非小細胞肺癌中PD-L1 免疫檢查點表達與預后的關系研究

姚紅方 趙艷紅 任兆強 劉訓超（通訊作者）

（菏澤市立醫院呼吸與危重癥醫學科，山東 菏澤 274000）

肺癌是全球范圍內造成死亡的主要原因之一，尤其是非小細胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer，NSCLC），其5 年生存率僅為20%[1-2]。近年來，免疫治療作為一種新的肺癌治療手段逐漸得到人們的關注。PD-L1 是一種免疫檢查點蛋白，在肺癌等惡性腫瘤中廣泛表達。它的主要功能是抑制免疫細胞的激活和攻擊腫瘤細胞。雖然ICIs 治療的臨床應用已取得了一定的成功，但其應用仍存在一些限制和挑戰，如ICIs 治療的反應缺乏預測性，ICIs 治療后患者存在嚴重的副作用等[3]。免疫檢查點的表達與ICIs 治療的反應密切相關。PD-L1 表達是當前研究中最為廣泛的免疫檢查點表達標志物，其表達與治療反應之間的關系并不明確。因此，研究其他免疫檢查點的表達，為NSCLC 患者ICIs 治療的預測和應用提供更全面、準確的指標，成為當前研究的重要方向。本研究，旨在探究多個免疫檢查點的表達與NSCLC 患者預后的關系,報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020 年1 月至2022 年1 月我院60 例非小細胞肺癌患者（均為無法手術治療的患者）為研究對象。男35 例，女25 例，年齡49 歲～71歲，平均年齡（59.6±7.1）歲。所有患者均被診斷為非小細胞肺癌，并經過組織學檢查確認。確診時，所有患者均無法進行手術治療。

1.2 方法 選取納入研究的腫瘤組織標本，使用免疫組織化學（IHC）檢測非小細胞肺癌（NSCLC）中PDL1 的表達方法如下：（1）組織樣本處理。從NSCLC 組織中切取薄片。組織處理過程中應注意避免組織干燥、壞死和其他傷害。使用10%緩沖福爾馬林（PFA）將切片固定，時間為16～24h。固定后的切片保存在70%乙醇中，并在制備切片前去除乙醇。（2）制備組織切片。將固定的NSCLC 組織切割成4～5um 厚度的切片，放置在含有組織膠原蛋白的玻片上。切片應保存在4℃冰箱中，避免在制備過程中產生水分。（3）抗體選擇和優化。選擇針對目標蛋白的高親和力、特異性和靈敏度的抗體，優化抗體的濃度和染色時間等參數，以獲得最佳的染色效果。（4）免疫組織化學（IHC）染色：將制備好的切片進行去蠟和抗原修復處理。將切片浸泡在2%的牛血清蛋白（BSA）中，加入適當濃度的抗體，允許其在切片上結合一段時間。使用二級抗體或酶標記的聚合物，對抗體進行檢測。（5）成像和分析：切片被顯微鏡下的成像系統記錄下來。可使用特定的軟件對圖像進行分析，以確定PD-1、PD-L1等表達水平。

1.3 觀察指標 （1）PD-L1 表達與患者臨床特征的相關性；（2）PD-L1 表達與生存期的關系；（3）PD-L1 表達與生存期和治療反應的關系（95%置信區間：反映了比值比的不確定性，置信區間越窄，說明估計值越可靠）；（4）PD-L1 表達與生存期和治療反應的關系。

1.4 統計學方法 通過SPSS 25.0 軟件處理，符合正態分布的計量資料，即通過（±s）表示，組間對比用t檢驗；計數資料用[例（%）]表示，組間對比用χ2檢驗；P＜0.05 表明組間差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PD-L1 表達與患者臨床特征的相關性 PD-L1表達水平在年齡、性別和吸煙史上存在一定差異。見表1

表1 PD-L1 表達與患者臨床特征的相關性

2.2 PD-L1 表達與生存期的關系 PD-L1 表達水平高的患者平均生存期比表達水平低的患者短，并且具有更窄的95%置信區間。見表2

表2 PD-L1 表達與生存期的關系

2.3 PD-L1 表達與治療反應的關系 PD-L1 表達水平高的患者治療反應差異較大，與表達水平低的患者相比，其差異治療反應的患者數明顯增多。見表3

表3 PD-L1 表達與治療反應的關系

3 討論

非小細胞肺癌是一種具有高度異質性的腫瘤，其預后和治療反應常常受到多種因素的影響。近年來，腫瘤免疫治療（Tumor Immunotherapy）已成為了治療非小細胞肺癌的重要方法之一。該治療方法利用患者自身的免疫系統攻擊腫瘤細胞，能在一定程度上提高治療效果和生存率。其中，PD-L1 免疫檢查點抑制劑（PD-L1 抗體）是腫瘤免疫治療中的重要類別之一，已被廣泛用于非小細胞肺癌的治療。PD-L1 免疫檢查點抑制劑并不是對所有患者都有效，其療效在不同患者間存在較大差異。這可能與患者的免疫狀態和其他治療相關因素有關[4]。

本研究中，探討了PD-L1 表達與預后的關系。結果PD-L1 表達水平在年齡、性別和吸煙史上存在一定差異，且非小細胞肺癌晚期患者中PD-L1 免疫檢查點的表達水平與患者的生存期和治療反應密切相關。PD-L1 表達水平在年齡、性別和吸煙史上存在一定的差異，可見需要為患者制定個性化的治療方案；PD-L1 表達水平高的患者平均生存期比表達水平低的患者短，并且具有更窄的95%置信區間，表明PDL1 表達水平的高低與患者預后密切相關。PD-L1 表達水平高的患者差異治療反應的患者數明顯增多，表明PD-L1 表達水平的高低與患者治療反應密切相關。PD-L1 高表達與更差的生存期和更好的治療反應有關聯，表明PD-L1 高表達可能意味著腫瘤細胞更容易逃避免疫系統的攻擊。PD-L1 蛋白與PD-1 受體的結合可抑制免疫細胞的活性，降低對腫瘤細胞的攻擊能力。因此，PD-L1 高表達可能會抑制免疫細胞的活性，導致腫瘤細胞更容易逃避免疫系統的攻擊，導致更差的生存期。當使用PD-L1 抑制劑治療時，PD-L1 高表達的患者可能會對該治療作出更好的反應，因為這種治療可逆轉PD-L1 和PD-1 受體的結合，釋放出被抑制的免疫細胞，增強免疫系統的攻擊能力，這可能導致PD-L1 高表達組患者的更好治療反應。基于以上結論，我們建議在制定非小細胞肺癌晚期患者的治療方案時，應充分考慮PD-L1 表達水平的高低，以提高治療效果和患者的預后。結果顯示，PD-L1 免疫檢查點可能是非小細胞肺癌治療和預后的一個重要因素，值得進一步研究和探索[5]。未來的研究應該著重于揭示PD-L1 表達的調控機制和相互作用網絡，及其與其他因素（如腫瘤突變負荷、T 細胞浸潤、炎癥等）之間的關系。

綜上，PD-L1 表達水平在年齡、性別和吸煙史等臨床特征上存在一定的差異，并且PD-L1 高表達與更差的生存期和更好的治療反應有關聯。因此，在制定個體化治療方案時，應綜合考慮患者的PD-L1 表達水平和其他臨床特征，以獲得更好地治療效果和生存期。