卵孢小奧德蘑蛛網病病原菌的鑒定與生物學特性研究

李俊 秦文韜 高琳 劉宇 王守現 宋慶港

摘要

卵孢小奧德蘑Oudemansiella?raphanipes是近年來成功馴化栽培的一種食藥兼用的珍稀菌類，近年來隨著其栽培面積的不斷擴大，病害發生也越來越嚴重。作者在北京某卵孢小奧德蘑種植基地發現疑似蛛網病，為明確其病原菌，對發病子實體進行了病原菌分離，并綜合其形態學特征、多基因系統發育分析和柯赫氏法則驗證的結果，將卵孢小奧德蘑蛛網病病原菌鑒定為金黃菌寄生Hypomyces?aurantius（無性階段為異形枝葡霉Cladobotryum?varium）。該病原菌菌絲生長的最適溫度為20℃，最適碳源為木屑，最適氮源為黃豆粉，最適pH為6，光照對菌絲生長有一定的抑制作用;產孢最適溫度為20℃，最適pH為8，最適氮源為麩皮，最適碳源為木屑;孢子萌發的最適營養液為0.2%葡萄糖溶液，最適溫度為25℃，最適pH為6。研究結果為進一步明確卵孢小奧德蘑蛛網病的發生規律，制定科學的防治策略奠定了基礎。

關鍵詞

卵孢小奧德蘑;?蛛網病;?金黃菌寄生;?生物學特性

中圖分類號：

S?436.46

文獻標識碼：?A

DOI：?10.16688/j.zwbh.2022183

Identification?and?biological?characteristics?of?Hypomyces?aurantius，?the?pathogen?of?cobweb?disease?on?Oudemansiella?raphanipes

LI?Jun1，2，?QIN?Wentao1*，?GAO?Lin1，?LIU?Yu1*，?WANG?Shouxian1，?SONG?Qingang1

（1.?Beijing?Engineering?Research?Center?for?Edible?Mushroom，?Institute?of?Plant?Protection，?Beijing?Academy?of

Agriculture?and?Forestry?Sciences，?Beijing?100097，?China;?2.?College?of?Bioscience?and?Resources?Environment，

Beijing?University?of?Agriculture，?Beijing?102206，?China）

Abstract

Oudemansiella?raphanipes，?one?of?rare?fungi?for?both?food?and?medicine，?has?been?successfully?domesticated?and?cultivated?in?recent?years.?With?the?expansion?of?the?cultivation?area，?various?diseases?appear?on?O.raphanipes.?Suspected?cobweb?disease?was?found?in?a?planting?base?of?O.raphanipes?in?Beijing.?The?pathogen?was?isolated?from?the?diseased?fruiting?body?and?identified?as?Hypomyces?aurantius（anamorph?was?Cladobotryum?varium）by?integrated?method?of?morphological?characteristics，?multigene?phylogenetic?analysis?and?Kochs?rule?verification.?Biological?characteristics?analysis?showed?that?the?optimum?temperature?for?mycelial?growth?of?H.aurantius?was?20℃，?the?optimum?carbon?source?was?sawdust，?the?optimum?nitrogen?source?was?soy?flour，?and?the?optimum?pH?value?was?6，?while?light?showed?a?certain?inhibitory?effect?on?the?mycelial?growth.?The?optimum?temperature?for?spore?production?was?20℃，?the?optimum?pH?value?was?8，?the?optimum?nitrogen?source?was?bran?and?the?optimum?carbon?source?was?sawdust.?The?optimum?nutrient?solution?for?spore?germination?of?H.aurantius?was?0.2%?glucose?solution，?the?optimum?temperature?was?25℃，?and?the?optimum?pH?value?was?6.?The?results?will?lay?foundations?for?further?clarifying?the?occurrence?regulation?of?the?disease?and?formulating?scientific?control?strategies.

