丹參酮IIA通過抑制miR-376b-5p降低急性心肌梗死大鼠致炎細(xì)胞因子分泌并減輕心肌損傷研究

胡月華，陳 強(qiáng)，邢海生，陳麗珠，郭曉華，任星星

丹參酮IIA通過抑制降低急性心肌梗死大鼠致炎細(xì)胞因子分泌并減輕心肌損傷研究

胡月華1，陳 強(qiáng)2*，邢海生3，陳麗珠2，郭曉華2，任星星2

1. 內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014000 2. 內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 心血管內(nèi)科，內(nèi)蒙古 包頭 014000 3. 內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 急診科，內(nèi)蒙古 包頭 014000

研究丹參酮IIA改善大鼠急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）作用機(jī)制。將SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、丹參酮IIA（5 mL/kg）組、miR-376b-5p mimics＋丹參酮IIA組和miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組，每組10只。除假手術(shù)組外，其他各組采用大鼠冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎法建立AMI模型，給予藥物干預(yù)12周后，qRT-PCR檢測大鼠心肌組織中基因表達(dá)；采用蘇木素-伊紅（HE）和Masson染色觀察心肌組織病理變化和纖維化程度；ELISA檢測血清炎癥因子水平；免疫組化檢測心肌組織中I型膠原蛋白（collagen type I，Col1）、III型膠原蛋白（collagen type III，Col3）和α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）表達(dá)；Western blotting檢測心肌組織中轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）/Smad和同源基因家族成員A（Ras homolog gene family member A，RhoA）/Rho相關(guān)螺旋卷曲蛋白激酶（Rho-associated coiled-coil-containing protein kinase，ROCK）信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心肌組織中miR-376b-5p表達(dá)和血清中白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平及磷酸肌酸激酶同工酶（creatine kinase-myocardial band，CK-MB）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）活性均顯著升高（＜0.05）；心肌細(xì)胞排列不齊，間隙大，可見明顯膠原纖維沉積；心肌組織Col1、Col3、α-SMA、TGF-β1、磷酸化Smad2/3（phosphorylated Smad2/3，p-Smad2/3）、RhoA、ROCK1/2和纖連蛋白（fibronectin，F(xiàn)N）蛋白表達(dá)均顯著升高（＜0.05），Smad7蛋白表達(dá)顯著降低（＜0.05）。與模型組比較，丹參酮IIA組和miR-376b-5p抑制劑＋丹參酮IIA組心肌組織細(xì)胞形態(tài)及纖維化程度得到明顯改善，血清中IL-1β、TNF-α水平和CK-MB、LDH活性顯著降低（＜0.05），心肌組織Col1、Col3、α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/3、RhoA、ROCK1/2和FN蛋白表達(dá)顯著降低（＜0.05），Smad7蛋白表達(dá)顯著升高（＜0.05）。丹參酮IIA可能通過抑制心肌組織中表達(dá)和TGF-β1/Smad、RhoA/ROCK信號通路活化，從而對AMI模型大鼠心室重構(gòu)起到保護(hù)作用。

丹參酮IIA；急性心肌梗死；miR-376b-5p；轉(zhuǎn)化生長因子-β1/Smad信號通路；RhoA/ROCK信號通路；炎癥反應(yīng)；心室重構(gòu)

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是由遺傳因素和環(huán)境因素共同作用引起的一種常見的心血管疾病，具有高患病率、高死亡率和高致殘率的特點(diǎn)，已超過癌癥成為威脅人類健康和生命最大的疾病[1-3]。目前臨床治療AMI方法雖取得一定療效，但AMI致死率和致殘率仍然很高，治療結(jié)果仍不理想。究其主要原因是AMI患者心室重構(gòu)導(dǎo)致患者心臟功能不可逆損害[4-5]。因此，目前迫切需要尋找抑制AMI患者心室重構(gòu)的新靶點(diǎn)及其藥物，為治療AMI提供新的臨床策略和思路。

