高效液相色譜法測定燒烤食品中苯并芘含量

2023-07-09 04:41:28李秋雨

食品安全導刊 2023年15期

李秋雨

（貴州檢測技術研究應用中心，貴州貴陽 550014）

年輕人越來越喜歡燒烤食品，燒烤味道濃郁、種類繁多、物美價廉。在高溫加熱過程中，食品會產生丙烯酰胺，溫度越高，就會產生越多的致癌物質[1]。動物實驗證明，丙烯酰胺對動物有致癌作用，但對人體是否有害目前還沒有定論。燒烤食品在熏烤中各種脂肪、蛋白質、糖類的降解及其產物之間發生了復雜的化學反應，產生了特殊的味道，形成一種比丙烯酰胺致癌性更強的物質——苯并芘[2]。《食品安全國家標準食品中苯并（a）芘的測定》（GB 5009.27—2016）中采用液相色譜法測定苯并（a）芘，燒烤食品成分復雜，苯并（a）芘的加標回收率低，結果難以重現，因此本文創建了一種可有效快速檢測燒烤食品中苯并（a）芘含量的方法[3-5]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

燒烤肉制品，市售；正己烷、二氯甲烷，分析純，天津市科密歐化學試劑有限公司；乙腈（色譜純），上海安譜實驗科技股份有限公司；苯并芘標準品（100 mg·L-1），上海安譜實驗科技股份有限公司；固相萃取儀，美國安捷倫科技有限公司；柱子（Bap分子印跡小柱，500 mg/6 mL），上海月旭科技公司；微孔濾膜（0.22 μm），上海月旭科技公司。

1.2 儀器與設備

SQP-Secura225D-1CN 型電子天平，賽多利斯科學儀器（北京）有限公司；SH250HP 型超聲機，上海科導超聲儀器有限公司；Agilent 1260 Infinity II 高效液相色譜儀、B100250 型多管渦旋混合器，上海月旭科技公司；Auto EVA-30Plus 型平行濃縮儀，睿科集團股份有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 標準溶液配制

配制1.0 μg·mL-1苯并芘標準中間液，吸取0.1 mL 的苯并芘標準品（100 mg·L-1），用乙腈定容至10 mL，避光保存，保存期1 個月。配制苯并芘標準工作液，分別吸取1.0 μg·mL-1的苯并芘標準中間液0.005 mL、0.050 mL、0.100 mL、0.200 mL 和0.500 mL，用乙腈定容至10 mL，得到0.5 ng·mL-1、5.0 ng·mL-1、10.0 ng·mL-1、20.0 ng·mL-1和50.0 ng·mL-1的標準曲線溶液，現用現配[6]。

1.3.2 苯并（a）芘含量的測定

稱取1 g（精準至0.001 g）已打碎均勻的燒烤食品于15 mL 離心管中，加入6 mL 正己烷，40 ℃下超聲提取15 min，待凈化。依次用5 mL 二氯甲烷、5 mL正己烷活化苯并芘專用小柱（BAP），加入待凈化液，再將2 mL 正己烷加入樣品中，渦旋1 min，將上清液加入BAP 柱子中，用5 mL 正己烷淋洗BAP 柱子，棄去所有廢液，然后加入6 mL 二氯甲烷洗脫，收集洗脫液到15 mL 試管中，將洗脫液在45 ℃氮氣下氮吹至近干。準確吸取1 mL 乙腈渦旋1 min，過0.22 μm微孔濾膜到進樣瓶中待測[7-8]。

1.3.3 儀器條件和參數

色譜柱：C18（250 mm×4.6 mm，5 mm）；柱溫：35 ℃；流動相：乙腈加水=80+20；熒光檢測器：激發波長為384 nm，發射波長為406 nm；流速：1.0 mL·min-1；進樣量：20 μL[6]。

1.3.4 回收率與精密度實驗

用燒烤肉制品作為實驗樣品，稱取樣品1 g，平行稱6 組，加入1.0 μg·mL-1的苯并(a)芘標準溶液10 μL、15 μL、20 μL，再加入5 mL 正己烷溶液，超聲15 min。分別用5 mL 二氯甲烷、5 mL 正己烷活化苯并芘專用小柱（BAP），倒入待凈化液，將2 mL 正己烷加入樣品中，渦旋1 min，投入BAP 柱子，棄去全部液體，用5 mL 正己烷溶液淋洗，加入6 mL 二氯甲烷洗脫，收集洗脫液，再抽干，45 ℃氮吹至近干。用1 mL 乙腈定容，過膜上機，根據上機結果計算樣品回收率和精密度[9-10]。

1.3.5 儀器重復性測試

取濃度為5.00 ng·mL-1、10.00 ng·mL-1、20.00 ng·mL-1的標準溶液分別進樣測試6 次，計算相對標準偏差（Relative Standard Deviation，RSD）。

2 結果與分析

2.1 色譜條件分析

研究乙腈加水為95+5、85+15、80+20 時的分離效果，當乙腈加水為80+20 時，苯并芘的峰和樣品基質有很好的分離效果，且色譜峰峰形好，成正態分布，苯并芘的出峰時間為8.537 min。在不同流動相的不同比例下，苯并芘的出峰色譜圖見圖1。

圖1 苯并芘的出峰色譜圖

2.2 樣品前處理方法分析

2.2.1 提取時間的選擇

選擇了超聲5 min、10 min、15 min 提取，按照1.3.2 對樣品進行處理，通過加標回收選擇提取時間，結果見表1。加標回收率提取15 min ＞提取10 min＞提取5 min，因此選擇提取15 min。

表1 不同提取時間提取苯并芘的回收率

2.2.2 定容試劑的選擇

選擇乙腈、乙腈加水（80+20）、甲醇3 種定容試劑定容，按照1.3.2 對樣品進行前處理，通過加標回收這3 種定容試劑，結果見表2。加標回收率乙腈＞乙腈+水（80+20）＞甲醇，因此選擇乙腈作為定容試劑。

表2 不同定容試劑中苯并芘的回收率

2.3 線性關系、檢出限及定量限

將配制好的苯并芘標準溶液進行色譜分析，根據預先設置好的色譜條件上機測定，得到不同濃度點下的色譜圖。根據圖2，得到苯并芘標準溶液的濃度X與峰面積Y之間的關系。結果顯示，苯并芘在10 min 內就可以完成檢測，且在0.5 ～50.0 ng·mL-1的標準濃度范圍內存在良好的線性關系，線性方程為y=185 480x-8 160.65，相關系數為0.999 9，信噪比S/N=3、S/N=10，苯并芘的檢出限為0.2 μg·kg-1，定量限為0.5 μg·kg-1[11]。