野生靈芝JXLZ-3菌株生物學特性研究

黃保成 胡秀月 韋嬌君 王燦琴 韋仕巖 王曉國

（1 田林縣科學技術情報研究所，廣西 田林 533300；2 田林縣經濟作物站，廣西 田林 533300；3 廣西農業科學院微生物研究所，廣西 南寧 530007）

靈芝Ganoderma lucidum，是一種珍貴的食藥用真菌[1]，主要分布于我國的熱帶、亞熱帶地區，以海南省、貴州省、云南省分布種類最多[2-3]。靈芝在我國被視為寶貴的中藥材，中醫學家認為靈芝具有滋補強體、扶正固本、延年益壽等功效[4]，有著悠久的食用歷史，可用于泡茶、泡酒、入菜等[5]。目前，我國栽培推廣的靈芝品種較少，且部分品種因長年使用已出現減產、品質下降等退化現象。靈芝優良新品種選育已成為食用菌育種工作者的首要任務，而野生靈芝種質資源的挖掘是靈芝新品種選育的重要途徑之一。因此采集具有優良性狀的野生靈芝菌株[6]，并馴化栽培勢在必行[7]。

筆者對一株野生靈芝進行生物學特性研究，探索該菌株菌絲最佳生長條件，為野生靈芝馴化栽培及種質創新提供數據支撐。

1 材料與方法

1.1 供試菌株及培養基

供試野生靈芝子實體于2019 年采自廣西壯族自治區百色市靖西市湖潤鎮，經組織分離、純化和鑒定，獲得純菌株，編號為JXLZ-3，保藏于廣西農業科學院微生物研究所。供試培養基為PDA 培養基。該菌株人工栽培子實體見圖1。

圖1 人工栽培靈芝JXLZ-3子實體

1.2 試驗方法

1.2.1 培養溫度試驗

將供試菌株接種于PDA 培養基（規格9 cm 平皿）中，于28 ℃恒溫培養箱避光活化培養，待菌絲長滿培養基后，用直徑5 mm的打孔器從菌落邊緣取大小相同的圓形菌塊，轉接于空白PDA 培養基上，然后分別置于15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃、35 ℃恒溫培養箱內避光培養6 d。每個處理5個重復。

在培養過程中觀察菌絲長勢，采用“十”字交叉法測量菌落直徑，計算菌絲平均生長速度。

菌絲平均生長速度=菌落半徑（mm）∕培養天數（d）。

1.2.2 培養基pH試驗

設置PDA 培養基pH 為4、5、6、7、8、9、10、11，高溫滅菌后倒平板，接種后于28 ℃恒溫培養箱避光培養7 d。每個處理5 個重復。接種、觀察及測量方法同1.2.1。

1.2.3 培養基碳源試驗

PDA 培養基分別加入等量的蔗糖、果糖、乳糖、麥芽糖、淀粉、葡萄糖，配制不同碳源培養基，高壓滅菌后倒平板，接種后于28 ℃恒溫培養箱避光培養7 d。每個處理5 個重復。接種、觀察及測量方法同1.2.1。

1.2.4 培養基氮源試驗

PDA 培養基中分別加入等量的酵母粉、牛肉膏、蛋白胨、硝酸銨、硫酸銨、尿素、硝酸鉀，配制不同氮源培養基，高壓滅菌后倒平板，接種后于28 ℃恒溫培養箱避光培養7 d。每個處理5 個重復。接種、觀察及測量方法同1.2.1。

1.3 數據分析

采用DPS 軟件對以上單因素試驗數據進行方差分析和差異顯著性比較，用字母標記法表示。

2 結果與分析

2.1 培養溫度對靈芝JXLZ-3 菌株菌絲生長的影響

由表1、圖2 可知，培養溫度為15～30 ℃時，靈芝JXLZ-3 菌株菌絲均能生長，溫度為30 ℃，菌絲潔白濃密且整齊，長勢最強，為菌絲最適生長溫度。培養溫度為20 ℃、25 ℃，菌絲長速（均指平均生長速度，下同）顯著慢于30 ℃，長勢也相對較弱；培養溫度為15 ℃，菌絲長速較慢，稀疏細弱；35 ℃下培養6 d菌絲不萌發，但再在25 ℃下培養菌絲又可恢復生長。試驗培養溫度間菌絲長速均存在極顯著差異。

