肝癌組織中p-STAT3、VIP的表達及與患者生存的相關性分析

李 一

河南省鄧州市中心醫院腫瘤一科 474150

肝癌為主要的消化系統惡性腫瘤,調查顯示,全球每年新增85萬例肝癌患者,多數患者發現時已至中晚期,嚴重威脅患者生命。研究發現,即使經過手術治療,肝癌的復發率仍然較高。目前認為,肝癌患者術后生存與病毒感染、脈管侵犯、甲胎蛋白水平等多種因素相關,但是在評估肝癌患者預后中的應用有限,肝癌患者預后評估的敏感性指標仍需進一步探索。磷酸化信號轉導及轉錄活化因子3(Phosphorylated-signal transducer and activator of transcription 3,p-STAT3)為信號轉導及轉錄活化因子3(Signal transducer and activator of transcription 3 ,STAT3)的活化產物,研究發現,其與肝硬化組織的癌變明顯相關[1]。血管活性腸肽(Vasoactive intestinal peptide,VIP)為內含28個氨基酸的堿性腦腸肽,研究發現,其可通過巨噬細胞的極化促進肝癌的發生和發展[2]。但是目前關于肝癌組織p-STAT3、VIP與患者生存的相關性研究較少。因此,本文以80例肝癌患者為研究對象,對此進行了分析,報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 納入2015年3月—2018年2月我院腫瘤科收治的肝癌患者80例,其中男57例,女23例,年齡26～71歲,平均年齡(48.95±13.54)歲,腫瘤直徑3～8cm,平均腫瘤直徑(5.18±1.45)cm,AJCC臨床分期：Ⅰ期35例,Ⅱ期19例,Ⅲ期21例,Ⅳ期5例。患者均簽署知情同意書,本研究經醫院醫學倫理委員會審核批準。納入標準：確診為原發性肝癌[3];資料完整;接受隨訪。排除標準：術前行放化療等相關治療者;伴其他惡性腫瘤;繼發性肝癌;自身免疫性疾病;合并其他消化系統疾病;血液系統疾病;不配合治療者。

1.2 觀察指標 (1)所有患者均行肝切除術,術中取肝癌組織和癌旁組織制作蠟塊標本,肝癌組織蠟塊均經病理診斷,確認為肝細胞性肝癌,癌旁組織蠟塊確認為肝臟正常組織。將患者石蠟標本制成4μm切片后,使用免疫組化法測定肝癌病理組織和癌旁組織中的p-STAT3、VIP表達,其中p-STAT3在細胞核內表達,VIP在細胞質中表達。隨后將切片置于高倍顯微鏡下觀察,陰性對照為PBS緩沖液,陽性對照為已知的p-STAT3、VIP陽性切片。免疫組化結果由1名經驗豐富的病理科醫師隨機取5個高倍鏡視野進行染色強度和著色細胞占比評分：染色強度中,0分未著色,1分輕度著色,2分中度著色,3分重度著色;著色細胞占比中,0分為占比≤5%,1分為5%<占比≤25%,2分為25%<占比≤50%,3分為占比>50%。兩項乘積即為免疫組化最終評分,評分≥4分為高表達,低于4分即為低表達。免疫組化S-P試劑盒、p-STAT3抗體、VIP抗體均購買自美國圣克魯斯生物技術公司。(2)對所有患者術后進行電話或門診隨訪,記錄肝癌患者總生存時間(Overall survival,OS),其中OS為患者術后至死亡或末次隨訪的總時間,末次隨訪日期為2021年2月。使用Kaplan-Meier法對不同p-STAT3、VIP表達患者進行生存分析。(3)分析影響肝癌患者生存的單因素。比較不同臨床特征肝癌患者的3年生存率。(4)將單因素結果中差異有統計學意義的因素納入COX多元回歸中,分析影響肝癌患者生存的危險因素。

2 結果

2.1 p-STAT3、VIP在肝癌及癌旁組織中的高表達率比較 p-STAT3、VIP在肝癌組織中的高表達率高于癌旁組織,差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 p-STAT3、VIP在肝癌及癌旁組織中的高表達率比較 [n(%)]