微小RNA（microRNA，miRNA）是一類非編碼小分子RNA，是轉(zhuǎn)錄后水平基因表達(dá)調(diào)控過程中重要的調(diào)節(jié)因子。miRNA參與生物多種生理過程的調(diào)節(jié)，如細(xì)胞增殖、分化、凋亡等，且廣泛參與生命過程與疾病發(fā)生和發(fā)展[6-7]。miRNA還可參與心肌纖維化、心肌肥厚等心血管疾病的病理生理變化過程，促進(jìn)或抑制心肌細(xì)胞死亡，調(diào)節(jié)缺血后新血管形成。目前大量的miRNA被發(fā)現(xiàn)參與了心室重構(gòu)的發(fā)生發(fā)展過程，包括miR-144、miR-133、miR-99a、miR-30及miR-34等[8-9]。Pan等[10]發(fā)現(xiàn)M3亞型乙酰膽堿受體可通過抑制miR-376b-5p來發(fā)揮心肌保護(hù)作用。研究報(bào)道，iv miR-144能夠調(diào)控細(xì)胞自噬，降低纖維化，進(jìn)而對AMI小鼠心室重構(gòu)具有促進(jìn)作用[11]。炎癥反應(yīng)能引起AMI病理過程中的心室重構(gòu)。炎癥是AMI患者的心室重構(gòu)和心肌纖維化的主要病理機(jī)制之一。研究表明，心肌梗死后會(huì)導(dǎo)致內(nèi)源性免疫系統(tǒng)激活，導(dǎo)致炎性介質(zhì)的大量釋放，進(jìn)而促使炎性細(xì)胞的遷移，加速心肌細(xì)胞的再次損傷，釋放大量的炎性物質(zhì)，加速心肌組織纖維化和心肌細(xì)胞凋亡[12-13]。這為其他miRNA緩解或防治AMI小鼠心室重構(gòu)提供了理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

丹參酮IIA[14-15]靶向miRNA對多種心血管疾病頗具療效，這為治療AMI心室重構(gòu)提供了新的視角和機(jī)遇。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，miR-376b-5p在逆轉(zhuǎn)老年自發(fā)性高血壓大鼠大鼠左室重構(gòu)中發(fā)揮重要作用，且已證實(shí)過表達(dá)miR-376b-5p可消除丹參酮對自發(fā)性高血壓大鼠大鼠心室重構(gòu)的改善效果，表明miR-376b-5p表達(dá)是大鼠心室重構(gòu)重要途徑，這為miR-376b-5p在AMI大鼠心室重構(gòu)提供了研究基礎(chǔ)[16]。因此，miR-376b-5p可作為治療AMI大鼠心室重構(gòu)重要靶點(diǎn)。但miR-376b-5p調(diào)控AMI大鼠心室重構(gòu)具體機(jī)制尚不清楚。因此，本研究擬探究丹參酮IIA以及miR-376b-5p在改善AMI大鼠心室重構(gòu)中的作用及其作用機(jī)制。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SPF級雄性SD大鼠50只，8周齡，體質(zhì)量220～240 g，購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，合格證號SCXK（瀘）2020-0007。SD大鼠于內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心SPF級實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室飼養(yǎng)，每籠5只，溫度22～25 ℃，相對濕度60%～70%，自由進(jìn)食飲水。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號BYYFY-2022-0008）。

