壯藥材小花青藤中非堿成分分析

徐娟娟,譚欽剛,2*

(1.桂林醫學院,廣西 桂林 541199;2.植物化學與西部植物資源持續利用國家重點實驗室/中國科學院昆明植物研究所,云南 昆明 650201)

小花青藤(IlligeraparvifloraDunn)為蓮葉桐科(Hernandiacea)青藤屬(Illigera)植物。分布于福建、廣東、廣西、貴州、云南等地,具有祛風除濕、消腫止痛之功效。廣西壯族民間將其用于治療風濕關節疼痛,肢體麻木,小兒麻痹癥后遺癥,跌打損傷[1]。小花青藤化學成分研究報道相當少,僅在1991年報道其中6個生物堿成分[2],為豐富其化學成分,本實驗從小花青藤乙酸乙酯提取物中分離鑒定了13個化合物,分別為香草酸(1)、丁香酸(2)、異香草酸(3)、肉桂酸(4)、1,2,4-苯三酚(5)、對羥基苯甲酸(6)、β-hydroxypropiovanillone (7)、原兒茶酸乙酯(8)、阿魏酸乙酯(9)、(+)-丁香脂素(10)、(6S,7E)-6-hydroxy-4,7-megastigmadien-3,9-dione(11)、Amygdalactone(12)和Wilsonol C(13)。上述化合物的結構見圖1。

圖1 化合物1～13結構

1 儀器與材料

Bruker DRX-500(500MHz)核磁共振儀(Bruker,瑞士);UPLC-IT-TOF色譜質譜聯用儀(日本島津制作所,日本);旋轉蒸發儀(Re-5298a,上海亞榮生化儀器廠);三用紫外儀(ZF-2,上海市安亭電子儀器廠);柱層析硅膠(200～300目)、薄層色譜所用硅膠(青島海洋化工廠);Rp-18(10～65μm)(Merck公司,德國);葡聚糖凝膠Sephadex LH-20(Pharmacia公司,瑞典);HPLC(Agilent公司,美國,型號:1260-II型);分析純甲醇(四川西隴科學有限公司);Fisher色譜級甲醇(Fisher,美國);TEDIA色譜級甲醇(TEDIA,美國);10%的硫酸-乙醇顯色劑;改良碘化鉍鉀顯色劑。

小花青藤于2019年6月采自荔浦縣瑤族蒲蘆鄉,由中國科學院廣西壯族自治區廣西植物研究所黃俞淞副研究員鑒定為蓮葉桐科青藤屬(Illigera)小花青藤(I.parviflora)的干燥藤莖。標本(編號tip-2019)保存于桂林醫學院藥學實驗中心。

2 提取與分離

取干燥小花青藤藤莖10kg,粉碎后用75%乙醇在室溫下浸提3次,每次3d,提取液合并,減壓濃縮至無乙醇味,濃縮液加入濃硫酸調節pH至2～3,過濾,濾液用等體積石油醚萃取3～4次,除去部分非生物堿成分;酸水層用氨水調節pH至7～8,用等體積乙酸乙酯萃取3～4次,乙酸乙酯層提取物為總堿(濃縮后80g)。總堿樣品用80g硅膠(80～100目)拌樣,800g硅膠(200～300目)裝柱,二氯甲烷-甲醇洗脫(1∶0～0∶1),TLC和改良碘化鉍鉀顯色劑進行監測,得到Ⅰ～Ⅵ組份。

I組份經正相系統石油醚-乙酸乙酯(1∶0～0∶1)洗脫得I-1至I-20。I-10經HPLC純化(55%甲醇/水)得到化合物4(6.6mg)和9(7mg),I-15經HPLC純化(10%甲醇/水)得到化合物3(34.1mg),I-16經HPLC純化(15%甲醇/水)得到化合物7(8.3mg)和11(6.8mg)。

II組份經Rp-18,甲醇-水溶液梯度洗脫(10%～100%)得II-1至II-3。II-1經 LH-20過濾(甲醇)所得II-1-2經HPLC純化(25%甲醇/水)得到化合物2(14mg),經HPLC純化(10%甲醇/水)得到化合物1(11.8mg),II-1-4經HPLC純化(5%甲醇/水)得到化合物8(9.3mg)和10(5mg)。

III組份經Rp-18,甲醇-水溶液梯度洗脫(20%～100%)得III-1至III-10。III-1經LH-20過濾(甲醇)所得III-1-1經HPLC純化(15%甲醇/水)得到化合物12(5.4mg)和13(6.8mg)。

IV組份經Rp-18,甲醇-水溶液梯度洗脫(20%～100%)得IV-1至IV-4。IV-1經 LH-20過濾(甲醇)所得IV-1-2經HPLC純化(5%甲醇/水)得到化合物5(5.7mg)。

VI組份經Rp-18,甲醇-水溶液梯度洗脫(20%～100%)得VI-1至VI-4。V-2經 LH-20過濾(甲醇)所得VI-2-1經HPLC純化(5%甲醇/水)得到化合物6(5.2mg)。

