高靈敏HBV-DNA技術在乙肝兩對半檢測中的應用價值①

張 飛 劉燕飛

(濮陽市人民醫院檢驗科, 河南 濮陽 457000)

乙型肝炎病毒(pepatitis B virus,HBV)是導致乙型病毒性肝炎的常見嗜肝性病毒,可在肝細胞內寄生并造成嚴重肝損傷,誘發肝炎、肝纖維化、肝壞死,且30%以上患者存在反復性肝損傷,嚴重威脅患者健康[1]。HBV感染者多表現為活動性乙型肝炎,早期檢查診斷對維護患者健康有重要意義。乙肝兩對半檢測即乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗體(抗-HBe)、乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗體(抗-HBs)、核心抗體(抗-HBc),是肝功能檢測最常用方法,操作簡單,成本較低,獲取結果較快,但其局限性在于難以確定HBV傳染能力、復制能力。目前臨床對HBV-DNA的研究逐漸增多,可直接分析HBV復制情況,對判斷乙肝感染程度有直接作用。但高靈敏HBV-DNA技術作為新興技術,其與乙肝兩對半檢測相關性仍缺少相關數據支持。本研究選取本院HBV感染患者,以分析高靈敏HBV-DNA技術在乙肝兩對半檢測中的應用價值。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取濮陽市人民醫院2018-11～2020-10 HBV感染患者94例。納入標準:經HBV抗原、抗體檢測確診為單純性HBV感染;年齡18～60歲;知情本研究、簽署同意書。排除標準:合并惡性腫瘤、血液系統或免疫系統疾病、肝功能異常、急慢性感染、肝部惡性腫瘤;近期經抗病毒治療;合并心腦血管疾病;認知功能障礙。根據乙肝兩對半檢測結果分為3組:A組(n=21)均為大三陽患者,即抗-HBc、HBeAg、HBsAg陽性;B組(n=45)均為小三陽患者,即抗-HBc、HBsAg、抗-HBe陽性;C組(n=28)為其他類型患者。A組男14例,女7例;年齡22～53歲,平均(37.58±7.26)歲;體質量指數18.3～26.8kg·m-2,平均(22.68±1.87)kg·m-2;酗酒史5例。B組男30例,女15例;年齡20～56歲,平均(38.35±7.41)歲;體質量指數18.0～26.5kg·m-2,平均(22.41±1.93)kg·m-2;酗酒史9例。C組男18例,女10例;年齡19～55歲,平均(36.31±7.38)歲;體質量指數18.7～27.1kg·m-2,平均(22.90±1.96)kg·m-2;酗酒史4例。3組基線資料均衡可比(P>0.05)。

1.2 方法

采集空腹靜脈血3mL,離心處理(離心5min,轉速2500r·min-1),取上層清液置于-20℃待檢。(1)乙肝兩對半檢測:儀器選擇強生公司的VITROS 360型全自動免疫分析儀及配套試劑盒,嚴格按照說明操作,檢測。HBsAg、HBeAg、抗-HBc、抗-HBe、抗-HBs。陽性標準:HBeAg濃度>0.3 PEIU·mL-1;HBsAg濃度>0.2 ng·mL-1;抗-HBc濃度>0.9 PEIU·mL-1;抗-HBe濃度>0.3 PEIU·mL-1;抗-HBs濃度>10.0 mIU·mL-1。(2)高靈敏HBV-DNA技術檢測:取DNA濃縮液100μL加入血清100μL混勻,離心處理(離心10min,轉速12000r·min-1),棄上層清液,取HBV-DNA提取液20μL置入管底沉淀,劇烈振蕩,恒溫煮沸10min,離心處理(離心8min,轉速12000r·min-1),取上層清液;采集2μL樣品、標準品置入PCR反應管,離心處理(離心30s,轉速5000r·min-1),置入美國Bio-Rad公司生產的IQ5型熒光定量PCR儀,設置參數預變性2min 93℃、1個循環,變性30s 94 溫度、40個循環,94℃至60℃退火、延伸30s、40個循環,讀取熒光值。陽性標準:HBV-DNA濃度>5.0lg copies·mL-1。

1.3 觀察指標

(1)比較3組HBV-DNA陽性率。(2)比較3組HBV DNA濃度分布情況。(3)比較HBsAg、HBeAg檢出結果與HBV-DNA陽性符合率的關系。

1.4 統計學方法

采用SPSS22.0處理數據,計數資料以n(%)表示、χ2檢驗,等級資料比較采用Ridit檢驗,檢驗標準α=0.05。

2 結果

2.1 3組HBV-DNA陽性率比較

A組21例患者中檢出HBA-DNA陽性18例,B組45例患者中檢出HBA-DNA陽性13例,C組28例患者中檢出HBA-DNA陽性2例。3組HBV-DNA陽性率比較差異有統計學意義,且A組85.71%(18/21)>B組28.89%(13/45)>C組7.14%(2/28)(χ2=33.983,P<0.001)。

