卵巢癌組織hsa-miR-28表達及其臨床意義

李瓊英,郭玲,王愷彬

(1.寶雞市中心醫院 婦科,陜西 寶雞 721000; 2.咸陽市第一人民醫院 病理科, 陜西 咸陽 712000)

卵巢癌是女性常見的一種惡性腫瘤,其發病率在全國女性生殖系統惡性腫瘤中占據第3位[1]。由于卵巢癌早期常無典型癥狀,且惡性程度相對較高,因此符合手術指征的患者及時接受根治術是延長其生存時間的有效手段,但患者術后復發情況存在較大差異,一旦復發將嚴重影響其生命安全和生活質量[2-3]。因此,研究卵巢癌根治術后復發相關影響因素具有重要意義。微小核糖核酸(miRNAs)作為一種微小內源性的非編碼RNA分子,可通過轉錄或翻譯靶標mRNA來調節一個或多個靶基因的表達,繼而影響生物學過程[4]。近年來研究[5]發現,miRNA可作為癌基因或抑癌基因在癌癥發生發展過程中發揮重要作用,可為惡性腫瘤的治療提供一個較好的治療靶點。有研究[6]報道,miR-28-3p在腎癌、肝癌等腫瘤中均發揮一定作用,且與腫瘤的遠處轉移及侵襲密切相關。另有試驗[7]發現,miR-28-5p在體外通過抑制N4BP1促進卵巢癌細胞增殖、遷移和侵襲的進程,抑制細胞凋亡。但目前關于內含子型微小核糖核酸-28(hsa-miR-28)在卵巢癌中的表達水平及其是否與卵巢癌臨床病理特征和預后有關國內外卻鮮有報道。因此,本研究檢測卵巢癌組織hsa-miR-28表達水平,分析其與臨床病理特征及根治術后復發的關系,為臨床早期診斷及改善預后提供參考,現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

經寶雞市中心醫院倫理委員會批準(批號:201702-005),選取2017年3月至2019年3月寶雞市中心醫院收治的行根治術治療的138例卵巢癌患者作為卵巢癌組,選取同期行腹腔鏡治療的120例卵巢良性病變患者作為對照組。納入標準:(1) 卵巢癌組均符合《2016 NCCN卵巢癌臨床實踐指南(第1版)》[8]卵巢癌診斷標準,均行卵巢癌根治術(全子宮+雙側附件切除)且經術后病理學檢查證實為卵巢癌,均為首次發病,術前均未接受過放療、化療等治療;(2) 對照組均行腹腔鏡手術且經術后病理學檢查證實為良性卵巢病變,術前未接受相關治療;(3) 患者均對本研究知情同意。排除標準:(1) 合并心、肝、腎等重要臟器功能障礙者;(2) 合并其它部位腫瘤者;(3) 合并其它自身免疫性疾病、凝血功能障礙者;(4) 合并精神疾病或認知功能障礙者;(5) 因各種原因不能全程參與本研究者。卵巢癌組患者年齡35～75歲,平均(53.78±10.42)歲,絕經97例;對照組年齡32～71歲,平均(52.85±9.72)歲,絕經81例,兩組具有可比性(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 hsa-miR-28水平檢測 收集卵巢癌組和對照組手術切除的卵巢組織各100 mg,放置于液氮罐中凍存,采用Trizol試劑法參照說明書提取總RNA。采用紅榮微(上海)生物工程技術有限公司提供的反轉錄試劑盒(貨號:RR036A),嚴格按照說明書對提取的總RNA進行反轉錄,將RNA反轉錄合成cRNA后進行聚合酶鏈反應,反應條件:預反應(95 ℃,9 min)-變性(95 ℃,10 s)-退火(60 ℃,15 s)-延伸(72 ℃,3 min),共40個循環。hsa-miR-28引物序列:上游5′-CGCGCACTAGATTGTGAGCT-3′,下游5′-CGCGCACTAGATTGTGAGCT-3′;內參U6引物序列:上游5′-CGACAAGACGATCCGGGTAAA-3′,下游5′-GGTTGAGGAGTGGGTCGAAG-3′。采用2-ΔΔCt計算hsa-miR-28表達量。

1.2.2 資料收集及隨訪 收集卵巢癌組患者年齡、絕經狀態、組織學類型、分化程度、國際婦產科聯合會(FIGO)分期、腫瘤直徑、卵巢組織hsa-miR-28表達量、術后化療等臨床資料。出院后通過電話、門診復診方式對患者進行3年隨訪,記錄患者復發情況,根據復發情況將患者分為復發組和未復發組。復發判斷標準[9]:(1) 卵巢癌腫瘤標志物糖類抗原125持續升高;(2) 影像學輔助檢查提示有腫塊;(3) 出現排除其它原因的腹水。只要符合任何1項及以上,則判斷為卵巢癌復發。

1.3 統計學處理

2 結 果

2.1 卵巢癌組與對照組卵巢組織hsa-miR-28表達水平的比較

卵巢癌組卵巢組織hsa-miR-28表達水平低于對照組(2.24±0.62vs.4.12±0.73,t=22.368,P<0.001)。

2.2 不同病理特征卵巢癌患者卵巢組織hsa-miR-28表達水平的比較

不同組織學類型、腫瘤大小患者卵巢組織hsa-miR-28表達差異無統計學意義(P>0.05),低分化、FIGO分期Ⅲ期卵巢癌患者hsa-miR-28表達水平低于高/中分化、FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05),見表1。

