中草藥對育肥豬鏈球菌病的預防及其生長性能、免疫指標的影響

賀 馭，王 陽，黨 萌，羅卉卉，吳小萍

(陜西省商洛市動物疫病預防控制中心，陜西商洛 726000）

在非洲豬瘟疫情常態化背景下，在生豬養殖中疫病防控為重中之重。在生豬的疫病中，豬鏈球菌病是疫病防控工作重要的內容之一，是生豬養殖領域發生率相對較高的細菌性傳染病，該病致病性強、致死率高。近年來飼料行業規范管理，飼料添加抗生素被全面禁用，該病的發生率逐漸增加。中草藥具有來源廣泛，價格便宜，毒副作用小、不易產生耐藥性等優點，逐漸被用于畜禽疾病的防治[1]。本試驗旨在研究中草藥對育肥豬鏈球菌病的預防及生長性能、免疫指標的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 菌株

豬鏈球菌血清型2 型，在本地養殖場采集分離。

1.1.2 中藥材料

金線重樓，野菊花，白頭翁，紫花地丁，忍冬藤，黃連，甘草，金銀花，梔子，郁金，白芍，黃芩，黃柏，蒲公英，柯子，白毛夏枯草，七葉一枝花。以上中藥均購自怡康藥店。

1.1.3 試驗動物

育肥豬由本地豬場提供，本試驗于2021 年9—11 月在商洛興旺豬場完成。選取140 日齡、體重86kg、健康的育肥豬80 頭。每組20 頭，共分4 組。其中A 組使用方劑一(金線重樓16g、野菊花65g、白頭翁65g、紫花地丁35g、忍冬藤65g），B 組使用方劑二(黃連50g，甘草20g、金銀花15g、梔子20g、郁金30g、白芍30g、黃芩30g、黃柏30g、蒲公英15g、柯子40g），C 組使用方劑三(忍冬藤65g、白毛夏枯草60g、黃芩30g、野菊花65g、七葉一枝花20g、金銀花15g、紫花地丁35g），D 組為空白對照組。

1.1.4 基礎日糧

基礎日糧配方見表1，復合預混料購自新鄉市酵守康飼料有限公司。

表1 基礎日糧配方

1.2 試驗方法

1.2.1 方劑與藥液煎煮制備

方劑一：金線重樓16g、野菊花65g、白頭翁65g、紫花地丁35g、忍冬藤65g。

方劑二：黃連50g，甘草20g、金銀花15g、梔子20g、郁金30g、白芍30g、黃芩30g、黃柏30g、蒲公英15g、柯子40g。

方劑三：忍冬藤65g、白毛夏枯草60g、黃芩30g、野菊花65g、七葉一枝花20g、金銀花15g、紫花地丁35g。

加入藥物重量10 倍量的潔凈水，浸泡后煎煮，煮沸后文火煎30min，用四層紗布過濾藥液，藥渣加入8 倍量藥重的水，煮沸后文火煎30min，過濾藥液，每副合并2 次藥液置于4℃冰箱保存備用。

1.2.2 飼養及給藥

百年大計，教育為本。如果說要“打開視野看效率”，那么文化教育事業更需如此，教育所產生的效果往往不能在短時間內呈現，而需要長時間的積累和沉淀。

對育肥豬進行正常的飼養管理，飼料和飼喂方式均不改變。在各中藥試驗組的飼料中按每頭一服藥量拌入飼料中飼喂，每天早晚各1 次。在試驗第7 天通過口服豬鏈球菌血清型2 型2.13×107CFU/g 攻毒。試驗40d。

1.2.3 測定指標和方法

第8 天開始臨床觀察試驗動物，主要觀察精神、食欲和排便情況；記錄發病率、死亡率。

1.2.3.1 生長性能

飼喂試驗開始與結束前，分別記錄試驗豬的初重和末重，試驗育肥豬空腹12h，稱重，試驗結束后統計各組試驗育肥豬的總采食量，計算豬平均日采食量、平均日增重及料重比。

平均日增重=總增重/(試驗天數× 試驗豬頭數)

