大黃-黃芪組分自微乳的制備及在體腸吸收特性研究

侯 雨，朱 琳，張奇鑌，葉小風，柯俏穎，徐志士，魏穎慧

大黃-黃芪組分自微乳的制備及在體腸吸收特性研究

侯 雨，朱 琳，張奇鑌，葉小風，柯俏穎，徐志士，魏穎慧*

浙江中醫藥大學藥學院，浙江 杭州 310053

研究大黃-黃芪多組分自微乳的處方與制備工藝，評價制劑質量，并考察其大鼠腸吸收特性。通過溶解度實驗、油相與乳化劑和助乳化劑配伍實驗及偽三元相圖的繪制，篩選出最優處方組成；并從自微乳的外觀、形態、粒徑、穩定性等方面對自微乳進行評價。通過大鼠在體單向腸灌流實驗考察自微乳的腸吸收特性。自微乳處方中油相為辛酸癸酸單雙甘油酯、乳化劑為聚氧乙烯蓖麻油35、助乳化劑為乙二醇。在微乳形成區選擇各輔料用量，采用適宜方法加入大黃總蒽醌及黃芪總皂苷制得的組分自微乳，外觀均一透明，加水分散后形成黃色乳光的微乳液，透射電鏡顯微鏡（transmission electron microscopy，TEM）下觀察到微乳分散均勻，無黏連，呈大小均一圓球形乳滴；平均粒徑為（33.01±0.12）nm、多分散指數（polydispersion index，PDI）為0.10±0.02、電位為（?10.10±1.00）mV；自微乳中大黃總蒽醌和黃芪總皂苷質量分數分別為6.29、8.80 mg/g。自微乳中大黃總蒽醌在十二指腸、空腸段的吸收速率常數（a）及表觀吸收系數（app）較回腸段均有顯著提高；黃芪總皂苷在小腸吸收良好，各腸段間無顯著性差異。篩選出的自微乳處方對大黃-黃芪多組分具有良好的負載性能，乳化效率高；自微乳中大黃總蒽醌及黃芪總皂苷在小腸各段均有良好的吸收，有望改善二者的生物利用度以更好地發揮其協同作用。

大黃總蒽醌；黃芪總皂苷；自微乳給藥系統；處方研究；偽三元相圖；在體腸吸收

慢性腎臟?。╟hronic kidney disease，CKD）為世界重大公共衛生問題之一，全球發病率為10.0%～13.0%[1]，其主要病理特征為各種原因導致的腎臟結構和功能發生改變[2-3]。目前，臨床藥物治療主要包括腎素-血管緊張素-醛固酮系統抑制劑、鈉-葡萄糖共轉運蛋白2抑制劑和鹽皮質激素受體拮抗劑等[4-6]，但都僅能延緩CKD向終末期腎病的進展。因此，繼續探索CKD的有效治療方法具有重大意義。中醫將CKD歸屬為“虛勞”“水腫”“癃閉”“腰痛”“關格”等范疇，臨床治療多以“補虛培本，益腎健脾，泄濁解毒，化瘀通絡”為法[7-9]，常采用加味桃仁承氣湯、尿毒清利湯、腎毒寧、健脾補腎湯、補脾化濕湯等經方、驗方。這些方劑中常以大黃-黃芪配伍，共奏攻邪補益之效。由二者配伍制成的醫院制劑大黃黃芪膠囊用于治療CKD氮質血癥、尿毒癥及腎纖維化已有數十年，具有較明確的臨床有效性及安全性[10]。然而，由于大黃黃芪膠囊為第一代傳統中藥制劑（兩藥均直接粉碎入藥），存在所含成分復雜、給藥劑量大、物質基礎及作用機制不明、釋藥行為不明、藥動學性質不清晰、起效緩慢等問題[11]，在很大程度上限制了大黃黃芪膠囊藥效的發揮及廣泛應用。研究表明，大黃總蒽醌和黃芪總皂苷分別是大黃和黃芪治療CKD的有效組分[12-15]。然而，大黃總蒽醌與黃芪總皂苷較差的水溶性，導致其口服生物利用度很低[16-17]，且二者在理化性質、生物藥劑學性質等方面也存在較大差異，阻礙了二者協同作用的發揮。

