刀孢蠟蚧菌油劑對蘋果黃蚜的室內(nèi)毒力測定及田間藥效評價

邵云飛 譚家玙 李成軍 劉蘇 李世廣 朱丞宇 江連強 張鑫 李茂業(yè)

摘要

蘋果黃蚜Aphis?citricola是為害我國蘋果、海棠和紅葉石楠等果樹和觀賞植物的重要害蟲，已對多種化學農(nóng)藥產(chǎn)生抗性。本研究測定了本實驗室研發(fā)的刀孢蠟蚧菌Lecanicillium?psalliotae?YJ007油劑對蘋果黃蚜的室內(nèi)毒力及田間藥效。結(jié)果表明，YJ007油劑500倍稀釋液（4.0×105孢子/mL）處理2、3齡和4齡若蟲，藥后7?d的累計校正死亡率分別為85.17%、92.94%和97.04%。4齡若蟲在處理后2?d行動遲緩，處理后3?d，足和頭部出現(xiàn)白色菌絲且大量幼蟲死亡，最后菌絲布滿試蟲體表并產(chǎn)出大量孢子。YJ007油劑500倍稀釋液對蘋果黃蚜7?d的田間校正防治效果為86.78%。因此，YJ007油劑在蘋果黃蚜生物防治中具有極大推廣應(yīng)用價值。

關(guān)鍵詞

蘋果黃蚜;?刀孢蠟蚧菌;?油劑;?生物防治

中圖分類號：

S?482.39

文獻標識碼：?B

DOI：?10.16688/j.zwbh.2022118

Laboratory?toxicity?test?and?field?efficacy?evaluation?of?an?oil?formulation?of?Lecanicillium?psalliotae?against?Aphis?citricola

SHAO?Yunfei1#，?TAN?Jiayu1#，?LI?Chengjun2*，?LIU?Su1，?LI?Shiguang1，?ZHU?Chengyu1，JIANG?Lianqiang3，?ZHANG?Xin4，?LI?Maoye1*

（1.?Key?Laboratory?for?Biology?and?Sustainable?Management?of?Plant?Diseases?and?Pests?of?Anhui?Higher?Education

Institutes，?College?of?Plant?Protection，?Anhui?Agricultural?University，?Hefei?230036，?China;?2.?Key?Laboratory?for

Green?Preservation?and?Control?of?Tobacco?Diseases?and?Pests?in?Huanghuai?Growing?Area，?Tobacco?Research

Institute，?Henan?Academy?of?Agricultural?Sciences，?Xuchang?461000，?China;?3.?Liangshan?Branch?of?Sichuan

Tobacco?Corporation，?Xichang?615000，?China;?4.?Jixi?Bureau?of?Agriculture，?Rural?Affairs?and?Water?Resources，

Anhui?Province，?Xuancheng?245399，?China）

Abstract

In?China，?the?spiraea?aphid?（Aphis?citricola）?is?an?important?insect?pest?of?fruit?trees?and?ornamental?plants，?such?as?apple，?crabapple?and?photinia.?The?insect?pest?has?developed?resistance?to?various?chemical?insecticides.?In?this?paper，?the?laboratory?toxicity?and?field?efficacy?of?YJ007，?an?oil?formulation?of?Lecanicillium?psalliotae?developed?in?our?laboratory，?against?A.citricola?was?investigated.?The?results?showed?that?the?cumulative?corrected?mortality?of?the?2nd，?3rd，?and?4thinstar?nymphs?treated?with?500fold?YJ007?dilution?（4.0×105conidia/mL）?were?85.17%，?92.94%，?and?97.04%?seven?days?after?treatment，?respectively.?The?movement?of?tested?the?4thinstar?nymphs?was?slowed?down?two?days?after?spraying?with?YJ007?oil?formulation，?then?white?hyphae?appeared?in?the?foot?and?head?of?the?nymphs?three?days?after?spraying，?and?a?large?number?of?treated?aphids?died.?Finally，?the?hyphae?covered?the?surface?of?the?insects?and?produced?a?great?number?of?spores.?In?the?field?experiment，?the?corrected?control?efficacy?of?YJ007?oil?formulation?on?aphids?was?86.78%?seven?days?after?treatment.?Taken?together，?YJ007?oil?formulation?has?a?great?application?value?for?the?biological?control?of?A.citricola.