1.2 藥品與試劑

丹參酮IIA磺酸鈉注射液（批號H31022558）購自上海上藥第一生化藥業(yè)有限公司；腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）試劑盒（批號H052-1-1）、白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）試劑盒（批號H002-1-1）、磷酸肌酸激酶同工酶（creatine kinase-myocardial band，CK-MB）試劑盒（批號H197-1-1）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）試劑盒（批號A020-2-2）均購自南京建成生物科技有限公司；兔抗I型膠原蛋白（collagen type I，Col1）抗體（批號YT6135）、兔抗α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）抗體（批號YT5053）、兔抗SMAD家族成員2（SMAD family member 2，Smad2）抗體（批號YM3364）、兔抗Smad3抗體（批號YT4334）、兔抗磷酸化SMAD2（phosphorylated Smad2，p-Smad2）抗體（批號YP0362）、兔抗p-Smad3抗體（批號YP0585）、兔抗Smad7抗體（批號YN2330）、兔抗Rho相關(guān)螺旋卷曲蛋白激酶1（Rho-associated coiled-coil-containing protein kinase 1，ROCK1）抗體（批號YT4162）、兔抗ROCK2抗體（批號YT4163）、兔抗纖連蛋白（fibronectin，F(xiàn)N）抗體（批號YM3137）、兔抗轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）抗體（批號YT4632）、兔抗同源基因家族成員A（Ras homolog gene family member A，RhoA）抗體（批號YT4077）、鼠抗III型膠原蛋白（collagen type III，Col3）抗體（批號YM6374）、鼠抗β-actin抗體（批號YM3028）均購自ImmunoWay Biotechnology公司；HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG抗體（批號D110058）、HRP標(biāo)記的山羊抗鼠IgG抗體（批號D110087）、HRP標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液（批號D111054）、牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA，批號B600036）、BCA蛋白測定試劑盒（批號C503021）、二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）試劑盒（批號C520017）均購自上海生工生物工程（上海）股份有限公司；高表達(dá)miR-376b-5p的慢病毒載體購自上海譽(yù)宴生物技術(shù)服務(wù)中心；miR-376b-5p模擬物（miR-376b-5p mimics：F: 5’-GGGTGGATATTCC- TTCTA-3’，R: 5’-TTTGGCACTAGCACATT-3’）、miR-376b-5p抑制物（miR-376b-5p inhibitor：5’-AAACAUAGAAGGAAUAUCCACG-3’）由上海吉?jiǎng)P基因公司合成。

1.3 儀器

BH-2型光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司）；QuantStudio 6 Flex qRT-PCR儀（美國ABI公司）；MultiskanGo 1510型全波段酶標(biāo)儀（美國Thermo公司）；Power Pac 1645050型免疫印跡組件、TransBlotSD 1703940型垂直電泳轉(zhuǎn)印系統(tǒng)、Universal Hood-II型凝膠成像儀（美國Bio-Rad公司）。

2 方法

2.1 AMI大鼠模型建立、分組和給藥

SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分成假手術(shù)組、模型組、丹參酮IIA（5 mL/kg）組、miR-376b-5p mimics＋丹參酮IIA組和miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組，每組10只。采用大鼠冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎法構(gòu)建AMI大鼠模型，假手術(shù)組除不結(jié)扎外其余步驟均同造模組。AMI心室重構(gòu)模型成功后，丹參酮IIA組ig丹參酮IIA磺酸鈉注射液，1次/d，連續(xù)12周；miR-376b-5p mimics＋丹參酮IIA組和miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組分別先將大鼠轉(zhuǎn)染miR-376b-5p mimics載體和miR-376b-5p inhibitor載體，按上述造模方法構(gòu)建動(dòng)物模型，以標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，造模成功后ig丹參酮IIA磺酸鈉注射液，同時(shí)尾iv 0.1 mL miR-376b-5p mimics載體或miR-376b-5p inhibitor載體，1次/d，連續(xù)12周[16]。

2.2 ELISA檢測大鼠血清中炎癥因子水平

給藥結(jié)束后，按照Hou等[17]方法收集各組大鼠腹主動(dòng)脈血清，按照ELISA試劑盒說明書檢測血清中TNF-α、IL-1β水平和LDH、CK-MB活力。

2.3 大鼠心臟組織病理及纖維化程度觀察

處死大鼠，每組隨機(jī)選取5只大鼠摘取左心室，用4%多聚甲醛固定后分離并包埋在石蠟中，4 μm切片。隨后按照Shi等[18]方法將心臟樣本分別進(jìn)行蘇木素-伊紅（HE）染色和Masson染色，于顯微鏡下觀察并拍照，評估心臟組織病理變化和心肌細(xì)胞纖維化程度。