近年來，脂質藥物遞送系統（固體脂質納米粒、納米結構脂質載體、納米乳、納米脂質體、自微乳等）被廣泛用于經胃腸道遞送藥物而提高其口服生物利用度[18-20]。其中自微乳因具有顯著提高生物利用度、增加藥物穩定性、降低藥物毒性的優勢而被廣泛用于經胃腸遞送中藥成分或有效部位[21]，但大多用于遞送中藥單一成分或單組分[22-24]，較少用于遞送中藥多組分。因此，本研究擬制備大黃總蒽醌-黃芪總皂苷多組分自微乳，以有效提高二者口服生物利用度，并充分發揮二者的協同作用，同時采用大鼠在體單向腸灌流實驗評價自微乳的腸吸收特性，為體內實驗奠定基礎，并為中藥多組分協同治療CKD提供思路和方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器

SpectraMax M2e型酶標儀，美國Molecular Devices公司；Nano-ZS 90型激光粒度分析儀，英國Malvern公司；KQ-250DV型數控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；JEM-1200EX型透射電子顯微鏡（TEM），日本電子株式會社；BT100-2J型恒流泵，保定蘭格恒流泵有限公司；Waters型高效液相色譜儀，2998全波長檢測器，2424 ELSD檢測器，美國Waters公司；Eppendorf 5427R型臺式高速離心機，德國Eppendorf有限公司；CP225D型電子分析天平，德國Sartorius公司；Mill-Q型超純水器，美國Millpore公司。

1.2 藥品與試劑

大黃總蒽醌，南京世洲生物科技有限公司，質量分數＞50%，批號2021；黃芪總皂苷，成都錦泰和有限公司，質量分數＞90%，批號AGS-98-21120；對照品蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、黃芪甲苷，上海詩丹德有限公司，質量分數＞98%，批號分別為6530、5996、5940、5834、5995、5081；聚山梨酯80、聚氧乙烯蓖麻油35、聚乙二醇400（PEG400），上海源葉生物科技有限公司；聚山梨酯20，上海生工生物工程有限公司；1,2-丙二醇，上海凌峰化學試劑有限公司；異丙醇，廣東光華科技有限公司；丙三醇，江蘇強盛功能化學股份有限公司；油酸乙酯，廣東翁江化學試劑有限公司；肉豆蔻酸異丙酯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；橄欖油，上海麥克林生化科技股份有限公司；辛酸癸酸單雙甘油酯，嘉法獅貿易有限公司。

1.3 動物

健康SD雄性大鼠，體質量（200±20）g，由浙江中醫藥大學實驗動物中心提供，生產許可證號：SCXK（滬）2017-0005。飼養環境：室溫20～25 ℃，相對濕度45%～60%，適應性喂養1周后開始正式實驗。動物實驗經浙江中醫藥大學動物實驗倫理/管理委員會批準，批準文號SYXK（浙）2019-0024。

2 方法與結果

2.1 自微乳中藥物含量測定方法的建立

2.1.1 自微乳中大黃總蒽醌含量測定方法

（1）色譜條件：色譜柱為Eclipse XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-0.2%磷酸水溶液（85∶15）；檢測波長為250 nm；柱溫30 ℃；進樣量20 μL；體積流量1.0 mL/min。

（2）對照品溶液的制備：分別精密稱取減壓干燥至恒定質量的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚及大黃素甲醚對照品適量，置于5 mL量瓶中加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得蘆薈大黃素對照品儲備液（402 μg/mL）、大黃酸對照品儲備液（402 μg/mL）、大黃素對照品儲備液（376 μg/mL）、大黃酚對照品儲備液（400 μg/mL）和大黃素甲醚對照品儲備液（392 μg/mL）。

（3）混合對照品溶液的制備：分別精密量取蘆薈大黃素、大黃素、大黃酚及大黃素甲醚各對照品儲備液各1.0 mL，大黃酸對照品儲備液2.0 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得混合對照品溶液（蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的質量濃度分別為40.2、80.4、37.6、40.0、39.2 μg/mL）。

（4）供試品溶液的制備：精密稱取自微乳液0.100 g，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，于4000 r/min離心10 min，取上清，過0.45 μm微孔濾膜，取續濾液，即得。

（5）專屬性試驗：分別取溶劑、混合對照品溶液、空白自微乳供試品溶液及自微乳供試品溶液各20 μL，按上述色譜條件進行測定，并記錄圖譜（圖1）。結果表明，溶劑及輔料對自微乳中大黃總蒽醌的含量測定無干擾，方法專屬性良好。