Key?words

Aphis?citricola;?Lecanicillium?psalliotae;?oil?formulation;?biological?control

蘋果黃蚜Aphis?citricola屬半翅目Hemiptera蚜科Aphididae，主要以成蟲、若蟲在蘋果、海棠、紅葉石楠Photinia?serratifolia等薔薇科植物的新梢嫩葉背面聚集，刺吸葉片汁液［12］。被蘋果黃蚜取食為害的葉片向背面卷曲皺縮，植株的生長受到抑制［34］，受害嚴重時植株死亡［56］。

蘋果黃蚜具有繁殖力強、世代短等特點。化學防治是當前控制蘋果黃蚜為害的主要方法［7］。由于長時間高劑量地使用化學農(nóng)藥，蘋果黃蚜對常用殺蟲劑產(chǎn)生了不同程度的抗性［89］。隨著人們對綠色、健康食品需求的增加，蘋果黃蚜的防治策略需要逐步轉(zhuǎn)變?yōu)橐陨锓乐螢楹诵牡木C合治理。研究者對昆蟲病原真菌防治害蟲進行了深入研究，并將昆蟲病原真菌應(yīng)用于多種刺吸式口器害蟲的防治中［1011］。例如利用球孢白僵菌Beauveria?bassiana防治煙粉虱Bemisia?tabaci和桃蚜Myzus?persicae［1214］，利用長孢蠟蚧菌Lecanicillium?longisporum防治豌豆蚜Acyrthosiphon?pisum［15］，利用黃綠綠僵菌Metarhizium?flavoviride防治煙粉虱［16］。雖然昆蟲病原真菌對害蟲具有較高的致病力和較強的專一性，但是真菌在田間使用時容易受到光照、溫度、濕度等因素限制，使其防治效果無法得到保證［1718］。

將真菌孢子與助劑結(jié)合能夠提高其穩(wěn)定性，并且能夠延長菌劑的持效期［19］。真菌分生孢子在油類物質(zhì)中能夠較長時間保持活性，因此油劑是能夠較長時間維持微生物活性的劑型種類［20］。此外，油類介質(zhì)能夠提高真菌孢子的黏著度，增加孢子在昆蟲體表的附著量。研究表明，金龜子綠僵菌M.anisopliae油劑對蕭氏松莖象Hylobitelus?xiaoi和李氏大足蝗Aeropus?licenti具有高毒力［2122］，球孢白僵菌油劑對馬尾松毛蟲Dendrolimus?punctatus具有顯著防效［23］。

本課題組前期篩選獲得了一株導(dǎo)致桃蚜7?d累計死亡率高達94.17%的刀孢蠟蚧菌Lecanicillium?psalliotae?HFLP006菌株［24］，對該菌株的培養(yǎng)條件進行了優(yōu)化［25］，并基于該菌株初步研制了YJ007油劑（未發(fā)表）。本研究評價了YJ007油劑對蘋果黃蚜不同齡期若蟲室內(nèi)毒力以及田間防效，分析了真菌孢子濃度與油劑致病力的關(guān)系，并觀察了YJ007油劑對蘋果黃蚜的侵染過程，以期為應(yīng)用YJ007油劑防治蘋果黃蚜提供理論基礎(chǔ)。

