壯藥前列舒外洗劑質量標準研究

黃蓓 符軍 黃鴻敖 梁國成 韋世民

【摘 要】 目的：建立壯藥前列舒外洗劑質量標準，并進行洗劑的常規檢查。方法：對壯藥前列舒外洗劑進行最低裝量及微生物限度檢查；采用薄層色譜法鑒別壯藥前列舒外洗劑中姜黃、三叉苦；采用紫外可見分光光度法測定壯藥前列舒外洗劑總黃酮的含量。結果：壯藥前列舒外洗劑最低裝量、微生物限度檢查均符合2020年版《中國藥典》的相關規定；薄層色譜中，姜黃、三叉苦的特征斑點顯色清晰，分離效果好，陰性對照無干擾；以HCl-Mg法顯色，蘆丁為對照品，282 nm波長條件下測定，蘆丁在22.18～133.08 μg/mL濃度間呈良好的線性關系好（R2=0.9995，n=6），樣品平均回收率98.14%（RSD=1.04%，n=6）。結論：所建立的質量標準操作簡單、重復性好，可用于壯藥前列舒外洗劑的質量控制。

【關鍵詞】壯藥前列舒外洗劑；薄層色譜法；紫外可見分光光度法；質量標準

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2023）11-0040-05

Abstract：Objective To establish the quality standard of Zhuang Medicine Qianlieshu lotion and to conduct routine examination of the lotion.Methods The minimum quantity and microbial limit of Qianlieshu lotion were examined，and the turmeric and Trischia in Qianlieshu lotion were identified by Thin layer chromatography The content of total flavonoids in Qianlieshu lotion was determined by UV-Vis Spectrophotometer.Results the minimum loading and microbial limit of Qianlieshu lotion were in accordance with the relevant regulations of Chinese pharmacopoeia （2020 edition），and the characteristic spots of turmeric and trisporia were clearly displayed in TLC，HCl-Mg method was used for the determination of rutin at 282 nm wavelength，rutin showed a good linear relationship between the concentrations of 22.18-133.08μg/mL （R2=0.9995，n=6），and the average recovery was 98.14%（RSD=1.04%，n=6），it can be used for quality control of Qianlieshu lotion.

Keywords：Zhuang Medicine Qianlieshu External Lotion;Thin Layer Chromatography;Ultraviolet Visible Spectrophotometer;Quality Standard

壯藥前列舒外洗劑是廣西中醫藥大學附屬瑞康醫院藥物研發中心與男性科結合中醫藥理論和壯醫藥理論研制的用于治療慢性前列腺炎的壯藥制劑，用法為外用坐浴。該洗劑由馬鞭草、扛板歸、了哥王、三叉苦、半枝蓮、鬼針草、姜黃等九味壯藥材組成，具有清熱、祛濕、活血化瘀、緩解疼痛的功效，外洗可用于慢性前列腺炎的治療，臨床應用及實驗研究表明其具有確切的療效［1-4］。為控制制劑質量，研究采用薄層色譜法對其中姜黃、三叉苦進行定性鑒別，采用紫外可見分光光度法測定壯藥前列舒外洗劑總黃酮的含量，并對其進行最低裝量及微生物限度檢查，建立簡便可行的質量控制方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 WHF-205B可見透射紫外反射儀（上海精科實業有限公司）；CQ-250超聲波清洗劑（上海躍進醫用光學器械廠）；AL204電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）；GZX-DH-30×35電熱恒溫干燥箱（上海躍進醫療器械廠）；UV-1800PC紫外可見分光光度計（上海美譜達儀器有限公司）。

1.2 材料 姜黃素對照品（批號：110823-201706中國食品藥品檢定研究院）；三叉苦對照藥材（批號：121682-201301，中國食品藥品檢定研究院）；蘆丁對照品（批號：100080-201811，中國食品藥品檢定研究院）；水為自制純化水，其余試劑均為分析純。壯藥前列舒外洗劑（批號：20220104、20220107、20220111，廣西中醫藥大學附屬瑞康醫院藥物研發中心配制）。

2 方法與結果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 姜黃薄層鑒別 取壯藥前列舒外洗劑10 mL，濃縮至5 mL，加入50 mL三氯甲烷，超聲30 min后倒入分液漏斗中，待分層后取下層溶液，水浴蒸干，殘渣加2 mL三氯甲烷使溶解，作為供試品溶液。取缺姜黃陰性樣品，按供試品溶液制備方法同法制得缺姜黃陰性樣品溶液。另取姜黃素對照品，加無水乙醇制成每1 mL含0.5 mg姜黃素的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（2020年版《中國藥典》第四部通則0502）試驗［5］，吸取供試品溶液和陰性樣品溶液各7 μL、對照品溶液2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-三氯甲烷-甲醇-甲酸（2∶10∶0.7∶0.4）為展開劑，展開，取出，晾干，置365 nm紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑，陰性樣品無干擾。如圖1所示。

