CRISPR-Cas13a檢測在肺結核診斷中的價值

張治國 尚媛媛 張旭霞 劉榮梅 馬麗萍 秦林 孔忠順 任衛聰

目前,臨床上診斷肺結核的方法仍是影像學技術及細菌學檢測,但痰涂片抗酸桿菌染色法簡單、快速、經濟,但敏感性差;痰菌培養周期長,不利于臨床結核病的診斷和治療[1]。隨著結核病實驗室診斷技術不斷進步,分子生物學檢測技術以其獨特的優勢正迅猛發展且逐步取代傳統的結核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB)檢測技術[2]。GeneXpert MTB/RIF(簡稱“Xpert”)是世界衛生組織推薦用于結核病檢測的分子診斷平臺,與傳統檢測方法比較,其檢測的敏感度和特異度均明顯升高[3]。然而,其檢測成本是涂片鏡檢的20多倍,阻礙了在低收入國家的大規模應用。因此,需要更多經濟有效的分子生物學技術來提高結核病的檢出率。

成簇的規律間隔短回文重復序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)和相關蛋白(Cas)系統由于其高度的靈活性、敏感性和特異性而在臨床診斷中得到越來越多的應用[4]。通過將目標核酸序列轉化為熒光信號,可以有效地檢測病原微生物。例如,基于 CRISPR/Cas12a 的平臺已用于檢測結核病和其他傳染病[5-9]。此外,RNA引導的靶向RNA的核酸內切酶 Cas13a是另一種在分子診斷方面具有巨大潛力的CRISPR-Cas系統。有研究人員將Cas13a的側鏈RNase 切割與分子擴增相結合,建立了基于 CRISPR-Cas13a 的平臺,敏感度達單拷貝、特異度達單堿基的高敏感性、高特異性病毒檢測方法[10-11]。本研究旨在利用CRISPR-Cas13a檢測方法對臨床樣本進行檢測,評價其對肺結核的診斷效能。

材料和方法

一、標本來源

采用回顧性研究方法,收集首……