Key?words

Oudemansiella?raphanipes;?cobweb?disease;?Hypomyces?aurantius;?biological?characterization

卵孢小奧德蘑Oudemansiella?raphanipes?（Berk.）?Pegler?&?T.W.K.?Young商品名為黑皮雞樅，隸屬于擔子菌門Basidiomycota，傘菌綱Agaricomycetes，傘菌目Agaricales，膨瑚菌科Physalacriaceae，小奧德蘑屬Oudemansiella［1］，其子實體口感獨特，含有豐富的氨基酸、蛋白質、脂肪酸、多糖、膳食纖維等營養成分，并具有抗氧化、保護肝臟、調整腸道菌群、緩解內毒素血癥、抗腫瘤、降血壓、抑制病原菌的生物活性［2］，是食藥兼用的高檔保健珍稀菌類。卵孢小奧德蘑首次發現于印度，在我國人工栽培時間較短［35］，據中國食用菌協會統計，2020年全國卵孢小奧德蘑總產量達19?502?t，且已在山東、山西和廣東等多個地區形成了一定的栽培規模。覆土是卵孢小奧德蘑生產過程中的關鍵步驟，復雜的生長環境為病害的發生提供了便利條件，因此，近年來，隨著其栽培面積的不斷增加，病害的發生也越來越重，限制了卵孢小奧德蘑的健康生長及其產業的發展。

2021年，作者在北京某食用菌種植基地發現卵孢小奧德蘑子實體上的一種病害，疑似蛛網病，為明確其病原，本研究綜合形態學特征、培養特性及多基因系統發育分析，明確其分類地位，并完成柯赫氏法則驗證，進一步研究并明確了病原菌的生物學特性，以期為進一步理解卵孢小奧德蘑蛛網病的發生規律，制定科學的防治措施提供理論支撐。

1?材料與方法

1.1?病原菌的分離與純化

利用無菌接種針挑取適量罹病的卵孢小奧德蘑子實體上的白色霉狀物于PDA綜合培養基（馬鈴薯200?g，葡萄糖20?g，瓊脂20?g，蛋白胨5?g，KH2PO4?3?g，MgSO4?0.5?g，維生素B1?10?mg，蒸餾水1?000?mL）上，置于培養箱中25℃恒溫黑暗培養，逐日觀察并記錄菌株的培養特性（生長速度、菌落顏色變化及產孢情況）。待菌落產孢后，進行單孢分離純化，獲得純培養菌株，并保藏于北京市農林科學院植物保護研究所病原菌資源庫內，菌株編號為FSA2。

1.2?病原菌的形態學鑒定

用直徑5?mm的打孔器打取菌塊，接種到PDA綜合培養基上，置于25℃恒溫培養箱內黑暗條件下培養，逐日觀察記錄菌絲生長狀況和菌落形態。利用光學顯微鏡觀察菌絲、分生孢子及厚垣孢子的形態特征，測量40個分生孢子的大小，并對上述特征進行拍照。

1.3?病原菌多基因序列分析

將分離菌株接種至PDA綜合培養基上，置于25℃恒溫培養箱中黑暗培養7?d，刮取適量菌絲于已滅菌的1.5?mL離心管中，利用植物基因組DNA提取試劑盒（北京，天根），按照說明書步驟進行基因組DNA的提取，并分別利用引物ITS1/ITS4［6］，EF1983F/2218R［7］，RPB25F/7cR［8］擴增ITS、TEF1α、RPB2基因，利用自設計引物RPB1F1（5′GCCGATGAAGTTGGTCTA3′）/RPB1R1（5′TATGTTGCGGTGAGCCTT3′）擴增RPB1基因。PCR反應總體系（20?μL）：引物各1.0?μL，PCRMix（北京，擎科）10?μL，DNA模板1?μL，ddH2O?7?μL。ITS、TEF1α、RPB2的PCR反應條件參考上述相應文獻。RPB1基因擴增反應條件：95℃預變性5?min;95℃變性45?s，50℃退火45?s，72℃延伸45?s，35個循環;72℃延伸10?min，4℃保存。PCR產物經1%瓊脂糖凝膠電泳檢測后，送至中美泰和生物技術有限公司（北京）測序。將測得的序列在GenBank數據庫中進行BLAST分析，同時，基于ITS、RPB1、RPB2和TEF1α序列，利用PAUP?4.0b10軟件采用最大簡約法（maximum?parsimony，MP）構建多基因系統發育樹，Bootstrap重復檢驗次數為1?000次［9］。在系統發育樹中，最大簡約分析的自展值（bootstrap?value，BP）大于50%的顯示于各分支的節點上。