2.1.2 三叉苦薄層鑒別 取壯藥前列舒外洗劑15 mL，濃縮至2 mL，加入50 mL乙醇，加熱回流1 h，過濾，濾液蒸干，殘渣加純化水40 mL，超聲處理20 min，過濾，濾液用乙酸乙酯萃取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加2 mL甲醇使溶解，作為供試品溶液。取缺三叉苦陰性樣品，按供試品溶液制備方法同法制得缺三叉苦陰性樣品溶液。取三叉苦對照藥材粉末1 g，加50 mL乙醇，按供試品溶液制備方法同法制得三叉苦對照藥材溶液。照薄層色譜法（2020年版《中國藥典》第四部通則0502）試驗，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（5∶5∶1∶ 0.5）靜置30 min后的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置254 nm紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑，陰性樣品無干擾。結果如圖2所示。

2.2 總黃酮含量測定

2.2.1 對照品溶液和供試品溶液制備 精密稱取12.0 mg蘆丁對照品（供UV法測定，含量為92.4%）置50 mL容量瓶中，加入70%乙醇45 mL，超聲溶解后加70%乙醇至刻度，搖勻，制備成含量為0.2218 mg/mL的對照品溶液。精密量取1 mL壯藥前列舒外洗劑于50 mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，超聲1 h后加70%乙醇補足至刻度，振搖均勻，過濾，收集續濾液即為供試品溶液。

2.2.2 測定方法 取供試品溶液1 mL、對照品溶液 2 mL 置加有0.3 g鎂粉的具塞刻度試管中，將試管置冷水浴中緩慢滴加3 mL濃鹽酸，并不時振搖試管，最后加入70%乙醇至10 mL刻度處，沸水浴中加熱1 h，取出置冷水中迅速冷，用70%乙醇補足至10 mL，以試劑為空白，按照2020年版《中國藥典》紫外分光光度法立即在 200～700 nm掃描。結果供試品與蘆丁在 282 nm左右皆有最大吸收峰，且峰形對稱（如圖3所示），與查閱的文獻一致［6］，故選擇以蘆丁為對照品在282 nm處測定供試品吸光度。

2.2.3 線性關系考察 精密量取蘆丁對照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL，分別置于加有0.3g鎂粉的具塞刻度試管中，按2.2.2的方法測定吸光度Ａ，以蘆丁對照品的濃度（mg/mL）為橫坐標，以吸光度（A）為縱坐標，繪制標準曲線，得到標準曲線Y＝1.6475X-0.0003（R2=0.9995，n=6），結果表明蘆丁在 0.02218～0.13308 mg/mL范圍內呈良好線性關系（如圖4所示）。

2.2.4 精密度考察 取同一供試品溶液經2.2.2項方法處理后，在282 nm波長處重復測定吸光度6次，結果分別為：0.462、0.458、0.459、0.460、0.458、0.463，RSD =0.46%，表明儀器精密度良好。

2.2.5 重復性考察 取平行制備的供試品溶液6份，再分別精密吸取1 mL按2.2.2項下方法在282 nm處測定吸光度，結果分別為：0.460、0.448、0.459、0.451、0.466、0.450，RSD=1.55%，表明本方法重復性良好。

2.2.6 穩定性考察 取同一供試品測定液，放置0 min、30 min、60 min、90 min、120 min、180 min，后在282 nm波長處測定其吸光度，結果分別為：0.462、0.460、0.463、0.461、0.459、0.458，RSD=0.41%，說明供試品溶液在180 min內穩定性良好。

2.2.7 加樣回收率試驗 精密量取6份已知總黃酮含量（mg/mL）的供試品溶液各1 mL，再分別精密加入0.5mL的對照品溶液（ 0.2218 mg/mL），按2.2.2方法測定吸收度A，計算回收率。結果見表1。

2.2.8 樣品含量測定 取3批壯藥前列舒外洗劑各1 mL共6份，按2.2.1項制備供試品溶液，再取1 mL供試品溶液按2.2.2 項方法在282 nm波長處測定其吸光度，計算樣品中的總黃酮含量見表2。

2.3 最低裝量檢查 按照2020年版《中國藥典》四部通則0942“最低裝量檢查法”檢查3批壯藥前列舒外洗劑。取每批供試品各3瓶，將內容物轉移至預經標化的250 mL干燥量筒中。讀出每個容器內容物的裝量，并求其平均裝量，平均裝量應不少于標示裝量200 mL，每瓶裝量應不少于標示裝量的97%（194 mL），結果均符合規定。見表3。