2.2 不同p-STAT3、VIP表達患者的OS比較 80例肝癌患者均獲得有效隨訪,無失訪病例,隨訪時間7～53個月,中位隨訪時間為26個月。p-STAT3低表達患者的OS為(36.32±2.59)個月,高表達患者為(24.76±2.20)個月,VIP低表達患者的OS為(40.53±3.53)個月,高表達患者為(26.50±1.91)個月。p-STAT3和VIP低表達肝癌患者的OS均高于高表達患者,差異有統計學意義(χ2=7.943、7.311,P<0.05)。見圖1和圖2。

圖1 不同p-STAT3表達患者的OS比較

圖2 不同VIP表達患者的OS比較

2.3 影響肝癌患者生存的單因素分析 80例肝癌患者的3年生存率為33.75%(27/80)。單因素分析表明,腫瘤包膜不完整、p-STAT3高表達、VIP高表達均與患者3年生存率相關(P<0.05)。見表2。

表2 影響肝癌患者生存的單因素分析[n(%)]

2.4 影響肝癌患者生存的危險因素 將腫瘤包膜不完整、p-STAT3高表達、VIP高表達納入影響肝癌患者生存的COX回歸分析中,賦值方法：腫瘤包膜不完整(是=1,否=0),p-STAT3高表達(是=1,否=0),VIP高表達(是=1,否=0)。結果表明,腫瘤包膜不完整、p-STAT3高表達、VIP高表達均為影響肝素患者生存的危險因素(P<0.05)。見表3。

表3 影響肝癌患者生存的危險因素

3 討論

肝癌早期癥狀不典型,大部分患者確診時已至中晚期,調查顯示,盡管醫療技術的進步使肝癌患者預后得到一定改善,但是5年生存率仍然較低,約為14.1%,目前肝癌已經成為惡性腫瘤患者致死的主要疾病類型[4]。肝癌的復發和轉移為影響肝癌患者術后生存的主要因素,其中p-STAT3可通過調控抗凋亡基因survivin等多種活性因子水平,促進腫瘤細胞的增殖和侵襲,研究發現,肝癌組織中p-STAT3的表達量與腫瘤直徑、TNM分期等具有明顯的相關性[5]。VIP為機體內分泌和免疫系統的重要調節因子,研究發現,其可通過磷脂酰肌醇3-激酶、Ras蛋白/絲裂原活化蛋白激酶等通路,阻礙免疫監視,促進腫瘤逃逸[6]。通過明確p-STAT3和VIP與肝癌患者生存的相關性,可為肝癌患者治療方案優化及預后評估提供相關依據。

本文發現,p-STAT3、VIP在肝癌組織中的高表達率均明顯高于癌旁組織,提示p-STAT3、VIP均可能與肝癌的進展相關。其中p-STAT3主要位于細胞核中,可通過激活細胞增殖凋亡相關基因,阻礙缺氧誘導因子-1α的降解,促使細胞的增殖失調以及惡性轉化,此外,p-STAT3還可通過上調血管內皮生長因子水平,促進腫瘤新生血管的生成,進而參與至肝癌的發生發展中[7]。正常情況下,VIP可通過與肝細胞表面的VIP受體相結合,在肝細胞內與溶酶體作用失活,肝癌的發生可導致患者肝功能障礙,影響VIP受體活性,進而使肝臟組織中VIP失活減少,表達升高[8]。

本文發現,p-STAT3和VIP低表達肝癌患者的OS均明顯高于高表達患者,且p-STAT3高表達、VIP高表達均為影響肝素患者生存的危險因素。其中p-STAT3高表達可通過胚胎發育相關基因Twist和類胰島素生長因子通路調控轉錄因子Slug水平,促進腫瘤細胞的上皮間質轉化,有助于肝癌細胞的遷移和侵襲,增加了肝癌復發和轉移的風險,進而不利于患者預后[9]。VIP高表達可通過增強葡萄糖苷酶2蛋白活性,減少腫瘤細胞凋亡,促使腫瘤細胞逃逸,此外,VIP還可通過促使M2型巨噬細胞水平的增加,減少機體T細胞水平,進而有助于腫瘤細胞的轉移,提高了肝癌患者復發的風險[10]。此外,本文中,腫瘤包膜不完整與患者生存明顯相關,這可能是由于對于包膜不完整的腫瘤細胞,可明顯增加其向血管和肝臟浸潤的風險,并有助于提高微衛星灶的發生率,使肝癌復發和轉移的風險增加,進而使生存期縮短[11]。

綜上所述,肝癌組織中p-STAT3和VIP均呈高表達,且與患者生存明顯相關,提示p-STAT3和VIP均可作為肝癌患者預后評估的有效指標。