2.4 免疫組化檢測心肌組織Col1、Col3和α-SMA蛋白表達(dá)

取心肌組織切片，脫蠟、水化，滴加30 mol/L過氧化氫于室溫下孵育10 min；切片置于枸櫞酸鹽緩沖液中，95 ℃加熱10 min后室溫冷卻；用3%雙氧水孵育30 min，1% BSA孵育30 min，分別滴加兔抗Col1抗體（1∶300）、兔抗Col3抗體（1∶200）和兔抗α-SMA抗體（1∶200），37 ℃孵育1 h；然后在37 ℃下加入HRP標(biāo)記的二抗孵育1 h，利用DAB檢測免疫反應(yīng)活性。切片用蘇木素染色，利用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行拍照，采用Image J 13.0軟件測定染色陽性細(xì)胞吸光度（）值。

2.5 qRT-PCR檢測心肌組織miR-376b-5p表達(dá)

按照試劑盒說明書提取心肌組織總RNA并合成cDNA，進(jìn)行qRT-PCR分析。引物序列：上游引物5’-GGGTGGATATTCCTTCTA-3’，下游引物5’-TTTGGCACTAGCACATT-3’；上游引物5’-ACGGCAAGTTCAACGGCACAG-3’，下游引物5’-GACGCCAGTAGACTCCACGACA-3’。

2.6 Western blotting檢測心肌組織TGF-β1/Smad和RhoA/ROCK信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)

取各組大鼠心肌組織，加入RIPA裂解液提取蛋白，采用BCA蛋白測定試劑盒測定蛋白濃度。蛋白樣品經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)至PVDF膜，加入一抗4 ℃孵育過夜后，孵育二抗，采用凝膠成像儀拍照。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 結(jié)果

3.1 丹參酮IIA抑制AMI大鼠心肌組織中miR-376b-5p表達(dá)

如圖1所示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心肌組織中mRNA表達(dá)顯著升高（＜0.05）；與模型組比較，丹參酮IIA組和miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組心肌組織中mRNA表達(dá)水平顯著降低（＜0.05），且miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組mRNA表達(dá)量接近假手術(shù)組，miR-376b-5p mimics＋丹參酮IIA組mRNA表達(dá)水平無顯著差異，表明丹參酮IIA能夠顯著抑制AMI大鼠心肌組織中mRNA表達(dá)。

3.2 丹參酮IIA抑制AMI大鼠血清中TNF-α、IL-1β水平和CK-MB、LDH活性

如圖2所示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清中TNF-α、IL-1β水平和CK-MB、LDH活性均顯著升高（＜0.05）；與模型組比較，丹參酮IIA組和miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組血清中TNF-α、IL-1β水平和CK-MB、LDH活性均顯著降低（＜0.05），且miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組接近假手術(shù)組，miR-376b-5p mimics＋丹參酮IIA組以上指標(biāo)無顯著差異。

A-假手術(shù)組 B-模型組 C-丹參酮IIA組 D-miR-376b-5p mimics＋丹參酮IIA組 E-miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組 與假手術(shù)組比較：#P＜0.05；與模型組比較：*P＜0.05，下圖同

圖2 丹參酮IIA對AMI大鼠血清中IL-1β、TNF-α水平和CK-MB、LDH活力的影響(, n = 8)

3.3 丹參酮IIA改善AMI大鼠心肌組織形態(tài)變化

如圖3所示，HE染色可見假手術(shù)組大鼠心肌組織形態(tài)正常，心肌細(xì)胞排列規(guī)則、整齊、細(xì)胞間隙??；模型組大鼠心肌組織中心肌細(xì)胞排列紊亂，心肌纖維斷裂、細(xì)胞間隙大；丹參酮IIA組心肌組織的病理學(xué)變化得到了顯著改善；miR-376b-5p＋丹參酮IIA組心肌組織的病理改變較模型組并沒有明顯變化；miR-376b-5p抑制劑＋丹參酮IIA組心肌組織的病理改變接近假手術(shù)組，且較丹參酮IIA組的改善效果更佳，表明丹參酮IIA能夠抑制AMI大鼠心肌組織的病理改變。