（6）線性范圍考察：分別精密吸取混合對照品溶液適量，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制備系列質量濃度的混合對照品溶液，按上述色譜條件進樣測定，分別以峰面積（）對蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚及大黃素甲醚質量濃度（）進行線性回歸，得蘆薈大黃素回歸方程：＝98 186＋57 704，2＝0.999 3（＝6），線性范圍為1.26～40.2 μg/mL；大黃酸回歸方程：＝28 865＋12 325，2＝0.999 7（＝6），線性范圍為1.26～40.0 μg/mL；大黃素回歸方程：＝54 923＋46 656，2＝0.999 2（＝6），線性范圍為1.18～37.6 μg/mL；大黃酚回歸方程：＝79 146＋174.19，2＝0.999 9（＝6），線性范圍為1.25～40.0 μg/mL；大黃素甲醚回歸方程：＝56 073＋39 042，2＝0.999 1（＝6），線性范圍為1.22～39.2 μg/mL。

（7）方法學考察：參照《中國藥典》2020年版四部方法進行穩定性、重復性、精密度、加樣回收率試驗，結果表明，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚及大黃素甲醚的日內精密度、日間精密度、穩定性及重復性RSD均小于2.00%，平均加樣回收率為103.20%，該方法的精密度和準確度良好。

1-蘆薈大黃素 2-大黃酸 3-大黃素 4-大黃酚 5-大黃素甲醚

（8）樣品測定：分別取適量樣品溶液過0.45 μm微孔濾膜，按“2.1.1”項下色譜條件分別測定蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚及大黃素甲醚含量，采用自定義權重系數法整合大黃總蒽醌含量[25-26]。具體方法：根據大黃總蒽醌中5種主要成分的質量占比，設定蘆薈大黃素的加權系數為15.0%、大黃酸的加權系數為3.0%、大黃素的加權系數為9.3%、大黃酚的加權系數為61.5%、大黃素甲醚的加權系數為11.2%，則大黃總蒽醌的含量＝蘆薈大黃素的含量×15.0%＋大黃酸的含量×3.0%＋大黃素的含量×9.3%＋大黃酚的含量×61.5%＋大黃素甲醚的含量×11.2%。

2.1.2 自微乳中黃芪總皂苷的含量測定方法

（1）色譜條件：色譜柱為Eclipse XDB-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-水，梯度洗脫程序：0～15 min，30%～70%乙腈；16～20 min，70%～30%乙腈；檢測時間為20 min；柱溫35 ℃；增益為135 dB；漂移管溫度為85 ℃；氣體壓力為275.790 kPa（40 psi）；進樣量20 μL；體積流量1.0 mL/min。

（2）對照品溶液的制備：精密稱取黃芪甲苷對照品適量，置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，即得黃芪甲苷對照品儲備液（796 μg/mL）。

（3）供試品溶液的制備：同“2.1.1”項下“供試品溶液制備”。

（4）專屬性試驗：分別取溶劑、混合對照品溶液、空白自微乳供試品溶液及自微乳供試品溶液各20 μL，按上述色譜條件進行測定，并記錄圖譜（圖2）。結果表明，溶劑及輔料對自微乳中黃芪總皂苷的含量測定無影響，方法專屬性良好。

圖2 空白溶劑(A)、黃芪甲苷對照品(B)、空白自微乳(C)、大黃-黃芪組分自微乳(D)的HPLC圖

（5）線性范圍考察：分別精密吸取黃芪甲苷對照品儲備液適量，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制備系列質量濃度的黃芪甲苷對照品溶液，按上述色譜條件進樣測定，以黃芪甲苷峰面積（）對質量濃度（）進行線性回歸，得黃芪甲苷回歸方程：＝7 743.3－177 156，2＝0.999 8（＝6），線性范圍為25.9～414.0 μg/mL。

（6）方法學考察：參照《中國藥典》2020年版四部方法進行穩定性、重復性、精密度、加樣回收率試驗，結果表明，黃芪甲苷的日內精密度RSD為1.62%、日間精密度RSD為1.64%，穩定性RSD為1.58%，重復性RSD為1.31%，平均加樣回收率為101.08%，該方法的精密度和準確度良好。

（7）樣品測定：分別取適量樣品溶液過0.45 μm微孔濾膜，按“2.1.2”項下色譜條件分別測定黃芪甲苷含量。因黃芪甲苷為黃芪總皂苷代表性活性成分，因此本實驗以黃芪甲苷含量表征黃芪總皂苷含量[27-28]。

