多管發酵法在生活飲用水微生物檢驗中的應用效果

周偉偉，高 敏，張 寧，劉 迎

（陽谷縣疾病預防控制中心，山東聊城 252300）

水是生命的本源，在人們的日常生活中具有無可替代的作用[1]。但近年來隨著社會經濟的發展，工農業、生活污染越來越嚴重，導致水質受到了一定程度的影響[2]。因此，對生活飲用水的水質進行檢驗非常必要。微生物檢驗是檢驗水質的重要手段，在認真遵照相關標準進行檢驗操作的前提下，可較為準確地檢驗出水中的菌落數量[3-4]。相關研究報道也指出，微生物檢驗能對生活飲用水的性質進行查驗，可及時找到病原菌，且有利于了解生物性有害物質的污染情況，能為水質的監測提供重要的參考依據，對提高水質有積極作用[5-7]。但不同檢驗方法的檢驗結果存在一定的差異性，因此探討一種更為有效的檢驗方法非常有必要。鑒于此，對2021 年4 個季度的800 份生活飲用水樣本進行微生物檢驗，并對比多管發酵法與濾膜法的檢驗結果。

1 材料與方法

1.1 樣品

采集2021 年4 個季度的生活飲用水樣本800 份，對樣本進行微生物檢驗，根據不同檢驗方法將樣本分為多管發酵組、濾膜組，每組樣本400 份。兩組樣本均包括豐水期、枯水期的生活飲用水樣本各200份。同時為了確保樣本的均衡性，采集點的選擇采用隨機抽樣法。所有樣本采集后，均放在一次性無菌袋內儲存，并盡快送至實驗室進行檢驗。

1.2 儀器與試劑

培養箱（天津市萊玻特瑞儀器設備有限公司）；過濾儀（上海山姆環保設備有限公司）；培養基（北京百因諾生物科技有限公司）；顯微鏡（BXJ602，寧波舜宇儀器有限公司）；培養皿（滄州維康食品藥品包裝有限公司）；載玻片（江蘇世泰實驗器材有限公司）；分度吸管（蘇州市聯統儀器儀表試劑有限公司）；無菌鑷子（揚州亞申醫療科技有限公司）。

1.3 實驗方法

全部樣本在送至實驗室后4 h 內進行檢驗，以防出現樣本污染，造成檢驗結果的偏差。檢驗過程中，嚴格根據有關規定執行操作，微生物檢驗項目包括總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌和雜菌。

1.3.1 多管發酵法

將1 mL 水樣接種到10 mL 雙料乳糖蛋白胨培養液中，將1 mL 水樣接種到10 mL 單料乳糖蛋白胨培養液中，另將1 mL 水樣注入10 mL 滅菌生理鹽水中，各接種5 管，充分混勻，置于培養箱內，培養箱溫度設置（36±1）℃，培養時間（24±2）h。如所有培養管不出現產酸產氣，視為樣本中總大腸菌群陰性；若有產酸產氣，挑取產酸產氣發酵管中的菌落接種于伊紅美藍瓊脂板上，并置于培養箱，培養箱溫度設置36 ℃左右，培養時間18～24 h，定時觀察瓊脂板狀況。對符合以下特征菌落進行革蘭氏染色、鏡檢和證實試驗，①呈淡紫紅色，中心較深；②呈紫褐色；③深紫黑色，有金屬光澤。

1.3.2 濾膜法

對濾膜進行殺菌，使用無菌鑷子將微孔濾膜（0.45 μm）放在裝有蒸餾水的燒杯中，蒸餾水煮至沸騰，共3 次，每次15 min，除去前兩次的沸水，以免有殘留物殘存，確保濾膜無菌。使用無菌鑷子夾取濾膜置于無菌濾床上，濾膜粗糙一面處于上方，加固過濾器，將100 mL 樣本置于過濾器中，開啟閘門，氣壓設定為0.05 mmHg，進行抽濾。將過濾后的濾膜取出，用無菌鑷子夾取濾膜邊緣將濾膜置于含有品紅硫酸鈉的培養基上，濾膜平整置于培養基，以免出現氣泡，培養基倒置放在恒定37 ℃的培養箱中，培養48 h。

