全自動蒸餾-分光光度法測定葡萄酒中二氧化硫殘留量

邵 剛

（武威市食品檢驗(yàn)檢測中心，甘肅武威 733000）

葡萄酒是以葡萄為原料發(fā)酵而成的一種果酒，其酒精含量通常在13%～15%，常分為紅葡萄酒、白葡萄酒和起泡酒。為了提高葡萄酒的品質(zhì)，人們往往會添加防腐劑，二氧化硫是一種常用的防腐劑，具有防腐、抗氧化和保持葡萄酒香味的作用。在發(fā)酵過程中，二氧化硫可抑制氧化酶從而起到抗氧化的作用，還可澄清且為葡萄酒添加酸度[1]。但二氧化硫超標(biāo)會對人體產(chǎn)生危害，損傷呼吸道、損害心血管系統(tǒng)、導(dǎo)致胎兒先天畸形及致癌等，其含量須嚴(yán)格控制[2]。目前，《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2014）規(guī)定葡萄酒中二氧化硫類化合物的限量為0.25 g·L，且規(guī)定了其殘留量檢測的標(biāo)準(zhǔn)方法。比色法、滴定法、離子色譜法是食品中二氧化硫最主要的檢測方法。雖然比色法所用試劑存在一定的毒性，但其操作簡單、應(yīng)用性廣、成本低，一般檢測機(jī)構(gòu)均可滿足其測定要求。故本文采用全自動二氧化硫蒸餾-分光光度法測定不同種類葡萄酒中二氧化硫的殘留量，且以檢測數(shù)據(jù)為依據(jù)對安全性進(jìn)行評估，為今后葡萄酒的加工制備及安全性提供技術(shù)支撐[3-5]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

紅葡萄酒、白葡萄酒，均購自于超市；二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg·mL-1），中國計(jì)量院；氨基磺酸氨、乙二胺四乙酸二鈉、甲醛、鄰苯二甲酸氫鉀、鹽酸副玫瑰苯胺、冰乙酸和磷酸，均購于國藥集團(tuán)。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

QUINTIX224-ICN萬分之一電子天平：賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；智能一體化蒸餾儀（充氮）：青島瑞明儀器設(shè)備有限公司；可見分光光度計(jì)：北京海光儀器有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品制備

準(zhǔn)確吸取50.00 mL液體樣品，置于蒸餾燒瓶中。加入250 mL水裝上冷凝裝置，將冷凝導(dǎo)管插入含有30 mL甲醛吸收液的錐形瓶中，開通氮?dú)猓髁靠刂圃?.0 L·min-1，打開分液漏斗活塞，用6 mol·L-1鹽酸溶液10 mL快速流入蒸餾瓶，立刻加熱燒瓶內(nèi)的液體至沸騰，微沸1.5 h后停止加熱。取下蒸餾瓶，將導(dǎo)管尖嘴用少量的水吸入瓶中，最后將吸收液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，甲醛吸收液定容至刻度[6-7]。

1.3.2 線性關(guān)系

配制濃度為10 μg·mL-1二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)使用液0 mL、0.20 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL和3.00 mL置于25 mL具塞試管中，用甲醛緩沖吸收液定容至刻度10 mL。配制成標(biāo)準(zhǔn)系列0 μg·mL-1、0.2 μg·mL-1、0.5 μg·mL-1、1.0 μg·mL-1、2.0 μg·mL-1和3.0 μg·mL-1，再依次加入0.5 mL的3 g·L-1氨基磺酸胺溶液、0.5 mL的1.5 mol·L-1氫氧化鈉溶液、1.0 mL的0.5 g·L-1鹽酸副玫瑰苯胺溶液，搖勻放置20 min后，在579 nm波長下測定吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.3 樣品的測定

吸取試樣溶液2.0 mL，置于25 mL具塞試管中，按照1.3.2“用甲醛緩沖吸收液定容至刻度10.00 mL……”進(jìn)行操作，同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)。

1.3.4 精密度

選取同一批次的葡萄酒樣品經(jīng)上述方法（1.3.1）處理后，得到供試樣品溶液，平行測定6次，計(jì)算測定值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