2.2 組分自微乳的制備及處方優化

2.2.1 溶解度試驗 分別于1 g油相、乳化劑及助乳化劑中加入過量大黃總蒽醌或黃芪總皂苷，渦旋混合均勻密封后，置于37 ℃、180 r/min恒溫震蕩器中震蕩24 h，至平衡后，5000 r/min離心（離心半徑為5 cm）10 min，吸取適量上清加甲醇稀釋至適當質量濃度，過0.45 μm微孔濾膜后，按照“2.1”項下方法測定大黃總蒽醌及黃芪總皂苷含量，計算大黃總蒽醌及黃芪總皂苷在各油相、乳化劑及助乳化劑中的溶解度。結果見表1。結果表明，大黃總蒽醌在各油相中的溶解度大小為油酸乙酯＞辛酸癸酸單雙甘油酯＞肉豆蔻酸異丙酯＞橄欖油；黃芪總皂苷在此4種油相中的溶解度均極低，且油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、橄欖油會干擾黃芪總皂苷的測定，因此，選擇辛酸癸酸單雙甘油酯作為油相。大黃總蒽醌在各乳化劑中的溶解度大小為聚山梨酯20＞聚氧乙烯蓖麻油35＞聚山梨酯80；黃芪總皂苷在3種乳化劑中的溶解度無顯著性差異，因此該3者均作為備選乳化劑；對于助乳化劑，大黃總蒽醌及黃芪總皂苷在乙二醇、1,2-丙二醇及聚乙二醇400中溶解度均較高，因此，乙二醇、1,2-丙二醇及聚乙二醇400均作為備選助乳化劑。

2.2.2 乳化劑篩選 為進一步優選乳化劑并考察輔料的相容性，將辛酸癸酸單雙甘油酯（油相）與聚氧乙烯蓖麻油35、聚山梨酯20及聚山梨酯80分別以1∶9、2∶8、3∶7、4∶6比例混合，渦旋均勻后，吸取50 μL于磁力攪拌下滴加至5 mL超純水中，觀察自乳化情況并測定乳滴粒徑及分散系數（polymer dispersity index，PDI）。將自乳化情況按照以下5個級別進行評定：a）澄清或略泛藍光；b）略渾濁，呈藍白色；c）不透明，藍白色液體；d）色澤灰暗，呈灰白色；e）難以乳化，有油浮于液面。

表1 大黃總蒽醌與黃芪總皂苷在各輔料中的溶解度(, n = 3)

自乳化情況結果表明，以聚氧乙烯蓖麻油35、聚山梨酯80為乳化劑時，油/乳化劑比例為4∶6、3∶7、2∶8、1∶9時，微乳自乳化情況均為a級；以聚山梨酯20為乳化劑時，油相/乳化劑比例為4∶6、3∶7、1∶9時，自乳化情況均為a級。此外，以聚氧乙烯蓖麻油35為乳化劑時，形成的微乳具有較小的粒徑及PDI，結果見表2。因此，選擇乳化效果好的聚氧乙烯蓖麻油35為乳化劑。

表2 含不同乳化劑微乳粒徑及PDI (, n = 3)

2.2.3 助乳化劑篩選 將聚氧乙烯蓖麻油35與各助乳化劑分別以9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8、1∶9比例混合后，再將辛酸癸酸單雙甘油酯與混合乳化劑分別以9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5比例旋渦混合均勻后吸取適量于磁力攪拌下滴加至5 mL超純水中，記錄相變點，采用Origin 8.5軟件繪制偽三元相圖。結果見圖3。

結果表明，以乙二醇為助乳化劑時，形成的微乳區域最大，因此選用乙二醇作為助乳化劑。

2.2.4 組分自微乳的制備 在偽三元相圖中微乳形成區任選一點處方比例制備大黃總蒽醌-黃芪總皂苷自微乳。稱取處方量的聚氧乙烯蓖麻油35及乙二醇中于燒杯中，加入大黃總蒽醌及黃芪總皂苷，超聲2 h，混合均勻；另稱取處方量辛酸癸酸單雙甘油酯，于磁力攪拌下加入上述混合溶液，混合均勻后超聲2 h，即得組分自微乳。