1.4?致病性測定

利用柯赫氏法則驗證菌株FSA2對卵孢小奧德蘑的致病性。在可控智能出菇箱中培養卵孢小奧德蘑，待出菇后進行回接試驗。配制濃度為108個/mL的孢子懸浮液，并將其噴灑于健康卵孢小奧德蘑子實體上，以噴灑等量無菌水作為對照，每處理重復3次，出菇箱溫度控制在24～26℃，相對濕度控制在80%～90%;定期觀察子實體的發病情況，并與自然發病癥狀進行比較，回接試驗重復4次。發病后，重新分離獲得病原菌純培養菌株，并鑒定其是否為同一病原菌。

1.5?病原菌生物學特性研究

1.5.1?溫度對病原菌菌絲生長、產孢量和孢子萌發的影響

溫度對菌絲生長的影響：將直徑為5?mm的菌塊接種在直徑為90?mm的PDA綜合培養基平板上，分別置于15、20、25、30、35℃下恒溫黑暗培養，每個處理重復4次，每天觀察記錄菌落的生長情況，采用十字交叉法測量菌落直徑，并重點對72?h后數據進行記錄分析。

溫度對菌株產孢量的影響：將菌株在25℃黑暗條件下培養5?d，取菌落邊緣直徑5?mm的菌塊接種于PDA綜合培養基平板中央，3次重復，分別置于上述梯度溫度條件下進行恒溫培養。7?d后每皿取4塊直徑1?cm的菌塊，用1?mL無菌水洗脫孢子，血球計數板測定產孢量，每個處理重復3次。

溫度對孢子萌發的影響：用移液槍分別吸取15?μL?的0.2%葡萄糖溶液滴在單凹玻片上，并滴加15?μL濃度相同的孢子懸浮液，置于上述梯度溫度條件下進行恒溫保濕培養，24?h后觀察記錄孢子萌發情況。每處理觀察200個孢子萌發情況，每處理重復3次。芽管長度超過孢子直徑長度（指直徑最小的一邊）的一半視為已經萌發。分生孢子萌發率=萌發的孢子數/孢子總數×100%。

1.5.2?pH對病原菌菌絲生長、產孢量和孢子萌發的影響

利用1?mol/L?NaOH和1?mol/L?HCl調節PDA綜合培養基及0.2%葡萄糖溶液的pH，分別設置培養基和葡萄糖溶液的pH為5、5.5、6、6.5、7、7.5和8，培養基滅菌后制作平板，然后將直徑為5?mm的菌塊接種于直徑90?mm培養基平板上;其余方法同1.5.1。

1.5.3?碳源對病原菌菌絲生長、產孢量的影響

以PDA綜合培養基為對照，分別以等量碳源的棉籽殼、玉米芯、木屑、蔗糖、麥芽糖、淀粉替代葡萄糖;其余方法同1.5.1。

1.5.4?氮源對病原菌菌絲生長、產孢量的影響

以PDA綜合培養基為對照，分別以等量氮源的麩皮、黃豆粉、玉米粉、酵母粉、硫酸銨、尿素、硝酸鈉替代蛋白胨;其余方法同1.5.1。

1.5.5?光照對病原菌菌絲生長的影響

將直徑為5?mm的菌塊接種在PDA綜合培養基上，置于25℃恒溫培養箱中，分別設置完全光照和完全黑暗兩個處理;其余方法同1.5.1。

1.5.6?不同營養液對病原菌孢子萌發的影響

用移液槍分別吸取15?μL的0.2%葡萄糖溶液、0.2%?α乳糖溶液、0.2%蔗糖溶液、0.2%麥芽糖溶液在單凹玻片上，并滴加15?μL濃度相同的孢子懸浮液，置于25℃恒溫培養箱中保濕培養，24?h后觀察記錄孢子萌發情況。每處理觀察200個孢子萌發情況，重復3次。

2?結果與分析

2.1?病害癥狀調查

卵孢小奧德蘑蛛網病發生初期表現為灰白色蛛網狀的菌絲首先出現在土壤表層，并逐漸擴展至菌柄基部，向上逐漸蔓延至菌褶甚至菌蓋，最后完全覆蓋包裹子實體，導致20%以上的子實體失去商品價值，經濟損失嚴重（圖1a，?b）。