2.2 3組HBV-DNA濃度分布情況比較

3組不同HBV-DNA濃度分布情況比較差異有統計學意義,且A組HBV-DNA濃度分布>B組>C組(P<0.05),見表1。

表1 3組HBV-DNA濃度分布情況[n(%)]

2.3 HBsAg、HBeAg檢出結果與HBV-DNA陽性符合率的關系比較

HBV-DNA陽性患者中,HBsAg陽性符合率為93.94%(31/33),明顯高于HBeAg陽性符合率54.55%(18/33)(χ2=13.390,P<0.001),見表2。

表2 HBsAg、HBeAg檢出結果與HBV-DNA陽性符合率的關系比較

3 討論

HBV感染在世界范圍內均有較高發生率,不同區域雖存在一定差異,但總體處于較高水平,有數據顯示,全世界曾有20億人感染過HBV,且3.5億左右為HBV慢性感染,每年約100萬人由于HBV感染導致肝硬化、肝衰竭、肝癌,是危害社會公共健康的嚴重問題[2]。HBV可侵蝕肝細胞,在肝細胞內寄生并復制,導致肝功能異常,誘發乙型肝炎后可由于免疫復合物而造成肝外損傷,威脅患者健康[3]。因此,通過早期檢查確診并進行干預,對改善患者預后有重要臨床意義。

乙肝兩對半檢測主要是對乙肝表面抗體、表面抗原、核心抗體、e抗體、e抗原的檢測,是目前診斷HBV感染的主要依據,尤其HBeAg具有傳染性強、繁殖快、病毒復制活躍等特點,接觸后傳染風險高[4]。近年來隨著DNA技術的不斷發展,高靈敏HBV-DNA技術逐漸受到臨床關注,由于具有線性范圍廣、檢測下限低等優勢,在HBV感染中的前景較好,是未來HBV感染檢測發展的主要方向。目前高靈敏HBV-DNA技術應用于HBV感染檢測具有較高特異性、靈敏度,若高靈敏HBV-DNA技術檢測結果為陽性,提示HBV傳染性較強,HBV-DNA濃度越高病毒復制能力越強[5]。本研究對不同類型HBV感染患者檢測,發現大三陽患者HBV-DNA陽性率及濃度分布情況均為最高,其次為小三陽患者,說明HBV-DNA與乙肝兩對半檢測存在一定關系,且通過檢測HBV-DNA可直接分析HBV情況。

HBV-DNA定量與乙肝兩對半檢測的相關性是乙型肝炎相關診療中研究的重點方向。有學者認為,乙肝兩對半檢測與HBV-DNA熒光定量及肝臟纖維化存在一定相關性,HBV-DNA熒光定量及肝臟纖維化可用于分析HBV病毒傳染性及復制能力,評估肝硬化情況,從而指導臨床治療[6]。另有報道顯示,通過熒光定量分析法檢測HBV-DNA與乙肝兩對半檢測對比,前S1抗原與HBV-DNA符合率>90%[7]。本研究進一步分析HBsAg、HBeAg檢出結果與HBV-DNA陽性符合率的關系,結果顯示HBsAg陽性符合率高達93.94%,而HBeAg陽性符合率僅為54.55%,相差39.39%,證實HBsAg陽性時HBV-DNA陽性率較高,二者具有較好一致性,呈正相關關系。因此,通過檢測HBsAg對分析HBV-DNA陽性情況有一定價值。但同時需指出,通過檢測HBsAg及HBeAg水平可間接判斷HBV-DNA情況,但并不能證實HBsAg、HBeAg轉陰HBV-DNA停止復制。本研究A組中HBV-DNA濃度<5.0 lg copies·mL-1的患者仍存在HBsAg陽性情況,其原因可能與機體C區基因突變、特異性免疫耐受有關。但同時應注意,HBV-DNA技術雖擁有較高檢出能力,但其局限性在于結果易受核酸污染影響,導致出現假陽性;同時高靈敏HBV-DNA技術作為新興技術,臨床對PCR實驗室相關管理文件中尚未明確相關要求,缺少對抗干擾能力、試劑盒性能驗證、室內質控等質量管理標準程序,臨床標準化管理存在一定難度,導致部分醫療實驗室、檢測機構檢測質量存在差異。

綜上所述,高靈敏HBV-DNA技術與乙肝兩對半檢測具有互補作用,其HBV-DNA與HBsAg存在正相關關系,二者聯合檢測對提高診斷準確率、提供臨床相關依據有重要價值。