圖3 不同助乳化劑(PEG400、丙三醇、乙二醇)制備的自微乳的偽三元相圖

2.3 組分自微乳的質量評價

2.3.1 微乳粒徑、ζ電位及形態 稱取所制備的自微乳適量，攪拌下滴加至超純水中，形成帶黃色乳光的微乳液，以超純水適當稀釋后，采用Nano-ZS 90激光粒度分析儀測定微乳粒徑、PDI及ζ電位，結果表明，所得微乳平均粒徑為（33.01±0.12）nm，PDI為0.10±0.02，ζ電位為（?10.10±1.00）mV （＝3）。將適量微乳液滴加至銅網上，鋪展均勻后滴加2.0%磷鎢酸溶液，負染10 min，從邊緣吸去多余微乳液，室溫條件下自然晾干，于TEM下觀察微乳的形貌，結果表明，自微乳乳化后形成的微乳為分散均勻，無黏連，大小均一圓球形乳滴。TEM見圖4。

圖4 組分微乳液的TEM圖

2.3.2 自微乳中大黃總蒽醌和黃芪總皂苷含量測定 平行制備3批組分自微乳，分別按“2.1.1”和“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”和“2.1.2”項下色譜條件進樣測定，計算得自微乳中大黃總蒽醌的質量分數為（6.29±0.07）mg/g，黃芪總皂苷的質量分數為（8.80±0.11）mg/g。

2.3.3 自微乳初步穩定性 取所制備的自微乳3份，分別于攪拌下滴加至超純水中，均勻乳化后，分別于0、2、4、8、12、24、48、96、144 h后測定所得微乳粒徑、PDI及ζ電位，結果如表3所示，自微乳均勻乳化后在測定時間內粒徑PDI與ζ電位均幾無變化，表明微乳的穩定性良好。

2.4 大鼠在體單向腸灌流實驗

取健康SD大鼠12只（實驗前12 h禁食不禁水），隨機分為3組（十二指腸組、空腸組、回腸組）。ip 20%烏拉坦（1 g/kg），麻醉后固定在實驗臺上，沿腹中線剪開腹腔，結扎膽管，仰臥固定于保溫墊上（37 ℃），手術剪刀沿腹部正中線打開腹腔，依次小心分離大鼠的十二指腸、空腸、回腸和結腸，分別于各腸段兩端切口，插入硅膠管并用細線結扎，進口端連接蠕動泵，出口端連接已知質量的離心管，開口處以生理鹽水浸潤的紗布覆蓋保濕，電熱毯保溫。先用生理鹽水沖洗腸道至洗出物澄清后，再使用預熱至37 ℃的K-R溶液以1 mL/min灌流腸段平衡15 min，采用供試液繼續平衡30 min后，調節體積流量為0.2 mL/min進行恒速灌流，并分別在0、15、30、45、60、75、90、105、120 min更換離心管收集流出液，記錄離心管質量后，取出0.5 mL灌流液，加甲醇0.5 mL，渦旋混勻后于4000 r/min離心（離心半徑為7 cm）10 min，上清液過0.45 μm微孔濾膜后，按“2.1”項下色譜條件分別測定灌流液中大黃總蒽醌及黃芪總皂苷含量。試驗結束后，剪下灌流腸段并記錄直徑及長度，測量其長度與周長，測量3次周長計算平均內徑。按公式（1）（2）計算吸收速率常數（a）及表觀吸收系數（app）。

表3 不同儲存時間自微乳粒徑、PDI及ζ電位(, n = 3)

a＝(1－outout/inin)/2π（1）

app＝ln(inin/outout)/2π（2）

in、out分別為腸道進出口灌流液中藥物質量濃度，in、out分別為腸道灌流進出口灌流液體積，為灌流腸段橫截面半徑，為灌流腸段的長度，為灌流體積流量（0.2 mL/min）

組分自微乳在大鼠各腸段吸收參數見表4。自微乳中大黃總蒽醌及黃芪總皂苷在整個小腸腸段均有較好的吸收。其中大黃總蒽醌在十二指腸與空腸段較在回腸段的吸收更好（＜0.05）；黃芪總皂苷在各小腸段吸收無顯著性差異。此外，大黃總蒽醌中的蘆薈大黃素及大黃素的吸收以十二指腸最高；大黃酸及大黃素甲醚吸收以空腸段最高；大黃酚在各小腸段的吸收無顯著性差異。

表4 自微乳中大黃總蒽醌、黃芪總皂苷在不同腸段的吸收參數(, n = 3)