2.2?病原菌形態學鑒定

病原菌在PDA培養基上生長較迅速，25℃黑暗培養3?d后，菌落直徑可達30～60?mm，菌落白色，氣生菌絲豐富，且有黃色色素擴散至培養基中（圖2a）。菌絲致密且具有隔膜，分生孢子梗呈帚狀或輪枝狀分枝（圖2c）;分生孢子橢圓形至長橢圓形，透明，具有0～1個分隔，大小為（11.1～18.75）μm×（6.5～9.2）μm（圖2b），厚垣孢子頂生、間生或2～4個串生（圖2d）。根據菌落及顯微形態特征，鑒定該病原菌為金黃菌寄生Hypomyces?aurantius［10］。

2.3?病原菌分子鑒定

測序獲得菌株FSA2的ITS、TEF1α、RPB2和RPB1序列，通過BLAST分析發現菌株FSA2的上述基因序列分別與Hypomyces?aurantius的模式菌株TFC?95171基因序列（FN?859425、FN?868743、FN?868679和FN?868805）的相似度大于98%。構建基于上述基因的系統進化樹結果顯示，菌株FSA2以高自展值與Hypomyces?aurantius模式菌株TFC95171聚成一簇（MPBP=100%）（圖3）。綜合形態學特征、培養特性和分子生物學鑒定結果，確定該病原菌為金黃菌寄生Hypomyces?aurantius。

2.4?致病性測定

將菌株FSA2的孢子懸浮液接種至健康的卵孢小奧德蘑子實體上2?d后，覆土表面出現大量灰白色菌絲體，并逐漸向菌柄基部及菌柄上部擴展，3～5?d后逐步覆蓋子實體，部分發病的子實體菌柄有脫皮開裂扭曲現象，部分發病子實體生長后期開傘后，菌蓋或菌柄上會產生棕色至深褐色病斑（圖4c～f），人工接種病原菌后卵孢小奧德蘑的發病癥狀（圖4b）與田間自然發病癥狀一致，對照組未出現發病跡象且長勢良好（圖4a）。從人工接種的發病卵孢小奧德蘑子實體上再次分離病原菌并進行鑒定，得到了與接種真菌相同的病原菌，因此確定菌株FSA2為卵孢小奧德蘑蛛網病的病原菌。

2.5?病原菌生物學特性

2.5.1?溫度對病原菌菌絲生長、產孢量和孢子萌發的影響

病原菌在15～25℃的溫度范圍內均可正常生長，15℃下菌落較稀疏，20～25℃下菌落生長速度較快，菌絲較致密，20℃下長勢最好，培養72?h后菌落直徑為（6.19±0.62）cm，當溫度高于30℃時，菌絲生長速度極緩慢，24?h后停止生長。最適產孢溫度為20℃，7?d產孢量為5.8×106個/mL，通過對孢子最適萌發溫度的研究，25℃最適合孢子萌發，24?h萌發率可達62.24%（表1）。

2.5.2?pH對病原菌菌絲生長、產孢量和孢子萌發的影響

病原菌在pH?5～8的范圍內均可正常生長，pH?5～6的范圍內病原菌長勢較好。pH為6時，長勢最好，培養72?h菌落直徑為（6.74±0.22）cm。當pH＞7時，菌絲生長緩慢，pH為7時，直徑最小，僅為（5.91±0.85）cm。pH為5.0～8.0時，產孢量逐漸增加，pH為8時，產孢量最高，7?d產孢量可達7.1×105個/mL，但在24?h萌發率較低，僅為9.05%，pH為6.5時，孢子可以較好萌發，24?h的萌發率為82.58%，顯著高于前者。

2.5.3?碳源對病原菌菌絲生長、產孢量的影響

在6種不同碳源的培養基中（表3），病原菌菌絲均可以生長，但病原菌對不同碳源的利用能力存在較大差異。在以木屑為碳源的培養基上病原菌菌絲生長最快，25℃培養72?h后菌落直徑為（6.35±0.54）cm，玉米芯次之，而在以蔗糖為碳源的培養基上，菌落長勢緩慢，25℃培養72?h后菌落直徑為（4.25±1.04）cm，菌落直徑小于對照組，葡萄糖為碳源培養72?h后菌落直徑為（4.55±0.37）cm。以木屑為碳源時產孢量最大，7?d產孢量可達到6×106個/mL。

