番茄斑駁花葉病毒在廣東省的首次報道

湯亞飛 李正剛 佘小漫 于琳 藍國兵 李戰彪 何自福

摘要

番茄斑駁花葉病毒?（tomato?mottle?mosaic?virus，?ToMMV）是2013年發現的煙草花葉病毒屬一個新種，目前在多國（地區）有發生。本文采用小RNA深度測序及RTPCR檢測方法在廣東省廣州市南沙區辣椒疑似病樣中檢測到ToMMV，命名為番茄斑駁花葉病毒廣東分離物（ToMMVGD2020）。采用RTPCR分段擴增獲得了ToMMVGD2020的基因組全序列，該分離物基因組全長6?399?nt，包含4個開放閱讀框，分別編碼4個蛋白。序列相似性分析表明，ToMMVGD2020與已登錄GenBank的14個ToMMV分離物基因組序列相似性分別為99.0%～99.7%，其中與中國遼寧分離物ToMMVLN（GenBank登錄號：MN853592）的相似性最高（99.7%），與危害我國番茄、同屬煙草花葉病毒屬的番茄花葉病毒?（tomato?mosaic?virus，?ToMV）、番茄褐色皺果病毒?（tomato?brown?rugose?fruit?virus，?ToBRFV）代表分離物的相似性分別為84.6%和81.0%。系統進化分析表明，ToMMVGD2020與該病毒各分離物親緣關系均較近，與中國遼寧分離物親緣關系最近。利用ToMMV的PCR特異引物對廣東其他6個市采集的67份辣椒疑似病毒病樣品進行檢測，結果均為陰性，這說明ToMMV目前還是局部危害廣東省辣椒。本文是首次報道在廣東發現ToMMV，對監測ToMMV在我國的擴散具有重要意義。

關鍵詞

番茄斑駁花葉病毒;?辣椒;?分子鑒定;?病毒基因組序列

中圖分類號：

S?436.412.11

文獻標識碼：?A

DOI：?10.16688/j.zwbh.2022085

First?report?of?tomato?mottle?mosaic?virus?in?Guangdong?province?of?China

TANG?Yafei1，?LI?Zhenggang1，?SHE?Xiaoman1，?YU?Lin1，?LAN?Guobing1，?LI?Zhanbiao2*，?HE?Zifu1*

（1.?Plant?Protection?Research?Institute，?Guangdong?Academy?of?Agricultural?Sciences，?Guangdong?Provincial?Key

Laboratory?of?High?Technology?for?Plant?Protection，?Guangzhou?510640，?China;?2.?Plant?Protection?Research

Institute，?Guangxi?Academy?of?Agricultural?Sciences，?Guangxi?Key?Laboratory?for?Biology?of?Crop?Diseases?and

Insect?Pests，?Nanning?530007，China）

Abstract

Tomato?mottle?mosaic?virus?（ToMMV）?was?a?novel?species?belonging?to?Tobamovirus?genus?discovered?in?2013.?At?present，?ToMMV?has?occurred?in?many?countries?（regions）.?In?this?paper，?ToMMV?was?detected?in?disease?pepper?samples?collected?from?Nansha?district，?Guangzhou?city，?Guangdong?province，?using?small?RNA?deep?sequencing?and?RTPCR?techniques.?The?isolate?was?named?as?tomato?mottle?mosaic?virus?Guangdong?isolate?（ToMMVGD2020）.?The?whole?genome?sequence?of?ToMMVGD2020?was?obtained?by?RTPCR.?The?whole?genome?of?this?isolate?was?6?399?nt?in?length?and?contained?four?open?reading?frames，?encoding?four?proteins，?respectively.?The?whole?genome?sequence?of?ToMMVGD2020?shared?99.0%-99.7%?nt?identities?with?other?isolates?of?ToMMV?deposited?in?GenBank，?with?the?highest?nt?identity?to?the?isolate?Liaoning?（GenBank?accession?number：?MN853592）?at?99.7%，?shared?84.6%?and?81.0%?nt?identities?with?tomato?mosaic?virus?（ToMV）?and?tomato?brown?rugose?fruit?virus?（ToBRFV），?which?belonged?to?the?genus?Tobamovirus，?respectively.?Phylogenetic?analysis?showed?that?ToMMVGD2020?shared?more?relationship?with?each?of?ToMMV?isolates，?and?the?closest?relationship?with?Liaoning?isolate?of?ToMMV.?ToMMV?was?not?detected?in?67?diseased?pepper?samples?collected?from?other?six?cities?in?Guangdong?province.?The?result?indicated?that?ToMMV?infected?peppers?locally?in?Guangdong?province.?This?is?the?first?report?of?ToMMV?in?Guangdong?province，?which?is?great?significance?for?monitoring?the?spread?of?ToMMV?in?China.