Masson染色可見，假手術(shù)組大鼠心肌組織未見膠原纖維增多；模型組大鼠心肌組織有明顯的膠原纖維增生、沉積；丹參酮IIA組心肌組織膠原沉積明顯減少，顯示出丹參酮IIA對AMI大鼠心肌組織的保護(hù)作用。miR-376b-5p mimics＋丹參酮IIA組心肌組織膠原纖維沉積較模型組無明顯變化；miR-376b-5p抑制劑＋丹參酮IIA組心肌組織膠原纖維沉積接近假手術(shù)組，且較丹參酮IIA組的改善效果更佳，表明丹參酮IIA能夠抑制AMI大鼠心肌組織膠原纖維沉積形成。

3.4 丹參酮IIA降低AMI大鼠心肌組織Col1、Col3和α-SMA蛋白表達(dá)

如圖4所示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心肌組織中Col1、Col3和α-SMA蛋白表達(dá)均顯著升高（＜0.05）；與模型組比較，丹參酮IIA組和miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組心肌組織中Col1、Col3和α-SMA蛋白表達(dá)均顯著降低（＜0.05），且miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組接近假手術(shù)組，miR-376b-5p mimics＋丹參酮IIA組以上蛋白表達(dá)無顯著差異。

圖3 丹參酮IIA對AMI大鼠心肌組織的病理改變和纖維化程度的影響 (×400)

圖4 丹參酮IIA對AMI大鼠心肌組織中Col1、Col3和α-SMA蛋白表達(dá)的影響(×400; , n = 6)

3.5 丹參酮IIA調(diào)控AMI大鼠心肌組織中TGF-β1/SMAD和RhoA/ROCK信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)

如圖5所示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心肌組織中TGF-β1、p-Smad2/3、RhoA、ROCK1、ROCK2和FN蛋白表達(dá)水平均顯著升高（＜0.05），Smad7蛋白表達(dá)水平顯著降低（＜0.05）；與模型組比較，丹參酮IIA組和miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組心肌組織中TGF-β1、p-Smad2/3、RhoA、ROCK1、ROCK2和FN蛋白表達(dá)水平均顯著降低（＜0.05），Smad7蛋白表達(dá)水平顯著升高（＜0.05），miR-376b-5p mimics＋丹參酮IIA組以上蛋白表達(dá)無顯著差異。

圖5 丹參酮IIA對AMI大鼠心肌組織中TGF-β1/Smad和RhoA/ROCK相關(guān)蛋白表達(dá)的影響(, n = 6)

4 討論

AMI是一種嚴(yán)重的冠狀動(dòng)脈心臟病，每年死亡人數(shù)約占全球死亡人數(shù)的1/3；而心室重構(gòu)是AMI基本病理過程，會(huì)造成大量心肌細(xì)胞纖維化，導(dǎo)致心臟功能障礙，最終導(dǎo)致患者死亡[19-20]。研究表明，丹參酮IIA能夠可降低心肌細(xì)胞凋亡，逆轉(zhuǎn)AMI心肌細(xì)胞損傷[21-22]。本研究發(fā)現(xiàn)，丹參酮IIA能夠改善AMI模型大鼠心肌組織病理形態(tài)，減輕心肌組織纖維化程度的發(fā)生。心肌細(xì)胞凋亡和纖維化是心室重構(gòu)的一種重要病理改變，表明丹參酮IIA可以改善心肌纖維化和心肌損傷進(jìn)而抑制心室重構(gòu)。然而，當(dāng)同時(shí)給予AMI模型大鼠miR-376b-5p抑制劑時(shí)，AMI模型大鼠心肌組織表達(dá)顯著降低，心肌細(xì)胞凋亡和纖維化程度明顯改善，表明丹參酮IIA與miR-376b-5p抑制劑聯(lián)合應(yīng)用能夠明顯改善AMI模型大鼠心肌組織病理性改變。