十二指腸空腸：*＜0.05；十二指腸回腸：#＜0.05##＜0.01；空腸回腸：&＜0.05

duodenumjejunum:*< 0.05; duodenumileum:#< 0.05##< 0.01; jejunumileum:&< 0.05

3 討論

自微乳可與脂蛋白結合形成乳糜微粒后通過腸道淋巴系統進入血液循環，也可以直接通過細胞旁路途徑、腸上皮細胞和腸道相關淋巴組織的內吞作用進入腸道淋巴系統，因此，可顯著提高難溶性藥物的口服生物利用度[29-30]。本研究將大黃-黃芪組分（大黃總蒽醌和黃芪總皂苷）制備成自微乳以提高二者的口服生物利用度以利于多組分發揮協同作用。前期研究中，參考大黃黃芪膠囊原方中大黃與黃芪劑量比及大黃中總蒽醌含量、黃芪中總皂苷含量，設置了大黃總蒽醌與黃芪總皂苷比例（1∶0.6、1∶1.0、1∶1.4、1∶2.0、1∶5.0），采用NRK-49F及HK-2細胞模型，確定了二者協同比，因此，本研究所制備的自微乳中大黃總蒽醌與黃芪總皂苷的質量比為1∶1.4。

此外，因大黃總蒽醌在聚氧乙烯蓖麻油35中的溶解度，黃芪總皂苷在乙二醇中的溶解度遠高于二者在各油相中的溶解度，故在載藥自微乳的制備中采用了將大黃總蒽醌及黃芪總皂苷先溶于聚氧乙烯蓖麻油35及乙二醇中，再與油相進行混合的制備工藝。結果表明，所制得的自微乳外觀澄清、透明，乳化后形成的微乳平均粒徑為（33.01±0.12）nm，粒度分布均勻，穩定性良好。

在體單向腸灌流具有保證腸道神經、血管和內分泌系統的完整性的優點，可在一定程度上代表人體腸道蠕動的生理狀態，因此，本實驗采用該模型進行大黃-黃芪組分自微乳腸吸收特性研究。在腸灌流過程中，各腸段不僅會吸收藥物，同時也會吸收和分泌水分，造成灌流液濃度的變化[31]，本研究采用重量分析法進行校正，消除體積變化對腸灌流實驗結果的影響；預試驗時發現管路對藥物有明顯的吸附，故在正式實驗中相應延長了供試液的平衡時間。本研究考察了自微乳在大鼠不同腸段的吸收，結果表明，制備自微乳后大黃總蒽醌在大鼠十二指腸的a及app較空腸段及回腸的a及app高，這與多數文獻報道結果不一致。

一般認為，自微乳稀釋微乳化后主要通過淋巴途徑吸收，在富有集合淋巴結的回腸吸收最好。本研究所得結果為自微乳中大黃總蒽醌在十二指腸吸收最好，原因可能是當微乳到達十二指腸后，會刺激含有膽酸鹽、膽固醇、卵磷脂等成分膽汁的分泌，降低自微乳表面張力，有利于脂肪消化，從而促進藥物在十二指腸的吸收[32]；其次P-糖蛋白在大鼠十二指腸、空腸、回腸的表達依次增加，從而在一定程度上抑制了自微乳中大黃總蒽醌在小腸中下段的吸收。因在體單向灌流實驗要求藥物必須是溶液，而大黃總蒽醌及黃芪總皂苷組分本身在K-R溶液中不溶，導致無法進行組分本身的腸吸收實驗。本研究以蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚為測定指標，根據質量權重系數折算成大黃總蒽醌的a與app值進行比較，使數據結果更為科學合理[33]。

綜上所述，本研究制備了大黃總蒽醌-黃芪總皂苷多組分自微乳，所得的自微乳具有良好負載中藥多組分的能力，自微乳中大黃總蒽醌及黃芪總皂苷在大鼠各小腸段均吸收良好，預測可以有效改善二者口服生物利用度問題，使其更好地發揮協同抗腎纖維化作用。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] Sundstr?m J, Bodegard J, Bollmann A,. Prevalence, outcomes, and cost of chronic kidney disease in a contemporary population of 2.4 million patients from 11 countries: The CaReMe CKD study [J]., 2022, 20: 100438.

[2] Campbell V K, Gately R P, Krishnasamy R,. Midkine and chronic kidney disease-associated multisystem organ dysfunctions [J]., 2021, 36(9): 1577-1584.

[3] Tinti F, Lai S, Noce A,. Chronic kidney disease as a systemic inflammatory syndrome: Update on mechanisms involved and potential treatment [J].(), 2021, 11(5): 419.

[4] Kalantar-Zadeh K, Jafar T H, Nitsch D,. Chronic kidney disease [J]., 2021, 398(10302): 786-802.

