分散固相萃取法-氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定含葉綠素較多蔬菜中148 種農(nóng)殘化合物

閆 玉

（遼寧省檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證中心，遼寧沈陽(yáng) 110000）

農(nóng)藥殘留是評(píng)價(jià)食品安全與否的重要指標(biāo)，但農(nóng)藥的使用也是保證農(nóng)業(yè)增產(chǎn)增收的重要手段[1]。農(nóng)作物的病害蟲(chóng)害多樣而復(fù)雜，這就需要使用不同功效的農(nóng)藥進(jìn)行防治。而為了降低種植過(guò)程中農(nóng)藥的噴施成本，現(xiàn)代農(nóng)藥多采用復(fù)配技術(shù)，通過(guò)一次噴灑來(lái)實(shí)現(xiàn)防治多種病蟲(chóng)害的效果[2-3]。為確保食品安全，需要對(duì)農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法提出更高的要求[4]。氣相色譜-質(zhì)譜法因靈敏度高、分離選擇性效果好而被廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥殘留檢驗(yàn)中[5]。但由于復(fù)配農(nóng)藥成分復(fù)雜，在同時(shí)檢測(cè)多組分農(nóng)藥殘留時(shí)，還要去除基質(zhì)干擾，確保多種化合物同時(shí)滿(mǎn)足其標(biāo)準(zhǔn)曲線現(xiàn)行要求及準(zhǔn)確性的要求，所以前處理方法的選擇顯得尤為重要[6]。在上機(jī)檢測(cè)前，需要通過(guò)前處理手段對(duì)試樣進(jìn)行提取、凈化等前處理，然后再上機(jī)檢測(cè)[7]。分散固相萃取法由于具有對(duì)農(nóng)藥化合物回溶性好、不需要活化處理、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于前處理過(guò)程中[8-9]。為考察分散固相萃取法對(duì)消除樣品基質(zhì)干擾的有效性，本實(shí)驗(yàn)選取葉綠素含量較高的菠菜作為空白基質(zhì)，采用QuEChERS 前處理方法，通過(guò)加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，對(duì)擬除蟲(chóng)菊酯、有機(jī)磷、氨基甲酸酯、有機(jī)氯等148 種農(nóng)藥殘留檢測(cè)結(jié)果的線性相關(guān)性、回收率和準(zhǔn)確度進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

菠菜，市售。

提 取 鹽（4 g MgSO4、1 g 檸 檬 酸 鈉、1 g NaCl、0.5 g 檸檬酸氫二鈉）；凈化試劑（900 mg MgSO4、150 mg D18C、150 mg 乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠）；乙腈（色譜純）；乙酸乙酯（色譜純）；0.22 μm 尼龍濾膜。

1.2 儀器設(shè)備

島津GCMS-TQ8050 氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，日本島津公司；BSA124S-CW 分析天平（感量0.000 1 g），德國(guó)賽多利斯；N1 型氮吹儀，屹堯科技；Heraeus Multifuge X1R 離心機(jī)，賽默飛世爾科技有限公司；A11 型勻漿器，德國(guó)IKA。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

1.3.1 混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（1.0 μg·mL-1）

準(zhǔn)確吸取10 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.50 mL于5 mL 容量瓶，加入乙酸乙酯溶解，稀釋至刻線處，配制成濃度為1.0 μg·mL-1的農(nóng)藥化合物混合標(biāo)準(zhǔn)中間液。

1.3.2 內(nèi)標(biāo)溶液的配制

（1）環(huán)氧七氯內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)貯備液（1.0 mg·mL-1）。準(zhǔn)確稱(chēng)取環(huán)氧七氯10.00 mg 標(biāo)準(zhǔn)品于10 mL 容量瓶中，用乙酸乙酯溶解，稀釋至刻度，配制成濃度為1.0 mg·mL-1的環(huán)氧七氯內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)貯備液。

（2）環(huán)氧七氯內(nèi)標(biāo)使用液（5.0 μg·mL-1）。準(zhǔn)確移取1.0 mg·mL-1環(huán)氧七氯內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.050 mL于10 mL 容量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，配制成濃度為5.0 μg·mL-1的環(huán)氧七氯內(nèi)標(biāo)使用液。

1.3.3 混合標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的制備

準(zhǔn)確移取0.05 mL、0.10 mL、0.50 mL、1.00 mL和2.00 mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（1.0 μg·mL-1），用乙酸乙酯定容至10 mL 的容量瓶中，配成5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1和200 ng·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。