3 結構解析

化合物1:無色油狀,C8H8O4。1H-NMR(CD3OD,500MHz)δH7.58-7.46(2H,m,H-3,7),6.81(1H,d,J=8.0Hz,H-6),3.88(3H,s,4-OCH3);13C-NMR(CD3OD,125MHz)δC170.4(C-1),124.0(C-2),113.8(C-3),148.6(C-4),152.3(C-5),115.7(C-6),125.1(C-7),56.4(4-OCH3)。上述數據與文獻[3]基本一致,故鑒定該化合物為香草酸。

化合物2:無色油狀,C9H10O5。1H-NMR(CD3OD,500MHz)δH7.32(2H,s,H-3,7),3.87(6H,s,4,6-OCH3);13C-NMR(CD3OD,125MHz)δC171.4(C-1),123.9(C-2),108.2(C-3,7),148.7(C-4,6),141.0(C-5),56.7(4,6-OCH3)。上述數據與文獻[3]基本一致,故鑒定該化合物為丁香酸。

化合物3:無色油狀,C8H8O4。1H-NMR(CD3OD,500MHz)δH7.54(2H,d,J=10.0Hz,H-3,7),6.82(1H,d,J=8.0Hz,H-6),3.88(s,3H,5-OCH3);13C-NMR(CD3OD,125MHz)δC115.7(C-3),148.6(C-4),152.3(C-5),114.0(C-6),125.3(C-7),56.4(5-OCH3)。上述數據與文獻[4]基本一致,故鑒定該化合物為異香草酸。

化合物4:無色油狀,C9H8O2。1H-NMR(CD3OD,500MHz)δH7.53-7.47(2H,m,H-2,6),7.36-7.25(3H,m,H-3,4,5),7.38(1H,d,J=16.0Hz,H-7),6.50(1H,d,J=16.0Hz,H-8);13C-NMR(CD3OD,125MHz)δC137.4(C-1),128.5(C-2,6),129.7(C-3,5),130.0(C-4),140.8(C-7),126.6(C-8),175.7(C-9)。上述數據與文獻[5]基本一致,故鑒定該化合物為肉桂酸。

化合物5:無色油狀,C6H6O3。1H-NMR(CD3OD,500MHz)δH6.78(1H,d,J=8.0Hz,H-2),7.45-7.38(2H,m,H-3,5);13C-NMR(CD3OD,125MHz)δC123.8(C-1),145.9(C-2),115.6(C-3,5),151.0(C-4),117.8(C-6)。上述數據與文獻[6]基本一致,故鑒定該化合物為1,2,4-苯三酚。

化合物6:無色油狀,C7H6O3。1H-NMR(CD3OD,500MHz)δH7.86(2H,d,J=9.0Hz,H-3,7),6.80(2H,d,J=9.0Hz,H-4,6);13C-NMR(CD3OD,125MHz)δC170.8(C-1),123.5(C-2),132.9(C-3,7),115.9(C-4,6),163.1(C-5)。上述數據與文獻[7]基本一致,故鑒定該化合物為對羥基苯甲酸。

化合物7:無色油狀,C10H12O4,ESI-MSm/z219[M+Na]+。1H-NMR(CD3OD,500MHz)δH7.53(1H,d,J=2.0Hz,H-2),6.84(1H,d,J=8.0Hz,H-5),7.56(1H,dd,J=2.0,8.0Hz,H-6),3.14(2H,d,J=6.0Hz,H-8),3.93(2H,t,J=6.0Hz,H-9),3.89(3H,s,3-OCH3);13C-NMR(CD3OD,125MHz)δC130.3(C-1),111.8(C-2),149.2(C-3),153.9(C-4),115.9(C-5),124.8(C-6),199.7(C-7),41.6(C-8),58.9(C-9),56.3(3-OCH3)。上述數據與文獻[8]基本一致,故鑒定該化合物為β-hydroxypropiovanillone。

化合物8:無色油狀,C9H10O4。1H-NMR(CD3OD,500MHz)δH7.44-7.37(2H,m,H-2,6),6.79(1H,d,J=8.0Hz,H-5),4.28(2H,q,J=7.0Hz,H-8),1.34(3H,t,J=7.0Hz,H-9);13C-NMR(CD3OD,125MHz)δC122.9(C-1),115.8(C-2),146.22(C-3),151.7(C-4),117.4(C-5),123.5(C-6),168.4(C-7),61.7(C-8),14.6(C-9)。上述數據與文獻[9]基本一致,故鑒定該化合物為原兒茶酸乙酯。

化合物9:無色油狀,C12H14O4,ESI-MSm/z245[M+Na]+。1H-NMR(CD3OD,500MHz)δH7.17(1H,d,J=2.0Hz,H-2),6.80(1H,d,J=8.0Hz,H-5),7.05(1H,dd,J=2.0,8.0Hz,H-6),7.59(1H,d,J=16.0Hz,H-7),6.34(1H,d,J=16.0Hz,H-8),4.21(2H,q,J=7.0Hz,H-10),1.30(3H,t,J=7.0Hz,H-11),3.88(3H,s,3-OCH3);13C-NMR(CD3OD,125MHz)δC127.7(C-1),115.6(C-2),149.4(C-3),150.6(C-4),116.5(C-5),124.0(C-6),146.6(C-7),111.7(C-8),169.3(C-9),61.4(C-10),14.6(C-11),56.4(3-OCH3)。上述數據與文獻[10]基本一致,故鑒定該化合物為阿魏酸乙酯。