在炎癥反應(yīng)中，IL-1β和TNF-α等炎性細(xì)胞因子是啟動(dòng)級聯(lián)炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵因素。細(xì)胞釋放IL-1β和TNF-α能誘發(fā)心肌細(xì)胞活力下降和凋亡，加速心肌組織分泌大量膠原蛋白和心肌纖維化，損傷心肌功能，誘發(fā)CK-MB和LDH的過表達(dá)，CK-MB和LDH是心肌損傷的重要標(biāo)志物，進(jìn)而造成心室重構(gòu)等[23-25]。研究表明，miRNA參與心室重構(gòu)的發(fā)生發(fā)展過程。本課題組前期已經(jīng)發(fā)現(xiàn)miR-376b-5p在逆轉(zhuǎn)老年自發(fā)性高血壓大鼠左室重構(gòu)中發(fā)揮重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)，丹參酮IIA能夠調(diào)節(jié)AMI模型大鼠心肌組織的表達(dá)，并能夠改善心肌組織細(xì)胞的形態(tài)，抑制AMI模型大鼠血清中IL-1β、TNF-α水平及CK-MB、LDH活力，減少心肌組織Col、Col3和α-SMA蛋白表達(dá)。然而，當(dāng)同時(shí)給予AMI模型大鼠miR-376b-5p抑制劑時(shí)，AMI模型大鼠的炎癥因子、心肌損傷標(biāo)志物、膠原蛋白和α-SMA蛋白表達(dá)同時(shí)降低，表明丹參酮IIA與miR-376b-5p抑制劑具有類似效果。

在心室重構(gòu)的生理過程和病理過程中，TGF-β1/Smad信號通路都發(fā)揮著重要作用[26]。TGF-β1能夠促進(jìn)組織纖維化，加速組織損傷。研究表明，Smad7是TGF-β1/SMAD信號通路的關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白。TGF-β1的磷酸化能夠促進(jìn)Smad2/3的磷酸化，進(jìn)而抑制SMAD7參與心室重構(gòu)[27-28]。同樣，RhoA/ROCK信號通路也是調(diào)控肌動(dòng)蛋白骨架的組裝、增殖、分化等過程的關(guān)鍵途徑。研究表明，心肌損傷后RhoA蛋白能夠介導(dǎo)機(jī)體ROS的產(chǎn)生，加速機(jī)體心肌細(xì)胞損傷的惡性循環(huán)，并能夠誘導(dǎo)核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）的活化，進(jìn)一步激活TGF-β1、IL-6等炎癥因子的分泌，又可加速TGF-β1/Smad信號通路的活化，加速惡性循環(huán)，導(dǎo)致大量炎癥因子堆積[29-30]。本研究顯示，丹參酮IIA能夠調(diào)節(jié)AMI大鼠心肌組織中TGF-β1/Smad和RhoA/ROCK 2條信號通路中相關(guān)蛋白的表達(dá)；當(dāng)同時(shí)給予AMI模型大鼠miR-376b-5p抑制劑時(shí)，AMI模型大鼠心肌組織中TGF-β1/SMAD信號通路和RhoA/ROCK信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)與僅給予丹參酮IIA結(jié)果一致。這表明丹參酮IIA改善AMI可能是通過調(diào)節(jié)的表達(dá)，進(jìn)而發(fā)揮作用的。

綜上，本研究聯(lián)合丹參酮IIA和miR-376b-5p抑制劑治療發(fā)現(xiàn)，丹參酮IIA和miR-376b-5p抑制劑具有類似效果，能夠抑制miR-376b-5p表達(dá)、心肌細(xì)胞損傷和纖維化，并能夠同時(shí)抑制機(jī)體炎癥、TGF-β1/Smad和RhoA/ROCK信號通路活化，進(jìn)而改善心室重構(gòu)。丹參酮IIA可能通過調(diào)節(jié)，在改善心室重構(gòu)過程中發(fā)揮重要作用。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Tanshinone ⅡA reduces secretion of inflammatory cytokines and alleviates myocardial injury in rats with acute myocardial infarction by inhibiting miR-376b-5p