1.3.5 加標(biāo)回收率

配制3個(gè)梯度（0.5 μg·mL-1、1.0 μg·mL-1、2.0 μg·mL-1）濃度的二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別加入已知二氧化硫殘留量的同一批次樣品，經(jīng)上述方法（1.3.1）制備后，采用上述條件平行測定6次，計(jì)算樣品的加標(biāo)回收率[8-10]。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測方法的確定

樣品前處理效果直接影響二氧化硫含量的準(zhǔn)確性測定，因此選擇最佳的二氧化硫前處理方法具有重要意義。本文以紅葡萄酒樣品為例，對比了蒸餾法、氧化法、碘量法3種方法測定紅葡萄酒中二氧化硫殘留量，結(jié)果相差不大。但蒸餾法所用試劑較少、處理方法簡單，選擇此法易行[11-12]。

2.2 檢測方法性能考察

2.2.1 線性關(guān)系

本實(shí)驗(yàn)按照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中二氧化硫的測定》（GB 5009.34—2022）中的測試條件進(jìn)行測定，以質(zhì)量X為橫坐標(biāo)，二氧化硫的吸光度Y為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性回歸方程為Y=0.0266X+0.0395，相關(guān)系數(shù)為0.9998，表明二氧化硫殘留量在葡萄酒中濃度為0～3.0 μg·mL-1線性關(guān)系良好。

2.2.2 檢出限、定量限

本實(shí)驗(yàn)通過分析大量樣品空白確定檢出限，計(jì)算出檢測結(jié)果的算數(shù)平均值（X）和標(biāo)準(zhǔn)偏差（S），從而利用公式LOD=X+3S確定出方法檢出限（LOD）為1 mg·L-1，以10倍檢出限作為定量限。

2.2.3 精密度

選取同一個(gè)樣品進(jìn)行6次重復(fù)性測定，符合相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.16%，表明分光光度計(jì)設(shè)備精密度良好。

2.2.4 回收率

將已知濃度的二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)液加入樣品中，使加標(biāo)后的樣品中二氧化硫有低、中、高3個(gè)濃度，對其進(jìn)行3水平6平行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)測定，計(jì)算樣品的平均加標(biāo)回收率為95.80%，回收率范圍為94.20%～97.50%，表明二氧化硫回收率良好，具體回收率見表1。

表1 樣品中二氧化硫的加標(biāo)回收率

2.3 樣品測定結(jié)果

按照上述樣品處理及檢測方法，各測定10批次紅葡萄酒、白葡萄酒和起泡葡萄酒樣品中的二氧化硫殘留量，含量平均值分別為36.6 mg·L-1、64.9 mg·L-1和59.3 mg·L-1。與《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2014）規(guī)定葡萄酒中二氧化硫類化合物的限量值0.25 g·L-1比較，30批次樣品二氧化硫殘留量都符合標(biāo)準(zhǔn)，合格率為100%，詳見表2。

表2 樣品中二氧化硫殘留量測定結(jié)果（n=3）

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)所使用的葡萄酒中二氧化硫殘留量檢測方法全自動蒸餾-分光光度法，通過對其二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的線性范圍、方法檢出限、方法定量限、精密度及回收率等準(zhǔn)確度進(jìn)行方法驗(yàn)證，表明此方法的檢測相比于文獻(xiàn)中已有的其他方法，其主要優(yōu)勢在于實(shí)驗(yàn)過程簡單可控，存在較小的人為誤差，且簡單、易行、方便且快捷[13-14]。采用此方法分別對10批次紅葡萄酒、10批次白葡萄酒和10批次起泡葡萄酒進(jìn)行二氧化硫殘留檢測研究，可知全自動蒸餾-分光光度法在食品中二氧化硫的檢驗(yàn)檢測方面具有普適性，且3種類型的葡萄酒中均檢出二氧化硫殘留量，但未超食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)，安全性較高。其中，白葡萄酒中殘留值最高，起泡酒次之，紅葡萄酒中殘留量最低，這可能是由于葡萄酒種類不同帶來殘留量檢出值的差異性。此外，本研究不僅局限于葡萄酒中二氧化硫殘留量的分析，其在提醒相關(guān)人員引起對葡萄酒中二氧化硫含量現(xiàn)象的思考，使食品中二氧化硫殘留引起人們的高度重視[15-16]。