1?材料與方法

1.1?材料

供試YJ007油劑由本實驗室研制，主要成分包括HFLP006菌株［24］與抗氧化劑、紫外保護劑、穩(wěn)定劑、乳化劑等助劑。

蘋果黃蚜采自安徽省合肥市蜀山區(qū)安徽農(nóng)業(yè)大學農(nóng)萃園。試蟲在人工氣候培養(yǎng)室內(nèi)的紅葉石楠上培養(yǎng)繁殖10代以上。為獲得相同齡期和體態(tài)大小一致的蘋果黃蚜若蟲，用軟毛刷輕輕挑取大量成蚜移到新鮮紅葉石楠嫩葉背面，6?h后成蚜孤雌生殖產(chǎn)生若蚜，將成蚜移回原先所在植株，將附著若蚜的紅葉石楠放置于25℃恒溫箱中，待蘋果黃蚜發(fā)育至相應(yīng)齡期后，用軟毛刷挑取2、3、4齡若蟲進行試驗。

1.2?方法

1.2.1?室內(nèi)毒力測定

采用噴霧法［26］進行室內(nèi)毒力測定。在預(yù)試驗的基礎(chǔ)上，將YJ007油劑分別用無菌水稀釋500倍（4.0×105孢子/mL）、800倍（2.5×105孢子/mL）和1?000倍（2.0×105孢子/mL）。采集試驗田中沒有噴施過化學藥劑的新鮮紅葉石楠葉片，用75%乙醇消毒，無菌水沖洗后自然風干。使用濕潤的滅菌脫脂棉球包住葉柄基部，然后將葉片背面朝上放置于鋪有濕潤濾紙的90?mm培養(yǎng)皿內(nèi)。用毛筆尖輕輕地把2、3、4齡若蟲轉(zhuǎn)移到紅葉石楠葉片背面，每個培養(yǎng)皿30頭，隨后使用小型噴壺噴霧，每次施藥量控制為1?mL，施藥完成后用透明保鮮膜封好，用昆蟲針在保鮮膜上扎20個孔。每處理3次重復(fù)，以無菌水為空白對照。處理后將培養(yǎng)皿置于溫度（25±1）℃，相對濕度（85±3）%，光周期?L∥D=16?h∥8?h的人工氣候箱中。每天記錄死亡蟲數(shù)，連續(xù)觀察7?d，用毛筆尖輕觸蟲體，足、觸角均無任何反應(yīng)則計為死亡，將死蟲取出后保濕培養(yǎng)，使用體視顯微鏡（SZX12型，北京京百卓顯科技有限公司）觀察，若試蟲體表長出菌絲，確定是真菌侵染致死。

1.2.2?田間藥效試驗

田間藥效試驗在安徽省合肥市安徽農(nóng)業(yè)大學農(nóng)萃園紅葉石楠種植區(qū)進行。試驗田地勢平坦，土壤肥力中等，試驗前30?d未噴施過任何藥劑。試驗共設(shè)置4個處理，分別為YJ007?油劑500倍稀釋液（4.0×105孢子/mL）、800倍稀釋液（2.5×105孢子/mL）、1?000倍稀釋液（2.0×105孢子/mL）以及清水對照。每處理設(shè)3次重復(fù)，共12個小區(qū)。每小區(qū)面積約4?m2，種有32株紅葉石楠。各試驗小區(qū)之間相隔約6?m。采用16?L背負式手動噴霧器進行整株噴霧處理，葉片正反面均勻噴霧。施藥之前，每小區(qū)5點取樣，每點固定3株，每株固定3片葉，調(diào)查蘋果黃蚜蟲口基數(shù)。施藥后，連續(xù)7?d調(diào)查各處理活蟲數(shù)，計算蟲口減退率以及校正防治效果。

1.3?數(shù)據(jù)分析

用WPS?Office?2019軟件整理數(shù)據(jù)并計算校正死亡率、蟲口減退率和校正防治效果。使用DPS?7.05軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，計算毒力回歸方程、致死中時間（LT50）以及95%置信區(qū)間，并采用Duncan氏新復(fù)極差法進行差異顯著性分析。

校正死亡率=（處理組死亡率－對照組死亡率）/（1－對照組死亡率）×100%;

蟲口減退率＝（藥前蟲口基數(shù)－藥后活蟲數(shù)）/藥前蟲口基數(shù)×100%;