[5] Brown E, Heerspink H J L, Cuthbertson D J,. SGLT2 inhibitors and GLP-1 receptor agonists: Established and emerging indications [J]., 2021, 398(10296): 262-276.

[6] Tanabe K, Jun W D, Sato Y. Targeting angiogenesis and lymphangiogenesis in kidney disease [J]., 2020, 16(5): 289-303.

[7] 謝統, 朱麗婷, 王如琰, 等. 程錦國基于腸-腎軸理論論治慢性腎臟病擷菁 [J]. 浙江中醫雜志, 2023, 58(5): 320-322.

[8] 饒向榮. 活血化瘀在慢性腎臟病治療中的應用 [J]. 中國中西醫結合雜志, 2022, 42(6): 666-668.

[9] 邵建彬, 張玉倩, 劉孟瑞, 等. 趙玉庸運用“通腎絡八法”治療慢性腎臟病經驗 [J]. 中醫雜志, 2022, 63(8): 714-719.

[10] Zeng X, Cai G Z, Liang T L,. Rhubarb andcapsule attenuates renal interstitial fibrosis in rats with unilateral ureteral obstruction by alleviating apoptosis through regulating transforming growth factor beta1 (TGF-β1)/p38 mitogen-activated protein kinases (p38 MAPK) pathway [J]., 2020, 26: e920720.

[11] 賈曉斌, 楊冰, 封亮, 等. 中藥藥劑學研究前沿:組分制劑技術基礎與關鍵科學問題[J]. 藥學學報, 2018, 53(12): 1943-1953.

[12] 花慧蓮, 凌亞, 李進冬. 基于mTOR通路的大黃素對腎小管上皮細胞轉分化的干預作用機制研究 [J]. 中國醫院藥學雜志, 2019, 39(17): 1729-1733.

[13] Guan Y, Wu X X, Duan J L,. Effects and mechanism of combination of Rhein and danshensu in the treatment of chronic kidney disease [J]., 2015, 43(7): 1381-1400.

[14] Zhou X T, Zou J J, Ao C,Renal protective effects of astragaloside IV, in diabetes mellitus kidney damage animal models: A systematic review, meta-analysis [J]., 2020, 160: 105192.

[15] 楊茹茜, 徐倩, 楊旖, 等. 黃芪甲苷對腎纖維化小鼠Toll/MyD88依賴性通路的作用研究 [J]. 中草藥, 2017, 48(18): 3775-3782.

[16] 謝臻, 周媛, 陳勇, 等. 配伍藥物與pH值環境對大黃蒽醌類成分溶出變化的影響規律 [J]. 中草藥, 2013, 44(24): 3476-3481.

[17] Xi Y H, Wang W H, Ma L,. Alendronate modified mPEG-PLGA nano-micelle drug delivery system loaded with astragaloside has anti-osteoporotic effect in rats [J]., 2022, 29(1): 2386-2402.

[18] Ashkar A, Sosnik A, Davidovich-Pinhas M. Structured edible lipid-based particle systems for oral drug-delivery [J]., 2022, 54: 107789.

[19] 崔鮮偉, 鄧桂明, 歐陽林旗, 等. 納米脂質體制劑提高苦參堿去活化肝星狀細胞作用研究 [J]. 藥物評價研究, 2021, 44(1): 63-69.

[20] Plaza-Oliver M, Santander-Ortega M J, Lozano M V. Current approaches in lipid-based nanocarriers for oral drug delivery [J]., 2021, 11(2): 471-497.

[21] Tan O J, Loo H L, Thiagarajah G,. Improving oral bioavailability of medicinal herbal compounds through lipid-based formulations - A scoping review [J]., 2021, 90: 153651.

[22] 馬祖兵, 李小芳, 謝龍, 等. 大黃素自微乳-微丸的制備及其體外評價 [J]. 中藥材, 2019, 42(1): 144-149.

[23] 仲粒, 李小芳, 廖艷梅, 等. 甘草黃酮自微乳化釋藥系統的制備及其質量評價 [J]. 中草藥, 2019, 50(13): 3044-3051.

[24] 樊麗雅, 胡麗, 張璐, 等. 苦杏仁苷自微乳的制備及理化性質的研究 [J]. 中國現代應用藥學, 2022, 39(4): 475-479.

[25] 王子禹, 劉洋, 張鑫, 等. 基于抗炎活性的葛根芩連片整體的中藥生物藥劑學分類系統研究 [J]. 中國中藥雜志, 2019, 44(17): 3662-3671.

