蔬菜、水果中吡蟲啉的測定

寧舵華，趙 妍，王 曦

（1.漢臺區農產品質量安全監測檢驗中心，陜西漢中 723000；2.漢臺區農業綜合執法大隊，陜西漢中 723000）

煙堿類農藥是優良的殺蟲劑，在防治同翅目等小型昆蟲方面占有重要地位[1]。吡蟲啉屬于新煙堿類殺蟲劑，作用機理是通過抑制昆蟲中樞神經系統中的乙酰膽堿受體，使中樞神經正常傳導受損，進而使昆蟲麻痹死亡[2]。吡蟲啉殺蟲譜廣，內吸傳導性好，施藥用量低，與環境相容性高，因此在種植蔬菜水果的過程中使用廣泛[3]，但卻造成在蔬菜水果中的殘留和環境污染。蔬菜大多數生長期短，病蟲害比較嚴重，種植戶為防止病蟲害進一步蔓延擴大，往往會加大農藥施用劑量和次數，這會加劇農藥抗性風險并致使農殘量劇增、加大對人體健康的潛在風險[1]。另外，蔬菜施藥后采摘間隔期短，也致使蔬菜中農藥殘留過量[4]。有研究報道，我國各地上市蔬菜均存在不同程度的農藥殘留問題，部分地區蔬菜的農藥殘留抽檢合格率較低[5]。因此，蔬菜水果中吡蟲啉殘留的測定工作非常必要，對確保農產品質量安全具有十分重要的意義。

吡蟲啉屬于極性化合物，由于其具有熱不穩定性，實驗室在進行測定分析時通常采用高效液相色譜法或高效液相色譜串聯質譜法，而液質聯用法檢測吡蟲啉在我國的普及率并不是很高[6]。結合當前各縣區農產品檢測機構的設備配置情況，蔬菜、水果中吡蟲啉的測定主要采用高效液相色譜法[7]。在實際操作中，按照現行有效國家標準GB/T 23379—2009對蔬菜水果中的吡蟲啉進行測定時，需要使用0.1%的磷酸溶液作流動相，相關文獻表明流動相的性質如極性大小、pH大小對測量的影響極其深遠[8]，在實際操作中應避免使用含有腐蝕性的酸、鹽、過氧化物、強絡合劑等的試劑作為流動相[9]。因此，本文對GB/T 23379—2009進行改進，用純水替代0.1%的磷酸溶液作流動相，使用純水作流動相可以減少對色譜柱的損害，延長色譜柱使用壽命，保證高效液相色譜儀檢測結果的準確性，同時可以縮短試驗結束后沖洗色譜柱的時間，簡單易操作，環保高效。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

樣品選為茄子監督抽檢樣，于-20 ℃保存。

乙腈（HPLC，賽默飛世爾科技有限公司）、NaOH（GR，成都市科龍化工試劑廠）、固相萃取柱ENVI-18柱（美國安捷倫公司）、0.45 μm有機濾膜（天津市津騰實驗室設備有限公司）、吡蟲啉農藥標準物質（BW900744-1000-A，農業農村部環境保護科研監測所）。

1.2 儀器與設備

1260安捷倫液相色譜儀（VWD檢測器，美國安捷倫公司），AUW220D型電子分析天平（日本島津公司），JY601型電子天平（上海良平儀器儀表有限公司），RE-52AA型旋轉蒸發儀（上海賢德實驗儀器有限公司），Vm-01u（HYQ-3110）型旋渦振蕩器（寧波新芝生物科技股份有限公司），H1850R型高速離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司），HXFDY型組織搗碎勻漿機（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 試劑配制

取1 mL濃度為100 μg·mL-1的吡蟲啉標準溶液到10 mL的容量瓶中，用乙腈定容至刻度，得到濃度為10 μg·mL-1的標準儲備液，于-18 ℃保存。準確量取標準儲備液逐級稀釋為0.80 μg·mL-1、0.70 μg·mL-1、0.60 μg·mL-1、0.50 μg·mL-1、0.40 μg·mL-1、0.30 μg·mL-1、0.20 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1和0.05 μg·mL-1的標準工作溶液，于4 ℃冰箱保存，可使用兩個月。

凈化過程所用20 mmol·L-1NaOH溶液：稱取0.8 g NaOH，放置到100 mL燒杯中，加入少量水充分溶解后，倒入1000 mL容量瓶中定容。

1.3.2 色譜分析條件

色譜柱：C18（250 mm×4.6 mm，3.5 μm）；紫外檢測器波長：270 nm；柱溫：35 ℃；進樣量：10 μL；流動相流速：1.0 mL·min-1。流動相組成見表1。