2.5.4?氮源對病原菌菌絲生長、產孢量的影響

在7種不同氮源的培養基中（表4），病原菌均可正常生長，但病原菌對7種氮源的利用能力存在較大差異，其中對黃豆粉的利用能力較高，病原菌在以黃豆粉作為氮源的培養基上長勢最好，25℃生長72?h后菌落直徑為（5.7±0.63）cm，麩皮次之，且病原菌在以麩皮作為氮源的培養基上的菌落直徑與對照組（蛋白胨）不存在顯著差異，病原菌對硝酸鈉和尿素的利用能力較差，生長速度緩慢，25℃培養72?h菌落平均直徑分別為（2.33±0.42）cm和（3.24±0.32）cm。同時，在以麩皮為氮源的培養基上病原菌產孢量最大，7?d產孢量為1.6×106個/mL。

2.5.5?光照對病原菌生長的影響

病原菌在光照和黑暗條件下均可以正常生長，但是在兩種條件下，病原菌的生長速率存在差異，25℃黑暗條件下恒溫培養72?h后病原菌菌落直徑為（4.94±0.10）cm，而光照條件下的菌落直徑為（4.16±0.54）cm，說明光照對病原菌生長有一定的抑制作用。不同條件下病原菌菌落顏色稍有差異，黑暗條件下菌落顏色呈白色至淡黃色。

2.5.6?不同營養液對病原菌孢子萌發的影響

24?h后在顯微鏡下觀察孢子的萌發情況，發現孢子在蔗糖溶液中不萌發，在0.2%麥芽糖和0.2%?α乳糖溶液中萌發率均低于20%;在0.2%葡萄糖溶液中萌發率最高，為62.24%，顯著高于在其他營養液中的孢子萌發率（圖5）。

3?結論與討論

菌寄生屬真菌無性階段隸屬于枝葡霉屬，是一類常見的病原真菌，作為食用菌蛛網病的病原已報道可危害雙孢菇Agaricus?bisporus、香菇Lentinula?edodes、杏鮑菇Pleurotus?eryngii、金針菇Flammulina?filiformis等多種食用菌，在中國、韓國、南非等國家和地區均造成了嚴重的經濟損失［1112］，被認為是最具毀滅性的食用菌病原真菌之一［13］。20世紀90年代，雙孢菇蛛網病曾在愛爾蘭與英國流行，造成子實體減產近40%［14］。

本文綜合了田間發病癥狀、致病性測定結果、形態學鑒定及分子生物學鑒定結果，明確在卵孢小奧德蘑子實體上發現的病害為蛛網病，病原菌為金黃菌寄生Hypomyces?aurantius。該病原菌侵染卵孢小奧德蘑時首先在土壤表面出現大量灰白色菌絲，并逐漸擴展至子實體的菌柄，而后蔓延到菌蓋，侵染過程中部分菌柄會出現表皮脫落開裂的現象，最后病原菌菌絲會覆蓋整個子實體，導致子實體腐爛甚至死亡，癥狀與香菇、雙孢菇等其他食用菌蛛網病的癥狀相似［1517］。劉國麗等［18］在遼寧地區發現了卵孢小奧德蘑蛛網病，但病原菌尚未鑒定到種，且與本研究菌株的系統發育位置存在差異。

