常規檢測法與革蘭染色法在陰道分泌物檢測中的應用價值探討

施競超

[摘要] 目的 探討常規檢測法（濕片鏡檢法和五聯檢測法）與革蘭染色法在陰道分泌物檢測中的應用價值。方法 選取2021年1月至2021年12月浙江大學醫學院附屬金華醫院就診的479例女性陰道炎患者作為研究對象，分別采用常規檢測法與革蘭染色法對陰道分泌物標本進行檢測，對檢測結果進行比較分析。結果 常規檢測法和革蘭染色法的Kappa值為0.793，具有較高的一致性（P<0.05）。在白細胞的檢出率上，常規檢測法高于革蘭染色法，差異有統計學意義（P<0.05）。在致病性細菌、乳酸桿菌的檢出率上，革蘭染色法遠高于常規檢測法，差異有統計學意義（P<0.05）。結論 在日常工作中，常規檢測法能較好的完成日常陰道分泌物篩查工作，時間快，效率高，而革蘭染色法能提高可疑性感染的陽性檢出率。臨床檢驗中可靈活應用兩種方法，使報告更加準確。

[關鍵詞] 陰道分泌物；五聯檢測法；革蘭染色；細菌性陰道炎

[中圖分類號] R446? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? [DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2023.02.018

[Abstract] Objective To explore the application value of routine detection methods （wet slice microscopy and quintuple detection method） and Gram staining method in the detection of vaginal discharge. Methods A total of 479 women attending Jinhua Hospital affiliated to Zhejiang University School of Medicine from January 2021 to December 2021 were selected as study subjects， and vaginal secretion specimens were tested by routine detection method and Gram staining method respectively， and the results were compared and analyzed. Results The Kappa value of quintuple detection method and Gram staining method was 0.793， had a high consistency （P<0.05）. In the detection rate of white blood cells， the routine detection method was higher than the Gram staining method， and the difference was statistically significant （P<0.05）. In the detection rate of pathogenic bacterium and lactobacillus， Gram staining method was much better than routine detection method， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion In daily work， routine detection method can better complete the routine vaginal discharge screening work， the time is fast， the efficiency is high， and the Gram staining method can improve the positive detection rate of suspicious infection. The two methods can be flexibly applied in clinical examination to make the report more accurate.

[Key words] Vaginal discharge; Quintuple detection method; Gram staining; Bacterial vaginitis

女性陰道分泌物的主要成分為子宮內膜、前庭大腺、陰道黏膜滲出液、少量白細胞和非致病性陰道細菌，雖然陰道寄生菌群混合在分泌物中，但其通常不致病，處于微生態平衡狀態。若陰道環境因某種原因出現紊亂，菌群就會失衡，且伴隨著白細胞、pH值和過氧化氫濃度升高等變化，可引起各種類型的陰道炎。準確識別陰道炎的病原菌是治療陰道炎的關鍵。由于不同類型陰道炎的臨床治療方法差異較大，盲目用藥將大大降低治療效果，甚至可能引起耐藥，導致菌群失衡。目前臨床上常規檢測法包括濕片鏡檢法和五聯檢測法[1]。濕片鏡檢法能簡捷、迅速的檢測上皮細胞、白細胞、真菌孢子及陰道毛滴蟲，但也存在一些不足之處，如操作人員通過個人經驗判斷結果，人為因素影響較大、主觀性強，并且形態學上較難辨認各類細菌，特別是乳酸桿菌的鑒別，線索細胞在鏡下不易觀察，有較大的漏診率。五聯檢測法相對提高了乳酸桿菌等方面的檢出率，革蘭染色法可對病原菌進行更全面的定性初篩且成本較低。本研究以479例患者的陰道分泌物標本作為研究對象，采用常規檢測法和革蘭染色法進行檢測和對比分析，為日后臨床檢驗提供參考。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

選取2021年1月至2021年12月浙江大學醫學院附屬金華醫院就診的479例女性陰道炎患者作為研究對象，平均年齡（36.3±4.3）歲。納入標準：①經臨床診斷為陰道炎，存在外陰瘙癢、白帶增多、有異味、有灼痛感、排尿困難等癥狀；②白帶標本異常（清潔度為Ⅲ～Ⅳ度）。排除標準：①2h內進行過服藥和陰道沖洗治療的患者；②無法配合研究的患者。本研究經浙江大學醫學院附屬金華醫院倫理委員會審批[倫理審批號：（2022）倫申第（6）號]。

1.2? 方法

在婦科檢查前，將患者置于截石位，充分暴露宮頸口，由婦科醫生用無菌棉拭子在陰道后位或穹窿處旋轉10～20s，標準為能清晰看到分泌物附著，一式兩份。采樣時應避開用藥期、經期和絕經期且避免性生活。樣品應新鮮且充足，盡量避免使用帶血樣本。顯微鏡型號為日本奧林巴斯公司的CX31，白帶五聯檢測儀器與試劑分別為鄭州安圖生物工程的Autowo MO分析儀以及陰道炎五聯檢測試劑盒Ⅱ（干化學酶法），革蘭染液由珠海貝索生物技術有限公司提供，生理鹽水自配。