HU Yue-hua1, CHEN Qiang2, XING Hai-sheng3, CHEN Li-zhu2, GUO Xiao-hua2, REN Xing-xing2

1. Baotou Medical College, Inner Mongolia University of Science and Technology, Baotou 014000, China 2. Department of Cardiovascular Medicine, the First Affiliated Hospital of Baotou Medical College, Inner Mongolia University of Science and Technology, Baotou 014000, China 3. Department of Emergency, the First Affiliated Hospital of Baotou Medical College, Inner Mongolia University of Science and Technology, Baotou 014000, China

To study the mechanism of tanshinone IIAin improving acute myocardial infarction (AMI) in rats.SD rats were randomly divided into sham operation group, model group, tanshinone IIA(5 mL/kg) group, miR-376b-5p mimics + tanshinone IIAgroup and miR-376b-5p inhibitor + tanshinone IIAgroup, with 10 rats in each group. Except sham operation group, AMI models were established by ligating the anterior descending coronary artery in rats in other groups. After 12 weeks of drug intervention, the expression ofgene in myocardial tissue of rats was detected by qRT-PCR. HE and Masson staining were used to observe the pathological changes and fibrosis degree of myocardial tissue. Levels of inflammatory factors in serum were detected by ELISA. The expressions of collagen type I (Col1), collagen type III (Col3) and α-smooth muscle actin (α-SMA) in myocardial tissue were detected by immunohistochemistry. Western blotting was used to detect transforming growth factor-β1 (TGF-β1)/Smad and Ras homolog gene family member A (RhoA)/Rho-associated coiled-coil-containing protein kinase (ROCK) signal pathway related protein expressions in myocardial tissue.Compared with sham operation group, the expression ofin myocardial tissue and levels of IL-1β, TNF-α, activities of creatine kinase isoenzyme (CK-MB) and lactate dehydrogenase (LDH) were significantly increased (< 0.05), myocardial cells were arranged irregularly, with large gaps, and obvious collagen fiber deposition could be seen; The expressions of Col1, Col3, α-SMA, TGF-β1, phosphorylated Smad2/3 (p-Smad2/3), RhoA, ROCK1/2 and fibronectin (FN) in myocardial tissues were significantly increased (< 0.05), and Smad7 protein expression was significantly decreased (< 0.05). Compared with model group, tanshinone IIAgroup and miR-376b-5p inhibitor + tanshinone IIAgroup significantly improved the cellular morphology and fibrosis degree of myocardial tissue, levels of IL-1β, TNF-α and activities of CK-MB, LDH in serum were significantly decreased (< 0.05), Col1, Col3, α-SMA, TGF-β1, p-Smad2/3, RhoA, ROCK1/2 and FN protein expressions in myocardial tissues were significantly decreased (< 0.05), p-Smad7 protein expression was significantly increased (< 0.05).Tanshinone IIAmay protect the ventricular remodeling in AMI model rats by inhibiting the expression ofand the activation of TGF-β1/Smad and RhoA/ROCK signal pathways in myocardial tissue.

tanshinone IIA; acute myocardial infarction; miR-376b-5p; TGF-β1/Smad signaling pathways; RhoA/ROCK signaling pathways; inflammation response; ventricular remodeling

R285.5

A

0253 - 2670(2023)12 - 3887 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.12.015

2023-03-14

包頭醫(yī)學(xué)院科學(xué)研究基金資助項(xiàng)目（BYJJ-ZRQM202226）

胡月華（1993—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)楣谛牟〉幕A(chǔ)研究。E-mail: 1362147495@qq.com

通信作者：陳 強(qiáng)，碩士生導(dǎo)師，副主任醫(yī)師，主要從事心血管相關(guān)研究。E-mail: 619016248@qq.com

[責(zé)任編輯 李亞楠]