UPLC-MS/MS法同時快速測定保健食品中10種降壓類非法添加化學藥

王曉峰 許琨琨 盧文斌 吳芳海 蔡振世 林曉明

摘 要：目的：建立同時測定保健食品中10種降壓類非法添加化學藥的UPLC-MS/MS快速檢測方法。方法：液相采用ACQUITY UPLC?BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）柱，以超純水（含0.1%甲酸）-乙腈（0.1%甲酸）為流動相，進行梯度洗脫，進樣量2 μL，流速0.3 mL·min-1，柱溫30 ℃。質(zhì)譜采用ESI，正、負離子多反應監(jiān)測模式，進行定性分析和定量分析。結(jié)果：鹽酸普萘洛爾、酒石酸美托洛爾、艾司洛爾、比索洛爾、坎地沙坦、厄貝沙坦、替米沙坦、氯沙坦、纈沙坦和吲達帕胺的分離度良好，線性范圍內(nèi)相關性均較好，R2均大于0.996 3；平均回收率為93%～118%；RSD為1.4%～4.9%（n=6）；方法檢出限為0.10～5.00 μg·kg-1；方法定量限為0.30～15.00 μg·kg-1；單次分析僅需12 min。結(jié)論：該方法操作便捷、檢測時間短、靈敏度高、結(jié)果準確，適用于保健食品中10種降壓類非法添加化學藥的快速篩查及定量檢測。

關鍵詞：UPLC-MS/MS；保健食品；降壓類藥物

Abstract： Objective： To establish a UPLC-MS/MS rapid detection method for simultaneously determining 10 illegally added chemical antihypertensive drugs in health foods. Method： ACQUITY UPLC?BEH C18（ 2.1 mm×100 mm， 1.7 μm） column was used in the liquid phase with ultrapure water （containing 0.1% formic acid）-acetonitrile （0.1% formic acid） as the mobile phase for gradient elution， the injection volume was 2 μL， flow rate was 0.3 mL·min-1，?and column temperature was 30 ℃. The mass spectrometry was performed by ESI， positive/negative ion multiple reaction?monitoring mode for qualitative and quantitative analysis. Result： The separation degree of propranolol， metoprolol， amlodipine， bisoprolol， candesartan， irbesartan， telmisartan， losartan， valsartan， and indapamide was good， and the linear range correlations were good， all R2 values were greater than 0.996 3. The average recovery rate was 93%～118%. RSD was 1.4%～4.9% （n=6）. The LOD was between 0.10～5.00 μg·kg-1， and the LOQ was between 0.30～15.00 μg·kg-1. A single analysis only requires 12 min. Conclusion： The method is simple to operate， has short detection time， high sensitivity， and accurate results， and it is suitable for the rapid screening and quantitative detection of 10 illegally added chemical antihypertensive drugs in health foods.

Keywords： UPLC-MS/MS; health food; antihypertensive drugs

隨著近年來我國經(jīng)濟的迅速發(fā)展，人們的生活質(zhì)量得到了很大提高，同時老年人口不斷增加，導致出現(xiàn)越來越多的高血壓患者，市場上也出現(xiàn)了越來越多的輔助降壓類保健食品。為了牟取不當利益，一些不法分子會在保健食品中非法添加化學藥物，以增強其產(chǎn)品功效。非法添加化學藥物的保健食品很可能給服用者帶來一定的副作用和不良反應，嚴重的甚至導致死亡。因此國家嚴厲打擊化學藥物在保健食品中被非法添加的違法違規(guī)行為，而對這類非法保健食品進行檢測，成為相關部門監(jiān)管執(zhí)法的重要依據(jù)。目前，我國頒布的針對輔助降血壓類保健食品中非法添加化學藥物的檢驗方法有藥品監(jiān)督管理局藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件2009032、2014008兩份文件，主要針對利血平、硝苯地平等12種降壓類化學藥物的檢驗[1]。本文篩選了另外10種降壓類化學藥物，建立了用UPLC-MS/MS快速定性和定量分析保健食品中這10種化學藥物的方法[2-8]。

本方法增加了篩查覆蓋面、提高了檢驗效率，可為監(jiān)管部門的監(jiān)管工作提供技術(shù)保障。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

鹽酸普萘洛爾（批號：ALT600791）、酒石酸美托洛爾（批號：ALT702199）、艾司洛爾（批號：ALT701847）、比索洛爾（批號：FS1619422）、纈沙坦（批號：ALT601380）、氯沙坦（批號：ALT601382）、厄貝沙坦（批號：ALT601379）、坎地沙坦（批號：FS1619633）、替米沙坦（批號：FS1606242）、吲達帕胺（批號：FS1605112），均購自天津阿爾塔科技有限公司；色譜純乙腈（品牌：默克）；色譜純甲酸（品牌：ROE）；水為超純水；三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀（愛博才思公司，Triple Quad 5500）。

1.2 色譜與質(zhì)譜條件

1.2.1 色譜條件

色譜柱：ACQUITY UPLC?BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；流動相：A相為超純水（含0.1%甲酸），B相為乙腈（含0.1%甲酸）；流速：0.3 mL·min-1；柱溫：30 ℃；進樣量：2 μL；梯度洗脫見表1。

1.2.2 質(zhì)譜條件

（1）鹽酸普萘洛爾等9種化合物。離子源：ESI；掃描方式：MRM，正離子模式；氣簾氣：20 psi；離子化電壓：5 500 V；溫度：500 ℃；噴霧氣（GS1）：50 psi；輔助加熱氣（GS2）：50 psi。

