯癥狀表現，被確診時多已至病情中晚期。因此尋找子宮頸癌發生、發展過程中相關基因改變不僅可為疾病早期的診斷提供意見，還可為后續的治療方案制定提供參考。臨床研究發現，腫瘤組織中相關細胞分子水平檢測是目前診斷疾病的有效方式，臨床部分癌組織細胞的增殖及侵襲均與相關因子的表達密切相關[7]。其中SIAH2、CARM1在臨床多種惡性腫瘤中均有異常表達，但與子宮頸癌的關系報道鮮有。

SIAH2 為果蠅基因產物的類似物，其定位于3Q25 號染色體，編碼蛋白SIAH2 擁有E3 泛素連接酶的活性，可參與底物蛋白泛素化與水解的作用對部分細胞功能造成影響，如細胞增殖、低氧化、信號通路的傳導、神經中樞的調節等[8]。近年來，國內外學者研究發現，SIAH2 可扮演癌基因參與如肺癌、喉鱗狀細胞癌、乳腺癌等癌癥組織中均有過高表達，且隨著病情惡性程度及病理分期的不斷增高，SIAH2的陽性表達率也隨之增加[9～10]。此外，SIAH2 在腫瘤的發展過程中具有明顯促進作用，其N 端包含環域結構的催化區域，C 端則為高度保守的底物結合，環指區域與N 末端結合介導可引起側支發芽因子同源物2（SPRY2）蛋白酶的講解，實現細胞外調節蛋白激酶（ERK） 的磷酸化，促進血管的再生[11]。CARM1 屬于蛋白質精氨酸甲基轉移酶（Protein arginine Methyltransferase,PRMT）家族成員，其抑制劑不僅具有抗腫瘤活性的效果，還可提高T 細胞的抗腫瘤能力，對改善免疫微環境及提高機體抗腫瘤活性具有重要意義[12]。

本研究結果顯示，SIAH2、CARM1 通路相關蛋白陽性表達與年齡、腫瘤直徑無關，但可能與分化程度、肌層浸潤深度、FIGO 分期、淋巴結轉移有關。進一步經Logistic 回歸分析結果得出，子宮頸鱗狀細胞癌組織SIAH2、CARM1 陽性表達率在低分化、肌層浸潤深≥1/2、FIGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結轉移的患者中較高。結果提示SIAH2、CARM1 通路相關蛋白在子宮頸鱗狀細胞癌組織中的陽性表達率較癌旁組織高，且與臨床病理特征有一定關系。分析原因可能是由于：SIAH2 在子宮頸細胞癌組織中呈彌漫陽性，而僅在正常子宮頸有增殖活性的細胞中表達，從正常子宮頸組織至子宮頸鱗狀細胞癌組織中陽性率逐漸升高，且隨著疾病惡性程度及臨床分期的升高，其表達水平也逐漸升高[13]。瞿叢新等[14]以128 例乳腺腫瘤切除治療患者為研究對象，通過血清學檢測發現SIAH2 在乳腺癌腫瘤的增殖、侵襲轉移中關系密切，可作為判斷腫瘤惡性程度的有效指標，均可說明SIAH2 在惡性腫瘤的發生發展中起到重要作用。CARM1 與多種基因特異性轉錄因子關系密切，可作為調控核轉錄因子 -κB（NF-κB）、P53 基因、核轉錄因子E2Fs 等分子的開關，從而參與細胞基因表達、蛋白質穩定性的調節及組織發育等多進程。Inoue F 等[15]通過對CARM1 在子宮內膜癌中的表達研究發現，CARM1 消除了子宮內膜癌細胞的抗腫瘤機制，且與正常子宮內膜組織相比在癌組織中呈顯著過表達，可作為子宮內膜癌強有力的治療靶點。

綜上所述，SIAH2、CARM1 在子宮頸鱗狀細胞癌組織中的陽性表達率較癌旁組織高，且與臨床病理特征（分化程度、病理類型、臨床分期、淋巴結轉移等）有一定關系。