Key?words

tomato?mottle?mosaic?virus;?pepper;?molecular?identification;?virus?genome?sequence

辣椒Capsicum?annuum?L.是一種重要蔬菜作物和調味品。據國家大宗蔬菜產業技術體系統計，近年來辣椒種植面積穩定在210萬hm2以上，占全國蔬菜總播種面積的9.28%，已成為種植面積最大的蔬菜作物［1］。病毒病是辣椒生產上的主要病害，在全球各辣椒產區普遍發生，嚴重影響辣椒的產量與品質。廣東省是我國辣椒生產大省之一，年種植面積約10萬hm2，其中冬種面積超過70%。病毒病每年給廣東辣椒生產造成不同程度的損失，危害辣椒的病毒種類眾多，世界各地已報道危害辣椒的病毒有70種以上，而我國發現至少有37種［2］。關于危害廣東辣椒的病毒種類，前人利用鑒別寄主、血清學及RTPCR等技術從廣東辣椒病樣中檢測到黃瓜花葉病毒（cucumber?mosaic?virus，?CMV）、煙草花葉病毒（tobacco?mosaic?virus，?TMV）、馬鈴薯Y病毒（potato?virus?Y，?PVY）等13種［36］。本團隊利用小RNA深度測序及RTPCR檢測技術，鑒定出侵染廣東辣椒的病毒有14種，分別為CMV、TMV、PVY、辣椒輕斑駁病毒（pepper?mild?mottle?virus，?PMMoV）、甜椒內源RNA病毒（bell?pepper?endornavirus，?BPEV）、煙草輕型綠花葉病毒（tobacco?mild?green?mosaic?virus，?TMGMV）、辣椒脈斑駁病毒（chilli?veinal?mottle?virus，?ChiVMV）、辣椒黃脈病毒1?（pepper?vein?yellow?virus?1，?PeVYV1）、甜椒斑駁病毒（pepper?veinal?mottle?virus，?PVMV）、辣椒環斑病毒（chilli?ringspot?virus，?ChiRSV）、辣椒黃脈病毒6?（pepper?vein?yellow?virus?6，?PeVYV6）、辣椒褪綠病毒（capsicum?chlorosis?virus，?CaCV）、蠶豆萎蔫病毒2號（broad?bean?wilt?virus?2，?BBWV2）、辣椒隱癥病毒1?（pepper?cryptic?virus?1，?PCV1），且復合侵染很普遍［7］。

番茄斑駁花葉病毒tomato?mottle?mosaic?virus（ToMMV）屬植物桿狀病毒科Virgaviridae煙草花葉病毒屬Tobamovirus成員，是一種（＋）ssRNA病毒，基因組全長約為6.4?kb，主要侵染番茄、辣椒、茄子等茄科作物，引起植株表現斑駁、花葉、生長緩慢等癥狀，嚴重影響產量和品質。ToMMV最先發現于墨西哥番茄上［8］，隨后在中國［910］、美國［11］、以色列［12］、西班牙［13］、巴西［14］等國家也相繼報道發現該病毒危害番茄、辣椒。在我國，最先發現危害云南的辣椒［9］，截至目前，海南、云南、湖南、遼寧、山東、河南、河北、陜西、西藏和內蒙古等?。ㄗ灾螀^）的番茄、辣椒、茄子等茄科作物已受到該病毒的危害，該病毒已在我國擴散和流行，極有可能成為危害茄科作物的主要病毒之一［1516］。目前，GenBank數據庫中已登錄有來自墨西哥、美國、巴西、荷蘭、西班牙和中國6個國家的14個ToMMV分離物的全基因組序列，包括來自中國海南和遼寧的2個番茄分離物、云南和西藏的2個辣椒分離物全基因組序列。

2020年，作者團隊對危害廣東省辣椒的病毒種類進行監測與鑒定，首次在廣州市南沙區辣椒病樣中檢測到ToMMV，進一步對ToMMV廣東分離物的全基因組進行了克隆與序列分析，同時對廣東省其他地區辣椒病樣進行分子檢測，以期監測該病毒并為該病毒病的防控提供科學依據。