1.3.4 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

準(zhǔn)確移取以上各濃度標(biāo)準(zhǔn)系列工作液1 mL，添加至經(jīng)提取、凈化、氮?dú)獯蹈刹襟E處理的5 份空白樣品殘?jiān)校偌尤霛舛葹?.0 μg·mL-1的環(huán)氧七氯內(nèi)標(biāo)使用液20 μL，渦旋均勻，制得濃度分別為5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1和200 ng·mL-1的系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。

以經(jīng)內(nèi)標(biāo)物定量離子峰面積校正過(guò)的化合物定量離子峰面積為縱坐標(biāo)、混合標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)量濃度的比值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4 前處理（QuEChERS 法）

稱(chēng)取10 g 均質(zhì)后試樣于50 mL 塑料離心管中（精確至0.01 g），加入10 mL 乙腈、4 g MgSO4、1 g 檸檬酸鈉、1 g NaCl、0.5 g 檸檬酸氫二鈉及1 顆陶瓷均質(zhì)子，劇烈振蕩1 min，4 200 r·min-1離心5 min。取上清液6 mL，加到內(nèi)含900 mg MgSO4、150 mg D18C、150 mg 乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠的離心管中。渦旋1 min，4 200 r·min 離心5 min，準(zhǔn)確吸取1 mL 上清液于試管中，40 ℃下水浴氮吹至近干。加入20 μL 濃度為5 μg·mL-1的環(huán)氧七氯內(nèi)標(biāo)使用液，1 mL 乙酸乙酯復(fù)溶，渦旋，過(guò)微孔濾膜，用于測(cè)定。

1.5 儀器條件

1.5.1 色譜條件

色 譜 柱：SH-Rtx-1701（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；柱溫：40 ℃保持1 min；以40 ℃·min-1升溫至120 ℃，保持0 min；以5 ℃·min-1升溫至240 ℃，保 持0 min；以12 ℃·min-1升 溫 至300 ℃，保 持10 min；進(jìn)樣口溫度：280 ℃；載氣速率（高純氦氣）：36.1 cm·s-1恒線速。

1.5.2 質(zhì)譜條件

接口溫度：280 ℃；離子源溫度：230 ℃；離子源：EI 源；掃描方式MRM[10]；進(jìn)樣量：1 μL。

1.6 回收率及精密度實(shí)驗(yàn)方法

準(zhǔn)確稱(chēng)取5.000 g 樣品6 份，分別加入混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（1.0 μg·mL-1）0.10 mL，經(jīng)過(guò)提取、QuEChERS凈化過(guò)程，同樣品處理，進(jìn)樣，測(cè)定回收率，計(jì)算RSD 值。

2 結(jié)果與分析

148 種化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性相關(guān)性、加標(biāo)回收率及RSD 值結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 148 種化合物曲線方程、相關(guān)系數(shù)、加標(biāo)回收率及RSD 值

由表1 可知，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)性均滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)要求，148 種化合物的曲線方程的相關(guān)系數(shù)均達(dá)到0.98 的要求。其中，141 種化合物曲線方程的相關(guān)系數(shù)≥0.995 0；8 種化合物的相關(guān)系數(shù)在0.988 5 ～0.994 7。

148 種化合物的加標(biāo)回收率在60.7%～129.1%，其中8 種化合物的加標(biāo)回收率在60.7%～78.7%，占比較少，回收率最低值為60.7%；97 種化合物的回收率在81.9 ～110%，回收效果好；31 種化合物的回收率在110.1%～119.5%，回收率處在高水平，可以考慮為萃取成分帶來(lái)的干擾和影響所致；12 種化合物的回收率超過(guò)了120%，超出回收率誤差范圍，會(huì)給實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性帶來(lái)影響，這12 種化合物中（二溴磷、對(duì)氧磷、抑霉唑、地胺磷、硫環(huán)磷、苯草醚、三氟硝草醚、苯硫磷、噠嗪硫磷、氟丙菊酯、速滅磷和脫葉磷），有7 種為有機(jī)磷化合物，可見(jiàn)該前處理法對(duì)部分磷基化合物的回收率有偏高影響。148種化合物的精密度在2.1%～12.8%，RSD值較小，結(jié)果重現(xiàn)性好。

3 結(jié)論

通過(guò)結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，分散固相萃取前處理方法在提取方面克服了固相萃取法的強(qiáng)吸附、不易洗脫的缺點(diǎn)；但對(duì)少部分有機(jī)磷成分存在一定的干擾性。結(jié)合《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》（GB 27404—2008）要求，該前處理方法適用于蔬菜中多農(nóng)藥殘留化合物檢驗(yàn)。