表1 不同培養溫度下靈芝JXLZ-3菌株菌絲長速

圖2 不同培養溫度靈芝JXLZ-3菌株菌落形態（培養6 d）

2.2 培養基pH對靈芝JXLZ-3菌株菌絲生長的影響

由表2、圖3 可知，靈芝JXLZ-3 菌株菌絲在8 個pH 處理培養基上均可正常生長，其菌絲長速排序：pH 5>pH 4>pH 6>pH 7>pH 8>pH 10>pH 9>pH 11。pH 5 的培養基上，菌絲長速最快，潔白濃密且整齊，長勢最強；pH 4 的培養基上，菌絲長速及長勢次之，但該pH的培養基質地較軟，不利于轉接操作；pH 6、7、8的培養基上，菌絲長速隨pH上升而下降，長勢變弱；pH 9、10的培養基上，菌絲雖長速較慢，但潔白濃密且整齊，長勢表現較佳；pH 11的培養基上，菌絲長速最慢，且與其他pH處理有極顯著差異。

表2 不同pH培養基上靈芝JXLZ-3菌株菌絲長速

圖3 不同pH培養基上靈芝JXLZ-3菌株菌落形態（培養7 d）

綜合菌絲長速和長勢，pH 4～6的培養基上菌絲生長最好，最適pH為5。

2.3 供試碳源對靈芝JXLZ-3 菌株菌絲生長的影響

由表3、圖4可知，靈芝JXLZ-3菌株菌絲在以果糖、蔗糖、葡萄糖為碳源的培養基上長速較快，且三者間無顯著性差異，菌絲潔白濃密、菌落邊緣整齊，長勢良好；在以淀粉或麥芽糖為碳源的培養基上菌絲長速次之，菌絲濃密與整齊程度稍差，二者間無極顯著差異；在以乳糖為碳源的培養基上菌絲長速較慢，與其他碳源處理有顯著差異，菌絲較稀疏、細弱，長勢較弱。

表3 不同碳源培養基上靈芝JXLZ-3菌株菌絲長速

圖4 供試碳源培養基上靈芝JXLZ-3菌株菌落形態（培養7 d）

綜合靈芝JXLZ-3 菌株菌絲長速、長勢，培養基最適碳源為果糖。

2.4 供試氮源對靈芝JXLZ-3菌株菌絲生長的影響

由表4、圖5 可知，在以尿素為氮源的培養基上靈芝JXLZ-3 菌株菌絲不萌發，在其他氮源培養基上菌絲均能夠正常生長，菌絲長速排序：酵母粉>硝酸銨>硫酸銨>牛肉膏>硝酸鉀>蛋白胨。在以酵母粉、硝酸銨、硫酸銨為氮源的培養基上菌絲生長較快，且三者間無顯著差異，但在以酵母粉、硝酸銨為氮源的培養基上菌絲更潔白濃密；在以牛肉膏、硝酸鉀為氮源的培養基上菌絲長速次之，二者間無極顯著差異；在以蛋白胨為氮源的培養基上菌絲長速較慢，與其他氮源培養基上的菌絲長速存在極顯著差異。

表4 供試氮源培養基上靈芝JXLZ-3菌株菌絲長速

圖5 供試氮源培養基上靈芝JXLZ-3菌株菌落形態（培養7 d）

3 小結與討論

靈芝JXLZ-3 菌株菌絲在15～30 ℃均能生長，最適溫度為30 ℃，與錢坤等[8]、蘭玉菲等[9]和劉冬梅等[10]的研究結果基本一致，但與雷萍等[11]報道的野生靈芝菌株菌絲生長適宜溫度為26～28 ℃有些差異。靈芝菌絲生長適宜溫度的差異是否與來自不同地理位置有關，有待進一步研究確認。

在pH 4～11 的培養基上，靈芝JXLZ-3 菌株菌絲均能生長，最適pH 為5，與白肉靈芝[12]、靈芝南GL11[13]、四川靈芝[8]的生長最適培養基pH 分別為3、6、7 不同。說明不同靈芝菌株菌絲的最適生長pH有一定的差異。

在以果糖或蔗糖為碳源培養基上靈芝JXLZ-3菌株菌絲長速較快、長勢強，最適碳源為果糖，與劉冬梅等[10]、雷萍等[11]報道的最適碳源為可溶性淀粉、葡萄糖、蔗糖不同，說明不同靈芝菌株菌絲生長對碳源需求有差異。在以酵母粉、硝酸銨、硫酸銨為氮源的培養基上靈芝JXLZ-3 菌株菌絲生長良好，最適氮源為酵母粉，該結果與劉冬梅等[10]、雷萍等[11]報道的最適氮源為酵母粉一致；而與錢坤等[8]研究的四川靈芝最適氮源為牛肉膏不同，與陳旭等[13]研究的靈芝南GL11 最適氮源為蛋白胨也有差異，可能與基礎培養基不同有關。

近年來廣西靈芝產業發展迅速，但目前推廣栽培的靈芝品種較少且部分因常年使用出現退化現象。研究結果為廣西靈芝選育更新換代奠定一定基礎。