1.2.1? 濕片鏡檢法? 將已取好標本的無菌棉拭子均勻涂抹于載玻片上，用生理鹽水稀釋后，再用高倍鏡觀察分泌物中的滴蟲、孢子、線索細胞等[2]。

1.2.2? 五聯檢測法? 將試劑盒從冷藏環境中取出，室溫（18～25℃）放置至少30min。取1支加樣試管，將聯檢Ⅱ稀釋液滴在試管底部的兩條刻度線之間，將收集到的陰道分泌物拭子放入試管中，徹底沖洗干凈后用手指輕輕擠壓試管壁，使抵子吸附的液體流回試管，棄拭子，取得樣本液（得到的樣本液的量不得低于最低刻度線）。分別將聯檢卡Ⅱ、聯檢Ⅱ終止液及樣本液放置于分析儀相應位置，按照儀器要求進行操作，打印檢驗報告。

1.2.3? 革蘭染色法? 將白帶標本均勻涂抹于載玻片上，厚薄適中，然后依次干燥、固定、初染、媒染、脫色、復染，接著用高倍鏡和油鏡依次觀察多個視野，記錄是否存在陰道毛滴蟲、念珠菌、線索細胞等[3]。

1.3? 觀察指標

比較白細胞、乳酸桿菌、念珠菌孢子、陰道毛滴蟲等的檢出率。聯檢卡第1孔過氧化氫陽性將說明陰道菌群失調，陰道微生態也處于失調狀態，陰性表示有大量乳酸桿菌存在，陰道菌群正常；第2孔白細胞酯酶陽性表明白細胞超過15個/高倍視野（high power field，HPF），陰性表明白細胞少于5個/ HPF；如果第3孔凝固酶陽性，第6孔（乙酰氨基葡萄糖苷酶）或第7孔（葡萄糖苷酶）陽性則提示感染外陰陰道假絲酵母菌病或滴蟲陰道炎，然后結合第8孔（pH值）進行區分，外陰陰道假絲酵母菌病一般pH值≤4.6，滴蟲陰道炎一般pH值≥4.8；第4孔脯氨酸氨基肽酶陽性或第5孔唾液酸苷酶陽性將提示感染性細菌性陰道炎。

1.4? 統計學方法

采用SPSS 22.0統計學軟件對數據進行處理分析。計數資料采用例數（百分比）[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗，一致性分析運用Kappa檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2? 結果

2.1? 檢出率比較

濕片鏡檢法的滴蟲檢出率高于五聯檢測法和革蘭染色法，差異無統計學意義（P>0.05）。五聯檢測法的白細胞檢出率高于濕片鏡檢法和革蘭染色法，差異有統計學意義（P<0.05）。革蘭染色法的致病性細菌、念珠菌、乳酸桿菌的檢出率高于于濕片鏡檢法和革蘭染色法，差異有統計學意義（P<0.05）。五聯檢測法的白細胞檢出率高于革蘭染色法，差異有統計學意義（χ2=3.925，P=0.048）。革蘭染色法的致病性細菌高于五聯檢測法，差異有統計學意義（χ2=5.913，P=0.015）。革蘭染色法的乳酸桿菌檢出率高于五聯檢測法，差異有統計學意義（χ2=30.041，P<0.001）。五聯檢測法和革蘭染色法的滴蟲檢出率和念珠菌檢出率比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表1。

2.2? 常規檢測法和革蘭染色法的一致性分析

常規檢測法和革蘭染色法的一致性較好（Kappa=0.793，P<0.05），見表2。

3? 討論

陰道炎是育齡婦女的常見多發病，由于女性在生殖系統生理結構上存在著一定的特殊性，使得女性外陰道處于相對潮濕、溫熱的環境，在各種因素的刺激下，如自身內分泌系統的紊亂、各種病原微生物的侵襲等，都有可能打破陰道微生態的平衡，導致陰道炎的發生。臨床常見陰道炎癥包括需氧菌性陰道炎、細菌性陰道炎、外陰陰道假絲酵母菌陰道炎、滴蟲陰道炎[4]。需氧菌性陰道炎是乳酸桿菌減少、需氧菌感染引起的陰道炎癥，常見病原體為鏈球菌、葡萄球菌以及大腸埃希菌[5]。細菌性陰道炎是由于陰道內產生過氧化氫的乳酸菌減少或消失，正常陰道內一組微生物（陰道加德納菌、陰道普雷沃氏菌、消化鏈球菌、紫色單胞菌、流動彎曲桿菌等）異常增多而引起的陰道微生態紊亂的臨床癥狀，通常表現為白帶增多、白帶腥臭、外陰瘙癢等[6]。外陰陰道念珠菌性陰道炎是由外陰陰道念珠菌感染引起的一種生殖道疾病。滴蟲陰道炎是由陰道毛滴蟲感染引起的生殖道炎癥。陰道環境pH值為5.5～6.0時，易于病原菌生長繁殖[7]。