校正防治效果＝［（處理蟲口減退率－空白對照蟲口減退率）/（1－空白對照蟲口減退率）］×100%。

2?結(jié)果與分析

2.1?刀孢蠟蚧菌YJ007油劑對蘋果黃蚜的室內(nèi)毒力

YJ007油劑對3個齡期蘋果黃蚜的毒力均隨著油劑濃度增加以及用藥時間的延長而提高。不同濃度的YJ007油劑處理后，3個齡期若蚜7?d累計校正死亡率存在顯著差異（2齡：F2，6=12.56，?P<0.05;?3齡：F2，6=14.87，?P<0.05;?4齡：F2，6=10.00，?P<0.05）。其中YJ007油劑對4齡若蟲致病力最高，其500、800倍和1?000倍稀釋液處理后7?d，4齡若蟲的累計校正死亡率分別為97.04%、91.17%和83.98%，LT50分別為3.01、3.30?d和3.62?d（表1）;?3齡若蟲7?d的累計校正死亡率均在81.64%以上，LT50最小為3.18?d（表1）;對2齡若蟲致病力相對較低，7?d的累計校正死亡率在69.00%以上，LT50最小為3.68?d（表1）。?YJ007油劑對3個齡期蘋果黃蚜若蟲的室內(nèi)毒力排序為：4齡若蟲＞3齡若蟲＞2齡若蟲。

利用體視顯微鏡觀察YJ007油劑對蘋果黃蚜4齡若蟲的侵染過程，結(jié)果顯示，500倍稀釋液處理后2?d，試蟲行動遲緩，胸部逐漸變?yōu)槌嗪稚共砍霈F(xiàn)褐色斑點，處理后3?d，試蟲足和頭部出現(xiàn)少量白色菌絲，胸部和腹部變?yōu)楹诤稚藭r蚜蟲大量死亡，之后白色菌絲布滿蟲體并產(chǎn)生大量孢子（圖1）。

2.2?刀孢蠟蚧菌油劑對蘋果黃蚜的田間防治效果

田間藥效試驗結(jié)果（表2）表明，YJ007油劑500、800倍和1?000倍稀釋液對田間蘋果黃蚜均具有一定的防治效果，3?d校正防治效果均可達到31%以上，5?d均可達到59%以上。不同濃度的YJ007對田間蘋果黃蚜7?d校正防治效果存在顯著差異（F2，6=41.72，?P<0.05），其中500倍稀釋液（4.0×105孢子/mL）的校正防效（86.78%）顯著高于其他兩個處理，且致死速率最快;800倍稀釋液（2.5×105孢子/mL）校正防效為80.00%;1?000倍稀釋液（2.0×105孢子/mL）時田間校正防效最差，僅為64.10%，致死速率最慢。

3?結(jié)論與討論

本研究評價了刀孢蠟蚧菌YJ007油劑對蘋果黃蚜的防治效果。YJ007是基于本實驗室分離的刀孢蠟蚧菌HFLP006菌株而研制的真菌制劑。HFLP006菌株分離于自然感病的桃蚜僵蟲，對桃蚜具有很強致病力且易于大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)［25］，適合開發(fā)為真菌殺蟲劑。真菌殺蟲劑能夠提高真菌孢子對害蟲的致病力，當前已有多種真菌殺蟲劑被報道。徐文靜等［27］研究了球孢白僵菌可濕性粉劑防治亞洲玉米螟Ostrinia?furnacalis。武海峰等［28］論述了白僵菌懸乳劑研制及其對玉米螟的防治效果。農(nóng)向群等［29］綜述了綠僵菌屬Metarhizium真菌可濕性粉劑、顆粒劑、粉劑等劑型的主要特點。目前，關(guān)于刀孢蠟蚧菌劑型尚未見報道。另一方面，YJ007對其他種類蚜蟲是否具有防治效果，也需要進一步研究。