料重比=平均日采食量/平均日增重

1.2.3.2 血清細胞因子

在前腔靜脈進行采血，置于干凈的離心管中等待血清的析出，在低溫離心機中以3000r/min，離心15min，取上清液分裝，及時測定血清指標。使用ELISA 方法檢測血清腫瘤壞死因子-α (tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細 胞介素-1(interleukin-1，IL-1）、白 細胞介素-10 (interleukin-10，IL-10）、干擾素-α (interferon-α，IFN-α）含量。所用試劑盒購自南京建成生物工程研究所，具體操作參考說明書。

1.2.4 生物試驗

取病死豬淋巴、肝臟、脾臟、關節液，加生理鹽水研磨過濾。過濾液接種(20±2)g 健康小白鼠，12～72h 后觀察其病理反應。觀察感染后分離出的細菌，及LD50。

1.2.5 數據統計

應用SPSS 19.0 軟件對各組的發病率和病死率進行顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 中草藥對育肥豬生長性能、豬鏈球菌病預防效果和血清細胞因子的影響

由表2 可以看出中草藥對育肥豬生長性能、豬鏈球菌病預防效果和血清細胞因子的影響。與D 組相比，A 組、B 組、C 組育肥豬的平均日增重顯著升高(p＜0.05），B 組、C 組育肥豬的平均日采食量顯著升高(p＜0.05），A 組、B 組育肥豬的料重比顯著降低 (p＜0.05）。與D 組相比，A 組、B 組、C 組的發病數、病死數均少于D 組；B 組、C 組發病率顯著低于D 組 (p＜0.05）A 組和B 組間發病率差異不顯著 (p＞0.05）；B 組、C 組和A 組病死率顯著低于D 組(p＜0.05）。由表4 可知，與D 組相比，豬血清中TNF-α 含量A 組、B 組、C 組均顯著降低(p＜0.05）。IL-10 含量A 組、B 組、C 組均顯著高于D 組(p＜0.05）；IL-1 和IFN-α 含量各組間差異不顯著(p＞0.05）。

表2 中草藥對育肥豬生長性能、豬鏈球菌病預防效果和血清細胞因子的影響

2.2 病理剖檢結果

病死豬可見四肢內側皮膚發紅和充血，對病死豬進行剖檢，可見淋巴結腫大和充血。腹腔漿膜可見大量黃色漿液。部分關節囊膜有出血癥狀。

2.3 生物試驗結果

12～72h 后接種小白鼠均死亡，從死亡白鼠體內分離細菌，在顯微鏡下呈卵圓形、無鞭毛、鏈狀排列。

3 討論

根據中獸醫辨證論治原則，豬鏈球菌病屬于“熱毒熾盛”，所以本次試驗選取的都是清熱解毒類中藥，金線重樓消腫止痛、金銀花疏散風熱、白頭翁清熱解毒、黃柏解毒療瘡、忍冬藤疏風通絡、紫花地丁涼血消腫、野菊花消腫解毒、蒲公英消腫散瘀、梔子涼血解毒、白芍解熱鎮靜、郁金疏肝解郁、黃芩瀉火解毒、黃連清熱瀉火等。

3.1 中草藥對生長性能的影響

劉仲昊等[2]在育肥豬日糧中分別添加金銀花粗提物、葛根粗提物和混合粗提物(金銀花粗提物+葛根粗提物），與對照組相比，各試驗組育肥豬的平均日采食量和平均日增重均有提高趨勢，其中混合提取物組顯著提高。申學林等[3]研究育肥豬肉質時發現復方中草藥能夠改善豬肉的瘦肉質。陳曉明等[4]試驗表明，將一定量中草藥渣添加至斷奶仔豬日糧中進行飼喂，日增重指標有明顯的提升，料重比呈下降趨勢，其中腹瀉率的下降尤為明顯。和紹禹等[5]挑選三元雜交生長豬做試驗，飼喂試驗結果表明，添加了中草藥添加劑的試驗組，育肥豬的生長速度加快，采食量及日增重明顯提升，飼料利用率得到明顯改善，料重比和病豬數明顯降低。戴玲等[6]用大蒜、黃芪、構樹葉等六味中草藥配制成中草藥飼料添加劑對育肥豬生產性能和肉品質的影響，結果表明，在平均日增重和飼料利用率均顯著高于空白組，氨基酸和脂肪酸的含量均顯著高于空白組。谷新利等[7]用黃茅、白術、熟地黃等中草藥添加劑飼喂育肥羔羊，羔羊的日增重、飼料利用率顯著提高。本試驗中與D 組相比，A 組、B 組、C組的平均日增重顯著升高，B 組、C 組的平均日采食量顯著升高，A 組、B 組的料重比顯著降低，可能是中草藥增強豬對鏈球菌病的抵抗能力，食欲較好。