表1 流動相組成

1.3.3 分析步驟

（1）提取。取10 g左右待檢測樣品（精確到0.01 g），放置在100 mL的離心管中，加入20 mL乙腈，進行旋渦振蕩，設置時間為1 min；振蕩結束后加入5 g NaCl，用組織搗碎勻漿機進行勻漿，設置轉速為3500 r·min-1，時間為1 min；勻漿結束后，在離心機中離心，設置轉速為3000 r·min-1，時間為5min；移取離心管中的上層清液10 mL，放置到50 mL的梨形瓶中旋轉蒸發，旋轉蒸發儀溫度設置為38 ℃；旋轉蒸發近干，量取2 mL濃度為25%的乙腈溶液置于梨形瓶中，超聲30 s充分溶解待凈化。

（2）凈化。先加入5 mL丙酮和5 mL乙腈對ENVI-18柱進行預淋洗，再加入5 mL濃度為25%的乙腈溶液平衡柱，移取梨形瓶中溶解好的茄子提取液1 mL，轉至凈化柱上，之后取10 mL濃度為20 mmol·L-1的NaOH溶液洗柱，棄去；再吸取10 mL水進行洗柱，棄去，抽干凈化柱。最后取1 mL乙腈溶液緩慢洗脫保留在凈化柱上的吡蟲啉農藥，收集洗脫定容至1 mL，旋渦30 s，用0.45 μm有機濾膜進行過濾，待檢測。

2 結果與分析

2.1 流動相

根據本實驗室條件、吡蟲啉特性及具體實驗操作中吡蟲啉出峰的保留時間，選擇流動相分別為純水和乙腈，梯度洗脫時間為30 min。結果表明，在上述色譜條件下，吡蟲啉保留時間為11.9 min，實驗譜圖基線平穩，峰形對稱尖銳。

2.2 檢測波長

本實驗室高效液相色譜儀配備VWD檢測器，查閱相關文獻[10]，設定波長為270 nm。經過分離洗脫，實驗譜圖峰形對稱，無拖尾現象。

2.3 方法線性范圍

將吡蟲啉標準貯備液配制成濃度為0.05 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.20 μg·mL-1、0.30 μg·mL-1、0.40 μg·mL-1、0.50 μg·mL-1、0.60 μg·mL-1、0.70 μg·mL-1和0.80 μg·mL-1的標準工作溶液，在上述1.3.2的條件下進行分析測定。以配制所得標準溶液濃度作為橫坐標（μg·mL-1），以實驗所測得峰面積作為縱坐標，通過線性回歸，可以得到兩個標準曲線回歸方程，如表2所示。在0.05～0.40 μg·mL-1、0.40～0.80 μg·mL-1，吡蟲啉濃度與峰面積有良好的線性關系。

表2 化合物保留時間及線性范圍

2.4 方法檢出限測試

在0.05～0.40 μg·mL-1，吡蟲啉濃度與峰面積有良好的線性關系。按信噪比（S/N）為3確定本方法檢出限為0.05 mg·kg-1。

2.5 方法精密度測試

取7份茄子樣品，每份樣品中加入0.25 mL 10 μg·mL-1的標準溶液，平行測定7次，以檢測方法的精密度。檢測結果見表3，相對標準偏差（RSD）為2.9%，符合國標《合格評定 化學分析方法確認和驗證指南》（GB/T 27417—2017），說明本方法精密度良好。

表3 吡蟲啉的精密度測試數據

2.6 方法準確度測試

取3份茄子樣品，按照1.3.3中吡蟲啉提取測定方法，每份樣品加入不同濃度的標準溶液進行回收實驗，計算回收率，結果見表4。方法回收率在96.5%～103.0%，符合國標《合格評定 化學分析方法確認和驗證指南》（GB/T 27417—2017），說明本方法的準確度較好。

表4 試樣加標回收率測定數據表

3 結論

本實驗采用1260安捷倫液相色譜儀（VWD）測定蔬菜、水果中的吡蟲啉，用純水替代0.1%磷酸溶液作為流動相，選擇了適宜的樣品處理方法和合理的儀器分析條件，此方法的最低檢出限為0.05 mg·kg-1，精密度為2.9%，加標回收率為96.5%～103.0%，符合實驗室質量控制的要求。