當前真菌殺蟲劑的劑型有水分散粒劑、粉劑、顆粒劑、油劑等。其中，油劑不僅能改善真菌孢子對自然界不利環(huán)境的適應(yīng)性，而且還有利于孢子吸附于昆蟲體表的疏水基質(zhì)，增加對靶標害蟲的毒力［21］，因而將真菌制成油劑更具有開發(fā)應(yīng)用價值。近年來，真菌油劑被廣泛應(yīng)用于防治各類害蟲。雷仲仁等［30］利用綠僵菌油劑防治東亞飛蝗Locusta?migratoria?manilensis的田間試驗表明，綠僵菌油劑處理后6～9?d飛蝗數(shù)量顯著減少，第18天蟲口減退率可達81.1%。谷祖敏等［18］優(yōu)化了蠟蚧輪枝菌Lecanicillium?lecanii?VL17油劑配方，其在室內(nèi)對桃蚜和溫室白粉虱Trialeurodes?vaporariorum的致死率超過85%。羅成等［31］研究了球孢白僵菌油劑對斜紋夜蛾Spodoptera?litura的防效，發(fā)現(xiàn)施用后

7?d斜紋夜蛾2齡幼蟲累計死亡率達76.7%。本試驗結(jié)果表明，YJ007油劑對蘋果黃蚜具有較高毒力，其500倍稀釋液（4.0×105孢子/mL）對蘋果黃蚜4齡若蟲室內(nèi)7?d累計校正死亡率達97.04%，LT50為3.01?d，而2齡和3齡若蟲7?d累計校正死亡率反而較低，分別為85.17%和92.94%（表1）。這

可能是由于4齡若蟲蛻皮時間間隔較長，在蛻皮之前真菌分生孢子已經(jīng)侵入試蟲體腔。而2齡若蟲蛻皮時間間隔較短，真菌分生孢子在侵入前即隨著試蟲蛻皮而脫離蟲體。劉銀泉等［32］也發(fā)現(xiàn)桃蚜若蚜蛻皮可有效擺脫球孢白僵菌分生孢子的侵染。本試驗觀察到Y(jié)J007油劑處理蘋果黃蚜后2?d，4齡若蟲行動遲緩，3?d后足、頭部長出少量菌絲并且腹部出現(xiàn)褐色斑點（圖1）。這可能是由于真菌菌絲首先侵入昆蟲足和頭部，菌絲逐漸向外生長的同時侵入試蟲體表并在體內(nèi)增殖所致。隨著真菌在蟲體內(nèi)的繁殖，蟲體逐漸變褐并皺縮干癟，體表長出大量菌絲并產(chǎn)生孢子（圖1），這可能是真菌大量增殖并快速吸收試蟲體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)而產(chǎn)生的現(xiàn)象。

綜上所述，基于刀孢蠟蚧菌HFLP006菌株制成的YJ007油劑在室內(nèi)和田間對蘋果黃蚜均有致病力強、作用時間短等優(yōu)勢，具有極大的田間推廣應(yīng)用潛力。需要指出的是，本研究只探討了YJ007油劑對蘋果黃蚜的防治效果，未研究該油劑對田間

害蟲的持續(xù)控制效果。在后續(xù)試驗中，我們將對此開展深入研究，為利用YJ007油劑防治蘋果黃蚜奠定基礎(chǔ)。

參考文獻

［1］?LI?Litao，?HE?Limin，?YU?Lichen，?et?al.?Preliminary?study?on?the?potential?of?Pyemotes?zhonghuajia?（Acari：?Pyemotidae）?in?biological?control?of?Aphis?citricola?（Hemiptera：?Aphididae）?［J］.?Systematic?and?Applied?Acarology，?2019，?24（6）：?11161120.

［2］?封云濤，?郭曉君，?李婭，?等.?3種新型殺蟲劑對蘋果黃蚜的毒力效果評價［J］.?植物保護，?2022，?48（1）：?334337.

［3］?SONG?Beizhou，?TANG?Guangbo，?SANG?Xusheng，?et?al.?Intercropping?with?aromatic?plants?hindered?the?occurrence?of?Aphis?citricola?in?an?apple?orchard?system?by?shifting?predatorprey?abundances?［J］.?Biocontrol?Science?and?Technology，?2013，?23（4）：?381395.