1?材料與方法

1.1?材料

供試樣品：2019年-2021年，從廣東省辣椒產區采集田間表現花葉、斑駁、環斑、皺縮、褪綠等癥狀疑似病毒病的辣椒葉片樣品77份，其中湛江19份、茂名9份、韶關16份、肇慶8份、河源7份、佛山8份、廣州10份，置于-80℃冰箱保存待用。

主要試劑和儀器：植物RNA提取試劑RNAiso?Plus、反轉錄試劑盒（PrimeScript?Ⅱ?1st?Strand?cDNA?Synthesis?Kit）、Premix?TaqTM?（Ex?TaqTM?Version?2.0?plus?dye）和pMD?19T?Vector購自寶生物工程（大連）有限公司;瓊脂糖凝膠回收試劑盒（GeneJET?Gel?Extraction?Kit）購自美國Thermo賽默飛公司;大腸桿菌Escherichia?coli?T1化學感受態細胞購自北京全式金生物技術有限公司;T100TM?Thermal?cycler?PCR儀、Universal?HoodⅡ凝膠成像系統以及電泳儀均購自美國BIORAD公司;植物組織自動研磨儀MM400購自德國Retsch（萊馳）公司。

1.2?小RNA深度測序和分析

對2020年6月從廣東省廣州市南沙區萬頃沙鎮采集的10份辣椒病葉混合成2份樣品進行小RNA深度測序。采用TRIzol方法提取待測樣品總RNA，構建滿足Illumina平臺測序的小RNA文庫，通過Illumina?nextseq?500測序儀進行深度測序;應用Cutadapt［17］和質量分數預處理方法對原始數據進行去除接頭序列等預處理，然后對預處理后的數據采用SPAdes［18］拼接;利用BLAST程序將拼接序列與GenBank數據庫中的已知病毒基因組序列進行相似性比對，根據相似性結果初步判斷樣品中存在的病毒。上述深度測序和分析由生工生物工程（上海）股份有限公司完成。

1.3?RTPCR擴增驗證

根據小RNA深度測序獲得病毒序列，應用引物在線設計網站（http：∥primer3.ut.ee/）設計引物，檢測ToMMV的引物為ToMMVF：5′CACGCAGAACTACGCTGCGTTGTCCG3′，ToMMVR：

5′CCGGACAACTCAGGTGAATTAAAGTTC3′，擴增的目的片段大小為807?bp;檢測PVMV的引物為PVMVF：

5′GGTTTGGTGTATAGAAAATGGG3′，PVMVR：5′CAGACTCTATCAGGTGGTATAAC

3′，

擴增的目的片段大小為758?bp;檢測ToMV的引物為ToMVF：5′AAACCGCTTTTTAGCGGCAG3′，ToMVR：5′TATTAATGAGTTTATC

GATCTGTC3′，擴增的目的片段大小為322?bp;引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。以用于小RNA深度測序的單個病樣為模板，采用Trizol法分別提取10份待測辣椒病葉的總RNA，進一步用隨機引物（大連TaKaRa公司）逆轉錄合成cDNA，反應體系和具體方法按照試劑盒說明書操作，然后利用所設計的引物進行PCR擴增。PCR反應體系：反轉錄合成cDNA?1?μL，ExTaq?PCR?MIXER?25?μL，10?μmol/L的上、下游引物各2?μL，加滅菌水至總體積50?μL。反應程序為：94?℃?4?min;94?℃?30?s，55℃?30?s，72?℃?1?min，35個循環;72?℃?10?min。根據擴增產物的大小和產物直接測序結果確定病樣中的病毒種類。

1.4?病毒基因組全長的擴增與測定

通過對登錄在GenBank數據庫中14條ToMMV全基因組序列進行對比，設計4對覆蓋全基因組的引物（表1）。以小RNA深度測序與RTPCR相結合確定存在ToMMV的樣品cDNA為模板，利用所設計覆蓋ToMMV全基因組4對引物分別進行PCR擴增（圖1）。PCR反應體系同1.3，反應程序為：?94?℃?4?min;94?℃?30?s，55?℃?30?s，72?℃?2?min，35個循環;72?℃?10?min。PCR產物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測。應用瓊脂糖凝膠回收試劑盒回收PCR擴增產物，純化后連接到pMD19T載體，并轉化大腸桿菌T1感受態細胞。在含100?μg/mL?Amp、40?μL/mL?Xgal的LB固體培養基上37℃倒置培養過夜;每個平板隨機挑取3個陽性克隆送生工生物工程（上海）股份有限公司測序。