1.4 判定標準

參照《生活飲用水衛生標準》（GB 5749—2006）相關規定，樣本中均未檢驗出總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌和雜菌，視為樣本質量合格；若其中任何一項指標未達到規定，則視為樣本質量不合格。

1.5 觀察指標

①對比兩組微生物檢驗的合格率，包括總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌和雜菌的合格率與總合格率。②對比不同時期生活飲用水微生物檢驗的總合格率。

1.6 數據分析

應用SPSS 22.0 軟件對數據分析，計數資料以%表示，進行χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果與分析

2.1 兩種方法生活飲用水微生物檢驗結果對比

多管發酵組總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌和雜菌的合格率與總合格率低于濾膜組，P均＜0.05。見表1。

表1 兩種方法的微生物檢驗結果

2.2 兩種方法不同時期生活飲用水微生物檢驗結果對比

多管發酵組豐水期、枯水期生活飲用水微生物檢驗的總合格率均低于濾膜組，P均＜0.05。見表2。

表2 不同時期生活飲用水微生物檢驗結果

3 結論與討論

水是人們生活的必需品，水質會直接影響人們的身體健康，甚至會對生命安全造成威脅[8]。但水質問題長期存在，特別是農村地區，水質不合格情況較為常見[9]。對生活飲用水進行微生物檢驗，有利于發現影響水質的影響因素，為政府部門強化水質管理提供參考，從而采取管理舉措，促進水質提升[10-11]。

病原微生物侵入人體，可誘發感染，常使患者出現腸道系統癥狀[12]。總大腸桿菌主要用于評定水質的衛生質量，對腸道疾病的傳播控制有一定的指導作用[13-14]。耐熱大腸菌群主要來自人和溫血動物的糞便，是評估水質的重要參考依據。

多管發酵組總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌、雜菌的合格率與總合格率均低于濾膜組，提示多管發酵法對生活飲用水微生物檢出率較高，便于檢出總大腸菌群、大腸埃希氏菌、耐熱大腸菌群，可科學判斷生活飲用水水質。多管發酵組豐水期、枯水期生活飲用水微生物檢驗的總合格率均低于濾膜組，進一步驗證了多管發酵法在生活飲用水微生物檢驗中的應用優勢。豐水期生活飲用水微生物檢驗的總合格率高于枯水期，提示豐水期的水質更好。

從以上分析發現，生活飲用水存在質量不合格的現象，應引起重視，加強監管控制。政府及相關部門應不斷提高生活飲用水管理，定期檢驗水質，以提高飲用水安全性。建議措施如下：①加強對水源地的保護，嚴禁在水源地鄰近區域進行排污、排放廢氣，嚴禁使用對水質有危害性的化肥；②加速對供水管網的改造，合理設定水價，號召居民使用政府統一供應的自來水；③加強水質監測，確保其質量符合國家衛生標準；④加強對居民安全用水的知識宣教，告知水污染的嚴重性、飲用不合格水的危害性；⑤加強對生活飲用水的安全管理，明確各管理人員的工作任務與職能，尤其應明確管理人員的編制，并給予相應的管理經費，以充分發揮管理者的作用，繼而提高管理效果，切實提高居民生活飲用水的管理水平；⑥對于財政支付承擔的自來水工程，應由政府代理予以監管，并由財政、審計等職能部門行使權力，明確水廠的產權，以防出現資產流失；⑦由物價部門對居民的飲用水進行成本核算，合理對飲用水進行定價，包括供水水價與入戶費，并統一自來水初裝與水費標準，以減輕居民的用水壓力；⑧成立以社區為單位的水質檢測中心，對居民的飲用水進行免費水質檢測；⑨由政府撥付資金，建立基金制度，從居民水費中撥出一部分資金作為維護基金，助力居民飲用水供應的長久穩定。