本文通過對卵孢小奧德蘑蛛網病病原菌生物學特性的研究，明確了其在不同環境條件下的適應能力及對不同營養源的利用情況，可為進一步研究病害發生規律與環境因素之間的關系，制定高效的綜合防控策略提供理論依據。本研究發現，病原菌菌絲的最適生長溫度為20℃，最適pH為6.0，光照對菌絲體的生長有一定的抑制作用。作為真菌，卵孢小奧德蘑菌絲與其蛛網病病原菌的適宜生長溫度和pH類似［5］，本研究還發現當溫度高于30℃時，卵孢小奧德蘑蛛網病病原菌菌絲生長速度極緩慢，甚至24?h后停止生長，可為今后生態防治該病害提供參考，在生產結束后建議對生產場所進行高溫悶棚及晾曬處理，降低病原菌基數，減少病害的發生。此外，現有生物學特性的研究主要針對葉枝葡霉Cladobotryum?mycophilum，樹狀枝葡霉C.dendroides與異形枝葡霉3個種［11，15］，它們對碳氮源的利用能力不同，其中異形枝葡霉的最適碳源為葡萄糖，最適氮源為蛋白胨［19］，本研究充分考慮實際生產中卵孢小奧德蘑對有機碳源、氮源的利用能力，在前人研究的基礎上測試了多種有機碳源、氮源對卵孢小奧德蘑蛛網病病原菌生長的影響，結果顯示，木屑為最適碳源，黃豆粉為最適氮源。黃慧等［20］對羊肚菌菌蓋干腐病病原菌長孢卵單隔孢霉Diploospora?longispora的培養特性研究發現，其最適氮源為蛋白胨與硝酸銨，最適碳源為葡萄糖與麥芽糖，菌絲生長及孢子萌發最適溫度為15～25℃，最適pH為6～10;當溫度超過30℃菌絲即停止生長，孢子無法萌發。病原菌的孢子數量及萌發情況直接影響病害的發生及其危害程度，因此對病原菌進行鑒定的同時，探索其孢子形成與萌發條件也非常關鍵，可以從調控孢子形成與萌發的角度為研究病害防治新方法提供理論依據。在卵孢小奧德蘑生產過程中，應綜合考慮寄主與病原菌的營養偏好，預防和控制蛛網病的發生。

蛛網病可危害雙孢菇、香菇、杏鮑菇、金針菇、卵孢小奧德蘑等多種食用菌，因此，在上述食用菌栽培過程中，應高度關注其病原菌的動態變化，堅持預防為主、綜合防治的原則，嚴格把控生產的各個環節，合理調控棚內環境條件，嚴防蛛網病的發生，降低生產損失。食用菌和蛛網病病原菌同屬真菌范疇，且二者對藥劑的敏感程度相似，要求化學防控藥劑具有較高的選擇性，但目前已登記可用于食用菌生產的防控投入品較少［21］，可用于食用菌病害防控的藥劑更有限［22］，苯菌酮在國外已登記且在防控食用菌蛛網病過程中效果良好［23］，因此，國內應加快苯菌酮藥劑的登記及蛛網病防控藥劑的研發工作。本文研究結果為食用菌蛛網病的科學防治奠定了理論基礎。

參考文獻

［1］?HAO?Yanjia，?ZHAO?Qi，?WANG?Shouxian，?et?al.?What?is?the?radicate?Oudemansiella?cultivated?in?China?［J］.?Phytotaxa，?2016，?286（1）：?112.

［2］?GAO?Zheng，?ZHANG?Chen，?LIU?Hui，?et?al.?The?characteristics?and?antioxidation?of?Oudemansiella?radicata?selenium?polysaccharides?on?lipopolysaccharideinduced?endotoxemic?mice?［J］.?International?Journal?of?Biological?Macromolecules，?2018，?116：?753764.

［3］?SELITRENNIKOFF?C?P.?Antifungal?proteins?［J］.?Applied?and?Environmental?Microbiology，?2001，?67（7）：?28832894.

［4］?杜娜，?胡慧萍，?謝意珍，?等.?卵孢小奧德蘑的研究進展［J］.?中國食用菌，?2020，?39（10）：?15.

［5］?崔玉進，?榮成博，?秦文韜，?等.?我國小奧德蘑屬食用菌研究現狀與展望［J］.?食藥用菌，?2021，?29（2）：?116122.

［6］?WHITE?T，?BRUNS?T，?LEE?S?H，?et?al.?Amplification?and?direct?sequencing?of?fungal?ribosomal?RNA?genes?for?phylogenetics?［M］∥INNIS?M?A，?GELFAND?D?H，?SNINSKY?J?J.?PCR?protocols：?a?guide?to?methods?and?applications.?London：?Academic?Press，?1990：?315322.