1.5?病毒基因組全長序列分析

利用DNAStar軟件的SeqMan對所獲得的基因序列進行拼接，獲得ToMMV基因組全長序列，利用BLAST程序在GenBank數據庫中進行序列相似性搜索，并從GenBank數據庫下載已報道的14個ToMMV分離物及危害我國番茄且同屬于煙草花葉病毒屬的番茄花葉病毒（tomato?mosaic?virus，?ToMV）、番茄褐色皺果病毒（tomato?brown?rugose?fruit?virus，?ToBRFV）代表分離物的全基因組序列，用DNAStar的MegAlign進行序列比較分析，采用MEGA?6.06的鄰接法（neighbor?joining，NJ）構建進化樹，bootstrap檢驗1?000次。

1.6?其他地區病樣的檢測

利用擴增ToMMV的引物ToMMVF/ToMMVR對2019年-2021年從廣東省其他地區采集的67份辣椒病樣進行RTPCR檢測，反應體系和反應程序同1.3。根據PCR檢測確定ToMMV在廣東地區的分布。

2?結果與分析

2.1?小RNA深度測序以及RTPCR驗證結果

2020年6月從廣東省廣州市南沙區采集田間表現花葉、斑駁、葉片皺縮、輕微叢生等典型病毒病癥狀的辣椒樣品10份（圖2），將其混合成2份樣品進行小RNA深度測序。結果顯示，樣品1共獲得17?474?690條reads，除雜后為2?921?707條reads，拼接獲得179個contigs;經與GenBank數據庫中報道的病毒序列進行比對，其中有14條比對到ToMMV，相似性均高于94%～100%，長度為144～1?183?bp，11條比對到ToMV，相似性在97%以上，長度為111～322?bp，6條比對到PVMV，相似性在97%以上，長度為549～4?261?bp。樣品2共獲得16?853?953條reads，除雜后為4?835?767條reads，拼接獲得468個contigs;經與GenBank數據庫中報道的病毒序列進行比對，其中有7條比對到ToMMV，相似性在99%，長度為153～2?529?bp，9條比對到PVMV，相似性在97%以上，長度為235～2?261?bp。測序結果初步表明，廣東廣州南沙辣椒病葉混合樣品中可能含有ToMMV、ToMV、PVMV?3種病毒。

2.2?RTPCR驗證小RNA深度測序結果

利用根據小RNA深度測序獲得病毒序列所設計的檢測ToMMV、ToMV和PVMV特異引物，對廣東省廣州市南沙區萬頃沙鎮2份混合樣品的10份單個樣品分別進行RTPCR檢測，結果顯示：ToMMV、ToMV和PVMV特異引物能從不同的單株病樣中擴增出預期大小的目的條帶（圖3），其中1份病樣為ToMV單獨侵染，1份病樣為ToMV和PVMV復合侵染，2份病樣為ToMMV和PVMV復合侵染，5份樣品為3種病毒復合侵染，還有1份病樣未檢測到這3種病毒。PCR產物測序結果表明，上述3個特異片段分別是對應病毒ToMMV、ToMV和PVMV的基因片段。因此，引起廣東省廣州市南沙區辣椒病毒病的病原至少有ToMMV、ToMV和PVMV?3種病毒，且以復合侵染為主。

2.3?ToMMV廣東分離物的基因組結構

以小RNA深度測序和RTPCR檢測驗證確定含有ToMMV的病樣總RNA為模板，利用設計覆蓋全基因組的4對引物進行分段PCR擴增，均能擴增出預期大小的目的片段（圖4），克隆、測序分析獲得大小分別為1?693、1?717、1?687、1?694?bp的4條片段，進一步通過拼接獲得ToMMV廣東分離物（ToMMVGD2020）基因組全序列大小為6?399?nt（GenBank登錄號：OK180812），包含4個開放閱讀框，分別編碼復制相關蛋白（76-3?426?nt）、復制酶蛋白（76-4?926?nt）、運動蛋白（4?910-5?716?nt）、外殼蛋白（5?719-6?198?nt）。

2.4?ToMMV廣東分離物的基因組全長序列分析

BLAST結果顯示，與ToMMVGD2020基因組全序列具有較高相似性的序列均為ToMMV分離物。采用MegAlign的Clustal?W方法比較結果表明（表2），ToMMVGD2020與登錄GenBank的ToMMV?14個分離物全基因組核苷酸序列相似性為99.0%～99.7%，其中與中國遼寧分離物ToMMVLN（GenBank登錄號：MN853592）的相似性最高，為99.7%，而與危害我國番茄、同屬煙草花葉病毒屬的ToMVSGZZ（GenBank登錄號：KY967221）、ToBRFVSD（GenBank登錄號：MT018320）的相似性分別為84.6%和81.0%。