［4］?宮慶濤，?武海斌，?郭騰達，?等.?蘋果黃蚜防治藥劑篩選及天敵安全性評價［J］.?農(nóng)藥，?2019，?58（1）：?7072.

［5］?YAN?He，?XIE?Na，?ZHONG?Chenquan，?et?al.?Aphicidal?activities?of?Amaryllidaceae?alkaloids?from?bulbs?of?Lycoris?radiata?against?Aphis?citricola?［J］.?Industrial?Crops?and?Products，?2018，?123：?372378.

［6］?李振西，?李子豪，?劉政源，?等.?金合歡醇和煙堿對蘋果黃蚜聯(lián)合毒殺作用［J］.?中國生物防治學報，?2019，?35（1）：?3743.

［7］?封云濤，?郭曉君，?李婭，?等.?三種助劑在減量化防治蘋果黃蚜中的應(yīng)用研究［J］.?果樹學報，?2020，?37（3）：?397403.

［8］?LI?Yong，?XU?Zhifeng，?SHI?Li，?et?al.?Insecticide?resistance?monitoring?and?metabolic?mechanism?study?of?the?green?peach?aphid，?Myzus?persicae?（Sulzer）?（Hemiptera：?Aphididae），?in?Chongqing，?China?［J］.?Pesticide?Biochemistry?and?Physiology，?2016，?132：?2128.

［9］?封云濤，?李婭，?郭曉君，?等.?不同地區(qū)蘋果黃蚜對3種常用藥劑的敏感性［J］.?中國果樹，?2021（6）：?2426.

［10］王艷秋，?周婷婷，?林華峰，?等.?球孢白僵菌Bb84對Q型煙粉虱的時間劑量死亡率模型分析［J］.?農(nóng)藥學學報，?2016，?18（4）：?459464.

［11］MASCARIN?G?M，?KOBORI?N?N，?QUINTELA?E?D，?et?al.?The?virulence?of?entomopathogenic?fungi?against?Bemisia?tabaci?biotype?B?（Hemiptera：?Aleyrodidae）?and?their?conidial?production?using?solid?substrate?fermentation?［J］.?Biological?Control，?2013，?66（3）：?209218.

［12］ISLAM?M?T，?CASTLE?S?J，?REN?S?X.?Compatibility?of?the?insect?pathogenic?fungus?Beauveria?bassiana?with?neem?against?sweetpotato?whitefly，?Bemisia?tabaci，?on?eggplant?［J］.?Entomologia?Experimentalis?et?Applicata，?2010，?134（1）：?2834.

［13］KEERIO?A?U，?NAZIR?T，?ABDULLE?Y?A，?et?al.?In?vitro?pathogenicity?of?the?fungi?Beauveria?bassiana?and?Lecanicillium?lecanii?at?different?temperatures?against?the?whitefly，?Bemisia?tabaci?（Genn.）?（Hemiptera：?Aleyrodidae）?［J］.?Egyptian?Journal?of?Biological?Pest?Control，?2020，?30（1）：?479485.

［14］田佳，?汝冰璐，?王穎，?等.?一株對桃蚜有高致病性球孢白僵菌的分離、篩選與鑒定［J］.?植物保護學報，?2018，?45（3）：?606613.

［15］張挺峰，?王睿，?劉長仲.?一株侵染豌豆蚜的昆蟲病原真菌的分離及鑒定［J］.?昆蟲學報，?2020，?63（1）：?2228.

［16］李茂業(yè)，?陳德鑫，?林華峰，?等.?黃綠綠僵菌懸乳劑與低劑量阿維菌素對Q型煙粉虱的聯(lián)合防治作用［J］.?中國農(nóng)業(yè)科學，?2016，?49（13）：?25532560.

［17］王海鴻，?劉勝，?王帥宇，?等.?150億孢子/g球孢白僵菌可濕性粉劑的研發(fā)及對西花薊馬的防治應(yīng)用［J］.?中國生物防治學報，?2020，?36（6）：?858861.