熒光PCR探針熔解曲線技術檢測痰標本結核分枝桿菌利福平耐藥性的研究

王嫩寒 田麗麗 陳雙雙 趙琰楓 樊瑞芳 陳昊 任怡宣 張潔 易俊莉 楊新宇 于蘭 丁北川 李傳友 代小偉

據世界衛生組織估算,2021年我國耐多藥結核病(multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB)/利福平耐藥結核病(rifampicin-resistant tuberculosis,RR-TB)發病數為33 000例;而實驗室確診的MDR/RR-TB患者數僅為16 826例,治療成功率僅為53%[1],耐藥結核病疫情形勢嚴峻。利福平是一種廣譜抗生素,作為一線抗結核藥物,其耐藥性備受關注。患者感染的結核分枝桿菌是否對利福平耐藥,決定了不同的臨床治療方案[2]。傳統的藥物敏感性試驗(簡稱“藥敏試驗”)建立在患者標本培養陽性的基礎上,此種方法耗時長,易延誤治療。近年來,快速分子耐藥篩查技術發展迅速,如GeneXpert MTB/RIF,能直接檢測患者標本,及時獲得利福平耐藥檢測結果,為患者制定個體化治療方案贏取寶貴時間。但該技術的儀器耗材均為進口,影響其推廣應用。本研究應用我國自主研發的熒光PCR探針熔解曲線(fluorescence polymerase chain reaction probe melting curve,MeltPro)技術對痰標本直接進行結核分枝桿菌利福平耐藥性檢測,以評價該方法的應用價值。

資料和方法

一、資料來源

收集2021年5月至2022年5月在北京市疾病預防控制中心結核病門診就診的初治肺結核患者痰標本。納入標準：(1)GeneXpert MTB/RIF檢測結果為陽性;(2)痰液標本量>3 ml。對收集到的痰標本進行涂片鏡檢及分枝桿菌分離培養,培養陽性菌株進行利福平比例法藥敏檢測;采用GeneXpert MTB/RIF方法和MeltPro技術對痰標本直接進行結核分枝桿菌利福平耐藥性檢測。

二、儀器和試劑

萋-尼抗酸桿菌染色液由珠海貝索生物技術有限公司生產,酸性……