對ToMMVGD2020、已登錄GenBank的14個ToMMV分離物、ToMVSGZZ和ToBRFVSD的全基因組序列構建系統進化樹，結果顯示（圖5），ToMMVGD2020與來自墨西哥、中國、美國、巴西、荷蘭、西班牙6國的14個ToMMV分離物聚集在一個大分支上，其中與來自中國遼寧的LN分離物聚集在一個小分支，二者親緣關系最近，而與危害我國番茄的同屬病毒ToMVSGZZ和ToBRFVSD親緣關系較遠。

2.5?廣東其他地區辣椒疑似病毒病樣品檢測結果

利用ToMMV的檢測引物ToMMVF/ToMMVR對2019年-2021年從廣東省湛江、茂名、韶關、肇慶、河源、佛山6個市采集的67份辣椒病樣進行RTPCR擴增，均未擴增出目的片段，該結果初步表明ToMMV目前是在局部地區危害廣東省辣椒。

3?結論與討論

本文應用小RNA深度測序與RTPCR檢測相結合的方法在廣東辣椒病樣中檢測到ToMMV，該病毒分離物基因組全長為?6?399?nt，與國際上已報道的14個ToMMV分離物基因組核苷酸序列相似性均超過99.0%，但在廣東7個市辣椒產區病樣中僅廣州市南沙區檢測發現該病毒。這是在廣東首次發現該病毒。

ToMMV是2013年發現的煙草花葉病毒屬一個新種，目前已在多國有發生和分布。在我國，2014年首次在辣椒上檢測到該病毒，目前在我國至少10個省（自治區）已有發生，可見該病毒擴散速度快，存在發生流行的趨勢［16］。2013年-2016年，本團隊利用小RNA深度測序技術對侵染危害廣東辣椒的病毒進行調查與鑒定，從廣東各地采集的辣椒病樣中檢測到14種病毒，但未檢測到ToMMV［6］。此后，本團隊持續監測辣椒病毒病發生動態。2020年，在廣州市南沙區辣椒產區病樣中檢測到ToMMV，說明ToMMV已擴散傳播到廣東省，并危害辣椒。

本文采用分段擴增、克隆獲得了ToMMV廣東分離物的基因組全長序列，該序列與國際上已報道的ToMMV各分離物間相似性均在99.0%以上;同時，ToMMV各分離物基因組序列相似性也均在99.0%以上，說明該病毒高度保守。這對開展抗病資源篩選與抗病品種選育十分有利。

ToMMV可通過汁液摩擦傳播，也可通過種子帶毒傳播［19］。該病毒自然條件下可侵染番茄、辣椒等茄科作物;人工接種條件下除茄科作物外，還可以侵染葫蘆科、豆科、十字花科等多種作物，且致病性比同屬的TMV更強，接種植株癥狀更嚴重［20］，而且ToMMV比ToMV的寄主范圍更廣，侵染性更強［21］?？梢姡琓oMMV的潛在危害性很大。2014年首次在云南辣椒上檢測到該病毒以來，ToMMV目前已在我國多個?。ㄗ灾螀^）發生，呈現流行與擴散的趨勢，很有可能將成為危害我國蔬菜作物的主要病毒。本研究僅在廣東省廣州市南沙區辣椒上檢測到ToMMV，至于其是否危害其他作物及擴散動態，還有待于進一步監測。

參考文獻

［1］?鄒學校，?馬艷青，?戴雄澤，?等.?辣椒在中國的傳播與產業發展［J］.?園藝學報，?2020，?47（9）：17151726.

［2］?劉勇，?李凡，?李月月，?等.?侵染我國主要蔬菜作物的病毒種類、分布與發生趨勢［J］.?中國農業科學，?2019，52（2）：?239261.

［3］?饒雪琴，?藍翠鈺.?廣州市郊及其鄰近地區辣椒CMV和TMV的鑒定［J］.?江西農業大學學報（自然科學），?2003，25（4）：558561.

［4］?張竹青.?辣椒病毒病研究［D］.?長沙：?湖南農業大學，?2009.

［5］?湯亞飛，?何自福.?廣東辣椒上首次檢測到西瓜銀斑駁病毒［J］.?園藝學報，?2015，?42（11）：22612266.

