7 種藥食同源水提物對金黃色葡萄球菌的抑制作用

◎ 王 杰，樂靖雯，馬詩雅，田 浩

（河北東淼檢測科技股份有限公司，河北 保定 071000）

金黃色葡萄球菌是一種常見的革蘭氏陽性菌，也是常見的食源性致病菌，可通過污染乳制品、肉制品等蛋白質或淀粉含量豐富的食品引發食物中毒，導致人體免疫力下降，還易引發人體局部化膿性感染、肺炎、心包炎等疾病，嚴重時甚至會出現敗血癥，威脅人體生命安全[1-2]。既是食品又是中藥材的物質為“藥食同源物質”[3]。“藥食同源”理論萌芽可追溯至戰國時期，我國第一部中醫理論典籍《黃帝內經》奠定了“藥食同源”理論的基礎[4]。藥食同源物質資源豐富，是我國居民日常保健食品的重要組成部分。藥食同源物質食性強于藥性，性味多平和，具調養、康復、保健作用，可應用于藥酒、藥粥、煲湯、飲茶，極大地滿足了人們日常生活中預防疾病和保健的需求[5]。本文通過研究藥食同源物質對金黃色葡萄球菌的抑制作用，為控制食品中金黃色葡萄球菌的污染提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

蒲公英、胖大海、金銀花、香櫞、甘草、決明子和川貝母，購于北京同仁堂藥房；紙片（110705062）：直徑6 mm、厚度7 nm 的空白藥敏紙片，購于石家莊賽迪生物科技有限公司；一次性無菌接種環（編號：GT18001-10）、一次性無菌接種針（GT18001-2）、一次性無菌培養皿（直徑90 mm），購于北京陸橋技術股份有限公司；標準菌株金黃色葡萄球菌ATCC 6538，購于中國工業微生物菌種保藏管理中心，本研究采用三代生長期標準菌株。

1.2 儀器與試劑

TD10002C 電子天平，天津天馬衡基儀器有限公司；GI54DWS 高壓滅菌器，致微（廈門）儀器有限公司；H22-X3 電陶爐，九陽股份有限公司；BSC-1600 ⅡA2生物安全柜，蘇州安泰空氣技術有限公司；單道可調式移液器（100 ～1 000 μL），大龍共創實驗儀器（北京）有限公司；LRH-250 型生化培養箱，上海齊欣科學儀器有限公司。

Mueller-Hinton 瓊脂（MHA）（編號：220719）、營養瓊脂（編號：220308）、營養肉湯（編號：201224），北京陸橋技術股份有限公司；氯化鈉（編號：180502），天津市大茂化學試劑廠。

1.3 方法

1.3.1 提取物的制備

分別稱取所選的7 種中藥材10 g，加入400 mL蒸餾水浸泡30 min，煮沸后再用文火煎煮30 min，用12 層紗布過濾后，加入200 mL 蒸餾水煮沸，用文火再煎煮25 min，過濾藥液[6]。將兩次煎煮的藥液合并后，加熱對其進行濃縮，得到濃度C0：0.25 g·mL-1、C1：0.50 g·mL-1、C2：0.85 g·mL-1和C3：1.00 g·mL-1的 中草藥提取物。

1.3.2 水提物對金黃色葡萄球菌的抑制作用研究

按照WHO 推薦的K-B 法檢測金黃色葡萄球菌對7 種藥食同源水提物的敏感性。

（1）菌懸液的制備。用75%酒精擦拭裝有菌株的安瓿瓶后，用手掰斷瓶子的上半部分。取0.5 mL 無菌水注入菌株凍干管中，混勻為菌懸液，吸取0.2 mL菌懸液，打入NA 平板，將其涂布均勻，37 ℃培養24 h。挑取營養瓊脂上單個菌落至另一營養瓊脂平板上進行菌種復蘇。最后挑取單菌落到液體培養基中，于36 ℃恒溫培養24 h。制備金黃色葡萄球菌的菌懸液，并將此菌懸液的濃度調成0.5 麥氏濁度的菌懸液。

（2）藥敏試驗。將無菌棉拭子浸入金黃色葡萄球菌菌懸液中，取出后將棉拭子與試管壁間進行擠壓，將過多的菌懸液棄去，把棉拭子中的菌懸液涂布到MHA 瓊脂平板中（操作過程中對平板進行6 次旋轉，每次轉60°，后續順著平板邊緣繞兩圈），確保菌懸液涂布的均勻性，室溫靜置3 ～5 min，至MHA 平板上沒有水分。將空白藥敏紙片分別置于不同濃度的中藥提取物中，充分吸收藥液后，轉移至MHA 瓊脂平板上，每個平板均勻放置3 個藥敏紙片。以無菌水浸濕的藥敏紙片作為空白對照，將平板放入36 ℃生化培養箱中，培養24 h，用游標卡尺測量抑菌圈直徑并記錄數據。每種中藥水提物做9 組，每組做3 個平行。