3.2 中草藥對豬鏈球菌病的預防

馮沙沙等[8]人用黃連、大黃、黃柏、黃芩、連翹、石榴皮、丹參、訶子、烏梅等中藥對豬鏈球菌做了體外抑菌試驗，均有不同程度的抑菌作用。劉啟志等[9]使用板藍根、金銀花、黃連、蒲公英、馬齒莧、野菊花、連翹七味中藥對豬鏈球菌病進行預防試驗，在臨床上對豬鏈球菌病有很好的預防作用，并且效果優于西藥。潘任桃等[10]將茶皂素與4 種抗菌藥物聯用，測定其對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果。郭洋[11]認為豬鏈球菌病綜合征型為“熱入營血，毒陷心包，擾動肝風證”，治療原則為 “清熱涼血，平肝熄風”，使用方劑鉤藤犀角地黃湯進行治療，結果療效較好。本試驗中，A 組、B 組、C 組的發病數、病死數均少于D 組空白對照；發病率B 組、C 組為20%，A 組為30%，D 組為40%，B 組、C 組和D 組顯著降低；病死率B 組、C 組為0，A 組為33.33%，D 組為62.5%，病死率顯著降低，D 組與其他三組差異極顯著。A 組的發病率高于B 組、C 組，可能由于A 組使用的中藥種類少于其他兩組。

3.3 中草藥對血清細胞因子的影響

汪德剛等[12]認為中草藥富含多種有效活性成分，如多糖、苷類、揮發油生物堿等物質，這些成分能夠提高機體免疫和體液免疫。蔡進[13]研究發現在日糧中添加黃芪多糖、益母草粉、甘草粉、山藥粉能顯著提高斷奶前仔豬免疫力。謝紅兵等[14]研究表明，中草藥飼料添加劑能明顯提高豬只機體內豬瘟血清抗體、胰島素和甲狀腺素T4水平，對仔豬的免疫能力也有明顯的增強。杜改梅等[15]試驗結果同樣表明，中草藥飼料添加劑能夠增強豬的體液免疫能力。張林麗等[16]研究表明，細胞因子是機體內部分子量小而生物學活性較高的一類物質，主要由免疫細胞、血管內皮細胞、表皮細胞等多類細胞經過刺激而生成，主要參與炎癥、細胞增殖與凋亡及免疫應答等。本試驗中與D 組相比，豬血清中TNF-α 含量A 組、B 組、C 組均顯著降低，IL-10 含量A 組、B 組、C 組均顯著增加；IL-1 和IFN-α 含量4 組差異不顯著。本試驗中藥成分可能通過阻斷ERK、MAPKs 等蛋白磷酸化途徑，從而抑制信號轉導通路的激活，下調COX-2、iNOS 等蛋白的表達量，進而抑制巨噬細胞合成TNF-α 等炎性因子。本研究結果表明中藥可抑制TNF-α 合成，促進抗炎因子IL-10 合成。中藥抗菌機理還需進一步的研究，并不是所有清熱解毒類中藥在體內都有抗菌作用[17]。

4 結論

本試驗結果表明，金線重樓、野菊花、白頭翁、紫花地丁、忍冬藤；黃連、甘草、金銀花、梔子、郁金、白芍、黃芩、黃柏、蒲公英、柯子；忍冬藤、白毛夏枯草、野菊花、黃柏、七葉一枝花、金銀花、紫花地丁三副中藥合劑在獸醫臨床上可以顯著提高患有鏈球菌病育肥豬的生長性能，降低血清炎性細胞因子含量，提高抗炎因子含量，對育肥豬鏈球菌病有較好的預防作用。