［6］?湯亞飛，?裴凡，?李正剛，?等.?基于小RNA?深度測序技術鑒定侵染廣東辣椒的病毒種類［J］.?中國農業科學，?2019，52（13）：?22592267.

［7］?姚玉榮，?陳國華，?馮蘭香，?等.?北運蔬菜基地辣椒病毒病病原種類的分子檢測［J］.?中國蔬菜，?2013（10）：8489.

［8］?LI?Rugang，?GAO?Shan，?FEI?Zhangjun，?et?al.?Complete?genome?sequence?of?a?new?tobamovirus?naturally?infecting?tomatoes?in?Mexico?［J/OL］.?Genome?Announcements，?2013，1（5）：?e0079413.?DOI：?10.1128/genomeA.0079413.

［9］?LI?Yueyue，?WANG?Cuiling，?XIANG?Dong，?et?al.?First?report?of?tomato?mottle?mosaic?virus?infection?of?pepper?in?China?［J］.?Plant?Disease，?2014，?98（10）：?1447.

［10］ZHAN?Binhui，?CAO?Ning，?WANG?Kaina，?et?al.?Detection?and?characterization?of?an?isolate?of?tomato?mottle?mosaic?virus?infecting?tomato?in?China?［J］.?Journal?of?Integrative?Agriculture，?2018，17（5）：12071212.

［11］FILLMER?K，?ADKINS?S，?PONGAM?P，?et?al.?Complete?genome?sequence?of?a?tomato?mottle?mosaic?virus?isolate?from?the?United?States?［J/OL］.?Genome?Announcements，?2015，3（2）：?e0016715.?DOI：?10.1128/genomeA.0016715.

［12］TURINA?M，?GERAATS?B?P?J，?CIUFFO?M.?First?report?of?tomato?mottle?mosaic?virus?in?tomato?crops?in?Israel?［J］.?New?Disease?Reports，?2016，33：1.

［13］AMBROS?S，?MARTINEZ?F，?IVARS?P，?et?al.?Molecular?and?biological?characterization?of?an?isolate?of?tomato?mottle?mosaic?virus?（ToMMV）?infecting?tomato?and?other?experimental?hosts?in?eastern?Spain?［J］.?European?Journal?of?Plant?Pathology，?2017，?149（2）：?261268.

［14］NAGAI?A，?DUARTE?L?M?L，?CHAVES?A?L?RA，?et?al.?First?complete?genome?sequence?of?an?isolate?of?tomato?mottle?mosaic?virus?infecting?plants?of?Solanum?lycopersicumin?South?America?［J/OL］.?Genome?Announcements，?2018，6（19）：?e0042718.?DOI：10.1128/genomeA.0042718.

［15］劉曉璇，?李威霖，?張彤，?等.番茄斑駁花葉病毒海南分離物全基因組序列分析［J］.?熱帶作物學報，?2019，?40（1）：?139144.

［16］李月月，?周文鵬，?路思倩，?等.?番茄斑駁花葉病毒在我國茄科作物上的發生及生物學特性［J］.?中國農業科學，?2020，53（3）：539550.

［17］MARTIN?M.?Cutadapt?removes?adapter?sequences?from?highthroughput?sequencing?reads?［J］.?EMBnet?Journal，?2011，17（1）：1012.

［18］BANKEVICH?A，?NURK?S，?ANTIPOV?D，?et?al.?SPAdes：?a?new?genome?assembly?algorithm?and?its?applications?to?singlecell?sequencing?［J］.?Journal?of?Computational?Biology，?2012，?19（5）：455477.

［19］LOVELOCK?D?A，?KINOTI?W?M，?BOTTCHER?C，?et?al.?Tomato?mottle?mosaic?virus?intercepted?by?Australian?biosecurity?in?Capsicum?annuum?seed?［J］.?Australasian?Plant?Disease?Notes，?2020，15（1）：?8.

［20］LI?Yueyue，?WANG?Yang，?HU?J，?et?al.?The?complete?genome?sequence，?occurrence?and?host?range?of?tomato?mottle?mosaic?virus?Chinese?isolate?［J］.?Virology?Journal，?2017，14：?15.

［21］SUI?Xuelian，?ZHENG?Hengyi，?LI?Rugang，?et?al.?Molecular?and?biological?characterization?of?tomato?mottle?mosaic?virus?and?development?of?RTPCR?detection?［J］.?Plant?Disease，?2017，101（5）：?704711.

（責任編輯：田?喆）