［7］?REHNER?S?A，?BUCKLEY?E.?A?Beauveria?phylogeny?inferred?from?nuclear?ITS?and?TEF1α?sequences：?evidence?for?cryptic?diversification?and?links?to?Cordyceps?teleomorphs?［J］.?Mycologia，?2005，?97（1）：?8498.

［8］?LIU?Y?J，?WHELEN?S，?HALL?B?D.?Phylogenetic?relationships?among?ascomycetes：?evidence?from?an?RNA?polymeraseⅡsubunit［J］.?Molecular?Biology?and?Evolution，?1999，?16：?17991808.

［9］?SWOFFORD?D，?SWOFFORD?D?L.?PAUP：?Phylogenetic?analysis?using?parsimony?（and?other?methods）?version?4.0?beat?［CP］.?2002.

［10］PLDMAA?K.?Tropical?species?of?Cladobotryum?and?Hypomyces?producing?red?pigments?［J］.?Studies?in?Mycology，?2011，?68：?134.

［11］曹滿堂，?李賓，?李宏，?等.?食用菌蛛網病研究進展［J］.?食用菌學報，?2020，?27（3）：?127136.

［12］ADIE?B，?GROGAN?H，?ARCHER?S，?et?al.?Temporal?and?spatial?dispersal?of?Cladobotryum?conidia?in?the?controlled?environment?of?a?mushroom?growing?room?［J］.?Applied?and?Environmental?Microbiology，?2006，?72（11）：?72127217.

［13］FLETCHER?J?T，?WHITE?P?F，?GAZE?R?H.?Mushroom?pest?and?disease?control－A?colour?handbook?［J］.?Mycologia，?2008，?83（5）：?683684.

［14］CARRASCO?J，?NAVARRO?M?J，?GEA?F?J.?Cobweb，?a?serious?pathology?in?mushroom?crops：?a?review?［J/OL］.?Spanish?Journal?of?Agricultural?Research，?2017，?15（2）：?e10R01.?DOI：?10.5424/sjar/201715210143.

［15］BACK?C?G，?LEE?C?Y，?SEO?G?S，?et?al.?First?occurrence?of?cobweb?disease?on?Hypsizigus?marmoreus?caused?by?Cladobotryum?varium?in?Korea?［J］.?Journal?of?the?Faculty?of?Agriculture?Kyushu?University，?2012，?57（2）：?373377.

［16］TIAN?Fenghua，?LI?Changtian，?LI?Yu.?First?report?of?Cladobotryum?varium?causing?cobweb?disease?of?Pleurotus?eryngii?var?tuoliensis?in?China?［J］.?Plant?Disease，?2017，?102（4）：?826.

［17］WU?Xiyu，?LI?Yu.?First?report?of?cobweb?disease?caused?by?Cladobotryum?mycophilum?on?cultivated?shiitake?mushroom?（Lentinula?edodes）?in?China?［J］.?Plant?Disease，?2019，?104（2）：?573.

［18］劉國麗，?李紅，?龔娜，?等.?基于形態特征和多基因聯合序列鑒定卵孢長根菇蛛網病病原菌［J］.?食用菌學報，?2020，?27（3）：?3036.

［19］張琪輝，?王威，?李成歡，?等.?斑玉蕈蛛網病的病原菌［J］.?菌物學報，?2015，?34（3）：?350356.

［20］黃慧，?張曉勇，?鄭歡，等.?羊肚菌菌蓋干腐病病原菌鑒定及培養特性研究［J］.?植物保護，?2022，?48（1）：?6672.

［21］秦文韜，?王守現，?榮成博，?等.?我國食用菌病害發生與防控概況［J］.?中國食用菌，?2020，?39（12）：17.

［22］GROGAN?H?M.?Fungicide?control?of?mushroom?cobweb?disease?caused?by?Cladobotryum?strains?with?different?benzimidazole?resistance?profiles?［J］.?Pest?Management?Science，?2010，?62（2）：?153161.

［23］FRANCISCO?J?G，?MARA?J?N，?MILA?S，?et?al.?Screening?and?evaluation?of?essential?oils?from?Mediterranean?aromatic?plants?against?the?mushroom?cobweb?disease，?Cladobotryum?mycophilum?［J］.?Agronomy，?2019，?9（10）：?656669.

（責任編輯：楊明麗）