表1 不同病理特征卵巢癌患者卵巢組織hsa-miR-28表達水平比較

2.3 卵巢癌復發情況及復發與未復發組卵巢組織hsa-miR-28表達水平比較

隨訪3年期間患者無失訪,138例卵巢癌患者中有49例復發,其中有9例死亡,余89例均未復發,復發率為35.51%(49/138)。復發組卵巢組織hsa-miR-28表達水平低于未復發組(1.43±0.41vs.2.66±0.65,t=11.950,P<0.001)。

2.4 卵巢癌根治術后復發的影響因素分析

復發組年齡、絕經狀態、組織學類型及最大腫瘤直徑與未復發組相比差異均無統計學意義(P>0.05),復發組低分化、FIGO分期Ⅲ期占比均高于未復發組(P<0.05),復發組術后化療患者占比及hsa-miR-28表達水平低于未復發組(P<0.05),見表2。

表2 卵巢癌根治術后復發影響因素的單因素分析 例

將上表統計檢驗P<0.10的變量作為自變量、術后3年內有無復發作為因變量納入到Cox回歸模型中,變量賦值如下:分化程度高/中分化=0,低分化=1;FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期=0,Ⅲ期=1;術后化療有=0,無=1;hsa-miR-28表達水平為實測值。分析結果顯示,hsa-miR-28低表達、低分化、FIGO分期Ⅲ期均是卵巢癌根治術后復發的危險因素,術后化療是其保護因素(P<0.05),見表3。

表3 卵巢癌根治術后復發影響因素的Cox多因素分析

3 討 論

卵巢癌的發病機制較為復雜,臨床上早期癥狀不典型,隨著病情的發展,晚期可出現下腹不適、腹脹、食欲下降等消化道癥狀。目前臨床上主要的治療方式為手術切除、化療及放療,總體預后較差[10-11]。招錦蘭等[12]報道早期上皮性卵巢癌術后5年復發率為57.78%,本研究中卵巢癌患者根治術后3年復發率為35.51%,均可證實卵巢癌術后復發率較高。因此,探索與卵巢癌相關的癌基因分子有助于進一步了解疾病,對早期診斷及治療具有重要意義。

本研究結果顯示,卵巢癌患者卵巢組織hsa-miR-28表達水平低于卵巢良性病變組織,且低分化、FIGO分期Ⅲ期卵巢癌患者hsa-miR-28表達水平均低于中/高分化、FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期的患者,說明hsa-miR-28水平在卵巢癌患者中降低,提示其表達水平與卵巢癌發生發展密切關聯。hsa-miR-28是近年來新發現的一種miRNA,其作為內含子型miRNA,定位于人的3號染色體LIM區域LPP(Lipoma Preferred Partner)基因,其表達變化可影響下游靶基因及相關信號通路的功能變化[13]。有研究顯示,miR-28在腎癌、肝癌、結直腸癌、胃癌等多種癌癥中呈現低表達,且大量研究表明miR-28在促進細胞凋亡、抑制增殖和轉移等生理過程中具有廣泛的調控作用[14-15]。袁海川等[16]研究顯示,在前列腺癌患者血清樣本中miR-28的表達量顯著降低,并與前列腺癌的組織學分級和病理分期密切相關,其在前列腺癌早期診斷中可作為生物標志物。本研究結果還發現,卵巢癌根治術后3年內復發患者hsa-miR-28表達水平比未復發患者低,與李淑軍等[17]研究報道的一致,均提示miR-28低表達可增加癌癥術后復發風險。miR-28可抑制原癌基因HOVB3的表達,將細胞周期阻止在G1期,從而抑制癌細胞增殖轉移[18]。另有研究[19]顯示,miR-28-5p可通過升高靶基因 BECN1的表達來促進癌細胞自噬,抑制癌細胞增殖,從而發揮抗腫瘤作用。故hsa-miR-28在卵巢癌根治術后低表達可減弱對癌細胞增殖遷移的抑制能力,導致術后殘留的微小腫瘤灶迅速增殖轉移,增加局部復發風險。本研究進一步通過Cox分析證實了hsa-miR-28表達水平降低可能是卵巢癌根治術后復發的危險因素。

此外,本研究還發現低分化、FIGO分期Ⅲ期是卵巢癌根治術后復發的危險因素,術后化療是其保護因素,與既往報道[20-21]相符。分析原因為:低分化癌組織擴散性更強,易較早發生轉移,且不易被發現,從而使患者根治術后復發率升高;分期高的腫瘤往往較大,惡化程度較嚴重,臨床上局部侵犯明顯,癌細胞更易侵入血管和淋巴組織,且局部侵犯增加了手術難度及局部病變殘留的風險,因而增加了術后復發的風險;化療是卵巢癌術后最重要的輔助治療手段,能夠降低腫瘤負荷,清除殘余癌病灶,降低術后復發風險。

本研究發現hsa-miR-28在卵巢癌組織中呈低表達,其與卵巢癌臨床病理特征及根治術后復發密切相關,hsa-miR-28低表達、低分化、FIGO分期Ⅲ期均是卵巢癌根治術后復發的危險因素,提示hsa-miR-28表達可能為臨床評估卵巢癌分化程度、臨床分期、預后提供一定的指導作用。但本研究仍存在一定的局限性,樣本量選取較小,hsa-miR-28在卵巢癌中具體作用機制、對疾病進展及預后的評估價值也需進一步深入探討。