1.4 數據處理

本研究數據采用SPSS 20.0 進行處理與分析，結果用（±s）的形式表述。

2 結果與分析

7 種藥食同源物質水提物的抑菌效果見圖1。蒲公英提取物中，C1、C2和C3抑菌圈直徑的平均值分別為6.02 mm、10.41 mm、17.94 mm，標準偏差分別為0.02、1.12、0.97。金銀花提取物中，C0、C1、C2和C3抑菌圈直徑的平均值分別為9.66 mm、12.66 mm、18.09 mm、19.66 mm，標準偏差分別為0.52、0.72、0.71、0.79。甘草提取物中，C0、C1、C2和C3抑菌圈直徑的平均值分別為9.14 mm、12.18 mm、14.24 mm、18.59 mm，標準偏差分別為0.87、0.75、0.81、0.94。決明子提取物中，C1、C2和C3抑菌圈直徑的平均值分別為6.02 mm、9.96 mm、12.75 mm，標準偏差分別為0.02、0.78、2.70。胖大海提取物中，C1、C2和C3抑菌圈直徑的平均值分別為6.02 mm、8.48 mm、11.09 mm，標準偏差分別為0.02、0.59、1.28。香櫞提取物中，C1、C2和C3抑菌圈直徑的平均值分別為6.02 mm、8.53 mm、12.44 mm，標準偏差分別為0.02、1.07、1.21。川貝母提取物中，C1、C2和C3抑菌圈直徑的平均值分別為6.02 mm、6.03 mm、8.92 mm，標準偏差分別為0.02、0.02、0.52。

圖1 7 種食藥同源水提物對金黃色葡萄球菌的抑制效果圖

由圖1、表1 可知，7 種藥食同源物質的水提物的抑菌效果均隨著濃度的增加而增強，蒲公英提取物中，C3濃度的抑菌圈直徑最大，抑菌效果最好，C1抑菌圈直徑與空白藥敏紙片相同，沒有明顯抑制作用。金銀花提取物濃度C2和C3抑菌圈直徑相近，抑菌效果相差不明顯，C0的抑菌圈直徑最小，抑菌效果較差。甘草提取物濃度C3的抑菌圈直徑最大，抑菌效果最好；C2、C1和C0的抑菌圈直徑依次減弱，抑菌效果依次減弱，但均對金黃色葡萄球菌生長和繁殖有一定的抑制作用。決明子濃度C3的抑菌圈直徑最大，抑菌效果最好，空白藥敏紙片抑菌圈直徑為6 mm，濃度C1抑菌圈直徑與其幾乎相同，表明決明子C1提取物對金黃色葡萄球菌沒有明顯抑制作用。濃度為C3的胖大海提取物的抑菌圈直徑最大，對金黃色葡萄球菌的抑菌作用最明顯；濃度為C1的胖大海提取物與空白藥敏紙片抑菌圈直徑相同，證明其對金黃色葡萄球菌幾乎沒有抑制作用。濃度為C2和濃度為C3的香櫞提取物對金黃色葡萄球菌有抑制作用，濃度越大抑菌圈直徑越大。濃度為C3的川貝母提取物對金黃色葡萄球菌有抑制作用，濃度為C2和濃度為C1的川貝母提取物對金黃色葡萄球菌幾乎沒有抑制作用。

表1 藥食同源水提取物抑菌圈直徑表（濃度：1.00 g·mL-1）

本次試驗結果表明，蒲公英、金銀花、甘草、決明子、胖大海、香櫞和川貝母7 種中藥提取物對金黃色葡萄球菌均有抑制作用，抑菌效果最好的是蒲公英、金銀花和甘草。中藥提取物濃度越高，試驗的抑菌圈越大，抑菌效果越好。與對照組相比，蒲公英、金銀花、甘草、決明子、胖大海、香櫞和川貝母7 種中藥的水提取物對金黃色葡萄球菌均有顯著抑制作用。

3 討論

我國中草藥資源豐富，分布廣泛，價格低廉。文獻記載蒲公英具有廣譜抑菌作用、抗炎作用、抗氧化作用，對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、螺旋體、真菌等多種病原體微生物均有不同程度的抑制作用[7]。孟然等[8]研究表明，蒲公英中含有能抑制金黃色葡萄球菌的有效成分，蒲公英水提物、醇提物均有抑制作用。綠原酸是金銀花中的主要抗菌成分，其溶于水，金銀花水提物能起到一定的抗炎作用[9]。甘草中一些活性成分具有較好的抗菌消炎作用，被普遍應用于食品行業中。決明子作為一種藥食同源物質，常被添加到保健食品中，有潤腸通便、清肝明目等功效。

本文研究的7 種藥食同源水提物對金黃色葡萄球引發的相關疾病都有預防和輔助治療的作用。近年來，隨著抗生素使用后不良反應的產生和細菌耐藥性的增強，新型抗菌藥物的研究已成為熱門研究課題。天然藥食同源物質一般無抗藥性或抗藥性較小，對人體作用多以提高免疫、增強體質為主，與使用抗生素相比，從中草藥中篩選抑菌藥物，顯然是一種快速、安全、有效的方法[10-11]。藥食同源物質良好的抑菌作用使其成為我國新型抗菌藥物的重點研究對象，為研究和開發抗耐藥菌的藥物開辟了新途徑。