陰道內微生態是環境中細菌與細菌、細菌與外環境以及細菌與自身機體之間的一種動態平衡，以抑制各種外源性或內源性菌群的異常增殖，從而降低細菌性陰道病的發生概率[8]。陰道內微生態中的乳酸桿菌對于維持陰道內環境的平衡發揮著極為重要的作用，乳酸桿菌通過分泌乳酸降低陰道內pH值來抑制外源性及內源性致病菌的增殖。同時，乳酸桿菌可通過刺激過氧化氫及嗜酸乳酸菌的分泌來抑制陰道加德納菌、外陰陰道假絲酵母菌、大腸桿菌以及大腸埃希菌的增殖[9]。目前陰道炎的臨床診斷主要依靠患者體征和常規檢測，而顯微鏡診斷主要依靠檢驗員對細菌形態的鑒定，主觀性強，影響診斷結果。此外，某些類型的陰道炎癥狀不典型，導致臨床診斷難度增加[10]。在陰道五項指標聯合檢測試驗中，過氧化氫是陰道乳酸桿菌分泌的物質[11]，其濃度與乳桿菌數量呈正相關，其對維持陰道微環境，防止病原菌的侵襲和增殖有重要作用，不受宮頸黏液和不良藥物因素的影響[12]。白細胞酯酶存在于粒細胞中，是反映陰道宿主細胞的主要標記酶，可直接反映陰道炎癥的發生。唾液酸酶是細菌性陰道炎細菌分泌的一種胞外酶，與致病菌數量呈正相關。β直半乳糖胺酶是真菌（尤其是白色念珠菌）和陰道毛滴蟲分泌的一種酶。結合陰道pH值，可有效提示兩種微生物感染，可半乳糖胺酶陽性和pH值≥4.8提示滴蟲感染；示滴半乳糖胺酶陽性和pH值≤4.6提示白色念珠菌感染[13]。

革蘭染色后滴蟲蟲體在低倍鏡下可呈云霧狀，在油鏡下可呈圓形，梨形，橢圓形等多形性，胞內可看到細胞核，核較小，位于蟲體的前段，可見鞭毛，胞質內可見粗細較均勻的紅色顆粒，為其特有的氫化酶體；孢子在革蘭染色后呈現革蘭陽性，大小明顯大于普通細菌，容易觀察；乳酸桿菌為無芽孢的革蘭陽性大桿菌，單個、成雙或短鏈排列，有長有短，有時呈棒狀，細長，但不分枝；革蘭染色后可清楚發現，線索細胞為大型鱗狀上皮細胞，表面附著大量加特納菌或者小桿菌，邊緣不整齊、粗糙、透明度不高，出現線索細胞，可高度懷疑是細菌性陰道炎[14]。

本研究結果顯示，五聯檢測法在白細胞的檢出率上要高于濕片鏡檢法和革蘭染色法。根據五聯檢測法白細胞的檢測原理，濕片鏡檢法和五聯檢測法的相關性較差，因為鏡檢法是計數白細胞的個數，白細胞酯酶與白細胞的個數無直接相關性。在致病性細菌、孢子、乳酸桿菌的檢出率上，革蘭染色法要高于濕片鏡檢法和五聯檢測法，革蘭染色法能更明確的鑒定出乳酸桿菌及其他內源性條件致病菌和外源性致病菌，臨床用藥更加具有針對性，患者也能夠及早得到有效的治療[15]。3種方法的滴蟲檢出率相近，差異無統計學意義。另外濕片鏡檢法對滴蟲的檢出率高，因滴蟲動態且典型，革蘭染色法更需要有經驗的檢查者，不然容易漏診。

本研究結果顯示，常規檢測法和革蘭染色法的kappa值為0.793，具有較高的一致性。在日常臨床分析中，常規檢測法可以較好的完成陰道分泌物的常規檢測工作，但是對于針對性病癥的檢出，如細菌性陰道炎、真菌性陰道炎的診斷，革蘭染色法能進一步明確診斷。對于日益增長的菌群失調癥（陰道微生態失調癥）上，革蘭染色法可以看出在未感染致病性細菌的情況下，乳酸桿菌的減少，能及時幫助患者。

綜上所述，常規檢測法具有高效、快速的特點，有較好的敏感性，而革蘭染色法可以提高臨床篩查的特異性，為實際治療提供幫助，建議在臨床分析診斷的時候結合使用兩種檢測方法，以提高疾病的診出率。

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（收稿日期：2022–08–25）

（修回日期：2022–12–25）