化合物10:淺黃色粉末,C22H26O8,ESI-MSm/z457[M+K]+。1H-NMR(CD3OD,500MHz)δH6.65(4H,s,H-2,6,2′,6′),4.71(2H,d,J=4.0Hz,H-7,7′),3.19-3.10(2H,m,H-8,8′),4.33-4.20(2H,m,H-9a,9a′),3.88(2H,dd,J=4.0,9.0Hz,H-9b,9b′),3.84(12H,s,3,5,3′,5′-OCH3);13C-NMR(CD3OD,125MHz)δC133.1(C-1,C-1′),104.5(C-2,C-6,C-2′,C-6′),149.3(C-3,C-5,C-3′,C-5′),136.2(C-4,C-4′),87.6(C-7,C-7′),55.5(C-8,C-8′),72.8(C-9,C-9′),56.8(3,5,3′,5′-OCH3)。上述數據與文獻[11]基本一致,故鑒定該化合物為(+)-丁香脂素。

化合物11:黃色油狀,C13H18O3,ESI-MSm/z443[2M-H]-。1H-NMR(CDCl3,500MHz)δH2.49(1H,d,J=17.0Hz,H-2a),2.33(1H,d,J=17.0Hz,H-2b),5.96-5.94(1H,m,H-4),6.82(1H,d,J=16.0Hz,H-7),6.46(1H,d,J=16.0Hz,H-8),2.30(3H,s,H-10),1.10(3H,s,H-11),1.01(3H,s,H-12),1.88(3H,d,J=1.5Hz,H-13);13C-NMR(CDCl3,125MHz)δC41.5(C-1),49.6(C-2),197.6(C-3),127.8(C-4),160.5(C-5),79.3(C-6),145.0(C-7),130.4(C-8),197.1(C-9),28.5(C-10),23.0(C-11),24.4(C-12),18.7(C-13)。上述數據與文獻[12]基本一致,故鑒定該化合物為(6S,7E)-6-hydroxy-4,7-megastigmadien-3,9-dione。

化合物12:無色油狀,C15H20O6,ESI-MSm/z295[M-H]-。1H-NMR(CD3OD,500MHz)δH5.86(1H,s,H-3),7.81(1H,d,J=16.0Hz,H-5),6.24(1H,d,J=16.0Hz,H-6),1.94-1.81(2H,m,H-9a,11a),1.73(1H,dd,J=11.0,13.5Hz,H-9b),3.88-3.77(1H,m,H-10),2.25(1H,dd,J=1.5,7.0,14.0Hz,H-11b),1.99(3H,d,J=1.0Hz,H-13),1.06(3H,s,H-15),1.33(3H,s,H-16);13C-NMR(CD3OD,125MHz)δC173.7(C-2),126.9(C-3),143.1(C-4),134.2(C-5),128.7(C-6),82.9(C-7),53.4(C-8),40.9(C-9),65.3(C-10),42.3(C-11),90.0 (C-12),20.6(C-13),181.3(C-14),14.6(C-15),18.5(C-16)。上述數據與文獻[13]基本一致,故鑒定該化合物為Amygdalactone。

化合物13:無色油狀,C13H22O4,ESI-MSm/z265[M+Na]+。1H-NMR(CD3OD,500MHz)δH2.00(1H,dd,J=3.0,15.0Hz,H-2a),1.40-1.34(1H,m,H-2b),3.93(1H,q,J=3.0Hz,H-3),3.70-3.64(1H,m,H-4),2.37(1H,qd,J=3.0,7.0Hz,H-5),6.85(1H,d,J=16.0Hz,H-7),6.28(1H,d,J=16.0Hz,H-8),2.27(3H,s,H-10),1.19(3H,s,H-11),0.82(3H,s,H-12),0.98(3H,d,J=7.0Hz,H-13);13C-NMR(CD3OD,125MHz)δC39.6(C-1),38.1(C-2),72.0(C-3),76.4(C-4),32.2(C-5),81.7(C-6),153.0(C-7),131.2(C-8),201.1(C-9),27.4(C-10),27.3(C-11),26.8(C-12),13.3(C-13)。上述數據與文獻[14]基本一致,故鑒定該化合物為Wilsonol C。

4 討論

小花青藤為廣西壯族民間用藥,其根莖為入藥部位,主要用于治療風濕骨痛、小兒麻痹后遺癥,具有良好的開發潛力,但對其藥效物質基礎知之甚少。本研究豐富了小花青藤及青藤屬的化學成分,對闡釋該壯藥材民間用法提供理論依據,為同屬植物資源的研究、開發和利用提供參考。