[26] 覃紅萍, 魯靜, 林瑞超. HPLC-ELSD法測定黃芪藥材中黃芪皂苷I、II、III、IV [J]. 中草藥, 2009, 40(3): 471-473.

[27] 李東輝, 吳紅偉, 李國峰, 等. 大黃總多酚、總蒽醌含量測定及體外抗氧化作用的譜效關系研究 [J]. 天然產物研究與開發, 2022, 34(4): 541-552.

[28] 周超, 何軼, 林瑞超, 等. 黃芪4種皂苷提取物的制備及其在黃芪總皂苷含量測定中的應用 [J]. 中國實驗方劑學雜志, 2013, 19(22): 56-59.

[29] Chatterjee B, Hamed Almurisi S, Ahmed Mahdi Dukhan A,. Controversies with self-emulsifying drug delivery system from pharmacokinetic point of view [J]., 2016, 23(9): 3639-3652.

[30] Vithani K, Jannin V, Pouton C W,. Colloidal aspects of dispersion and digestion of self-dispersing lipid-based formulations for poorly water-soluble drugs [J]., 2019, 142: 16-34.

[31] 胡律江, 趙曉娟, 郭慧玲, 等. 基于大鼠在體單向腸灌流模型研究四制香附主成分腸吸收機制 [J]. 中華中醫藥雜志, 2021, 36(3): 1392-1396.

[32] 周樹瑤, 關延彬, 賈永艷, 等. 姜黃素自微乳釋藥系統的大鼠在體小腸吸收研究 [J]. 中成藥, 2017, 39(4): 825-828.

[33] 劉丹, 封亮, 宋婕, 等. 中藥組分整體生物藥劑學分類系統研究思路與策略[J]. 中草藥, 2017, 48(23): 4831-4835.

Preparation andintestinal absorption study ofetcomponents loaded self-microemulsion

HOU Yu, ZHU Lin, ZHANG Qi-bin, YE Xiao-feng, KE Qiao-ying, XU Zhi-shi, WEI Ying-hui

School of Pharmacy, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053, China

The present investigation focused on the formulation, preparation process and intestinal absorption characteristics of Dahuang (et, RRR)-Huangqi (, AR) components loaded self-microemulsion.The composition of the formula was screened through the solubility test, compatibility of the oil phase with emulsifier and co-emulsifier, and the quasi-ternary phase diagram. Particle size, polydispersion index (PDI) analysis and transmission electron microscopy (TEM) studies were used to evaluate the prepared self-microemulsion. Intestinal absorption of the microemulsion was characterized using rat single-pass intestinal perfusion technique.The optimized emulsion consists of Capmul MCM NF as an oil phase, polyoxyl castor oil EL-35 and ethylene glycol as an emulsifier and co-emulsifier respectively. The droplet size of RRR-AR components loaded microemulsion was (33.01 ± 0.12) nm with their PDI (0.10 ± 0.02), zeta potential (?10.10 ± 1.00) mV. As revealed by the observation under TEM, the microemulsion exhibited homogeneous dispersion and was a spherical emulsion droplet. The content of RRR total anthraquinone and AR total saponins was 6.29 mg/g and 8.80 mg/g, respectively. The microemulsion was stable at room temperature, without stratification or droplet change. Theaandappof RRR total anthraquinone in duodenum and jejunum were significantly higher than those in ileum segments. AR total saponins was well absorbed in all of the small intestine segments.A newly developed microemulsion exhibits high emulsification efficiency with high payload of RRR and AR components. The high intestinal absorption of RRR-AR components in all of the small intestine segments was observed by encapsulation in the emulsion, which is expected to improve the oral bioavailability of RRR-AR components.

rhubarb total anthraquinone; astragalus total saponins; self-microemulsion; prescription research; quasi-ternary phase diagram;-intestinal absorption

R283.6

A

0253 - 2670(2023)12 - 3815 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.12.008

2022-12-25

國家自然科學基金資助項目（81873018）；浙江省自然科學基金項目（LY21H280007）

侯 雨，女，碩士研究生，研究方向為中藥新劑型新技術研究。Tel: (0571)61768157 E-mail: houyu9794@163.com

通信作者：魏穎慧，女，博士，教授，博士生導師，研究方向為中藥新劑型新技術研究。Tel: (0571)61768157 E-mail: yhw_nn@zcmu.edu.cn

[責任編輯 鄭禮勝]