（2）纈沙坦。離子源：ESI；掃描方式：MRM，負離子模式；氣簾氣：20 psi；離子化電壓：-4 500 V；溫度：500 ℃；噴霧氣（GS1）：50 psi；輔助加熱氣（GS2）：50 psi。各化合物質(zhì)譜參數(shù)見表2。

1.3 混合標準曲線系列的制備

精密稱取上述10種化合物的對照品各10 mg，用乙腈溶解，并轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中定容，配制成濃度為1.0 mg·mL-1的混合標準儲備溶液。用乙腈將混合標準儲備溶液（1.0 mg·mL-1）稀釋1 000倍，配制成1 000 ng·mL-1的混合標準工作溶液。用超純水將混合標準工作溶液（1 000 ng·mL-1）分別稀釋成濃度為10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1、200 ng·mL-1、300 ng·mL-1和500 ng·mL-1的混合標準曲線系列。

1.4 樣品處理方法

稱取1 g（精確到0.001 g）樣品置于50 mL離心管中，往離心管中加入20 mL乙腈，渦旋混勻后超聲提取15 min，用離心機（轉(zhuǎn)速：5 000 r·min-1）離心10 min，然后轉(zhuǎn)移上清液到50 mL容量瓶中，重復上述步驟，將上清液合并，用乙腈定容至50 mL，搖勻，取上清液過0.22 μm微孔濾膜，濾液直接供測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 專屬性試驗

分別將混合標準溶液（100 ng·mL-1）、加標供試品溶液（加標濃度100 ng·mL-1），按“1.2”項下測定，結(jié)果見圖1、圖2。結(jié)果顯示對照品與加標供品中各組分色譜峰保留時間一致，且各組分間無干擾，表明方法專屬性良好。

2.2 線性范圍與檢出限、定量限試驗

將“1.3”項下的混合標準曲線系列溶液按“1.2”項下測定，并繪制標準曲線，橫坐標（X）為混合標準溶液濃度，縱坐標（Y）為各成分峰面積。取陰性樣品，按100 μg·kg-1的添加量加入混合對照品溶液，經(jīng)適當稀釋后進樣，分別以S/N=3時和S/N=10時計算各化合物的檢出限和定量限，結(jié)果見表3。10種化合物在線性范圍內(nèi)相關性均較好，且具有較高的靈敏度，能夠滿足檢測要求。

2.3 加標回收率及重復性試驗

按“1.4”項下方法平行制備6份加標濃度為100 ng·mL-1的加標供試品溶液，并按“1.2”項下測定，記錄色譜峰面積，計算RSD，同時代入“2.2”項下線性回歸方程中計算平均濃度，并計算平均回收率，結(jié)果見表4。該方法各化合物的平均回收率在93%～118%，結(jié)果比較滿意；RSD范圍在1.4%～4.9%，重復性較好。

2.4 進樣精密度試驗

取100 ng·mL-1混合標準溶液平行測定6次的RSD評價精密度。由表5可知，各化合物的精密度均符合檢測要求。

2.5 基質(zhì)效應考察結(jié)果

將不含目標待測物的膠囊樣品按“1.4”項下方法處理后得到基質(zhì)空白溶液，分別向基質(zhì)空白和乙腈中添加一定濃度的待測物混合標準溶液，進行UPLC-MS/MS分析。通過計算各化合物在基質(zhì)溶液與標準溶液中峰面積的比值，用來評價樣品的基質(zhì)效應。若兩者的峰面積之比在80%～120%，表明基質(zhì)效應不明顯；在50%～80%或120%～150%，表明存在輕微的基質(zhì)效應；低于50%或高于150%則表明基質(zhì)效應極其顯著[4-5]。測得結(jié)果分別為鹽酸普萘洛爾126%、酒石酸美托洛爾109%、艾司洛爾122%、比索洛爾117%、氯沙坦121%、厄貝沙坦136%、坎地沙坦122%、替米沙坦96%、吲達帕胺111%和纈沙坦103%，由此可知，鹽酸普萘洛爾、艾司洛爾、氯沙坦、厄貝沙坦、坎地沙坦均存在輕微的基質(zhì)效應，酒石酸美托洛爾、比索洛爾、替米沙坦、吲達帕胺、纈沙坦基質(zhì)效應不明顯。因此，可采用配制基質(zhì)匹配標準曲線的方法來減少基質(zhì)對目標化合物的影響，以提高定量分析的準確度。

2.6 供試品的含量測定

采用所建立的方法對5種輔助降壓類保健食品進行了檢測，均未檢出上述10種化合物。同時做加標實驗，加標水平均為5.00 mg·kg-1，結(jié)果見表6，10種化合物回收率均在86%～118%，結(jié)果準確可靠。

3 結(jié)論

隨著治療高血壓的化學藥品種越來越多，在輔助降壓類保健食品中可能被非法添加的種類和方式也越來越多樣，需要通過不斷的研究和試驗，以滿足現(xiàn)實檢測的需要。本方法的前處理簡單快速、樣品檢測時間短、靈敏度高且結(jié)果準確可靠，擴大了降壓類非法添加化學藥物的篩查范圍，為保障公眾食品安全，打擊違法添加行為，監(jiān)管保健食品市場提供了有力的技術(shù)支持。

參考文獻

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