2.4 微生物限度檢查

2.4.1 供試液制備 取壯藥前列舒外洗劑10 mL，加含5%聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，制成1∶10供試液。

2.4.2 檢查方法 依照2020年版《中國藥典》四部通則1105、1106 “非無菌產品微生物限度檢查方法”檢查。

2.4.3 需氧菌總數檢查 取1∶10供試液1 mL注皿，依法檢查。

2.4.4 霉菌和酵母菌總數 取壯藥前列舒外洗液原液1 mL注皿，依法檢查。

2.4.5 控制菌檢查 取1∶10供試液10 mL，接種至胰酪大豆胨液體培養基100 mL中，依法檢查金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌。

2.4.6 三批壯藥前列舒外洗劑的微生物限度檢查 按上述所建立的微生物限度檢查法，對三批壯藥前列舒外洗劑進行檢驗。結果見表4。

3 討論

3.1 薄層色譜研究 由于壯藥前列舒外洗劑由多種壯藥水提制成，成分多樣復雜，而且各種化學成分相互干擾的情況十分常見，再加上多種藥材含有相似的黃酮類成分，薄層鑒別過程中極易出現陰性干擾，阻礙了薄層鑒別研究進程。本實驗曾對方中杠板歸、了哥王、馬鞭草、絞股藍進行薄層色譜鑒別研究，均出現陰性干擾情況，姜黃、三叉苦的薄層色譜鑒別特征斑點顯色清晰，分離效果好，陰性對照無干擾，鑒別方法分離度好，穩定性高，可行性強。

3.2 顯色方法選擇 紫外分光光度法測定總黃酮含量常用的顯色法有直接測定法［7］、NaNO2-AlNO3-NaOH法［8-9］、AlCl3 法［10-11］、HCl-Mg法［6、12］等4種方法。實驗對比了以上幾種方法，結果表明，直接測定法試劑吸收峰與供試品吸收峰相鄰太近，影響大；NaNO2-AlNO3-NaOH 法中，供試品溶液加入4%NaOH溶液立即出現絮狀沉淀，且供試品溶液在對照品溶液的最大吸收波長處無吸收峰；AlCl3 法供試品溶液在對照品溶液的最大吸收波長處也無吸收峰；HCl-Mg法供試品溶液與蘆丁對照品溶液在282 nm左右有最大吸收，且峰形對稱，故選擇HCl-Mg法為壯藥前列舒外洗液總黃酮含量測定的顯色方法。

3.3 供試品溶液提取方法選擇 供試品溶液的提取方法曾選用超聲波提取法、回流提取法、正丁醇提取法進行比較，結果正丁醇提取法制備的供試液總黃酮含量較低，超聲提取和回流提取率差別不大，但超聲提取時間快，效率高，故選用超聲提取法。

3.4 壯醫理論基礎 壯醫認為毒邪是導致疾病發生的重要原因，慢性前列腺炎發病多為人體受到痧、瘴、毒、火、濕等邪毒侵犯，致天、人、地三氣同步失調，從而導致水道、氣道病變及龍路和火路功能失調，致咪隆（脾）、咪腰（腎）和咪疊（肝）三臟功能失常為主。基于壯醫理論對慢性前列腺炎的認識，廣西中醫藥大學附屬瑞康醫院研發了壯藥前列舒外洗劑對慢性前列腺炎患者進行熏洗治療，全方由馬鞭草、了哥王、杠板歸、三叉苦、絞股藍、姜黃等組成，方中三叉苦祛風濕、除濕毒；了哥王清熱解毒、消腫止痛、軟堅散結；杠板歸利水消腫；絞股藍清熱解毒、補脾益氣、調氣道；以上諸藥合用，作用于龍路、火路，疏通瘀滯，祛濕解毒，恢復“三道兩路”同步，從而達到治療目的。我院男性科自2011年以來，采用壯藥前列舒外洗方治療慢性前列腺炎，取得了很好的療效，將壯藥前列舒外洗方方開發成院內制劑，并制定其質量標準對推動民族壯醫藥特色療法治療慢性前列腺炎具有十分重要的意義。

綜上，研究旨在對壯藥前列舒外洗劑進行質量標準的研究，為該制劑的質量標準提供一定的科學依據，并將這一經驗方開發成院內制劑，以便將壯藥理論與臨床治療相結合，方便患者使用，為臨床治療慢性前列腺炎提供一種新的特色壯藥制劑。但因方中含有多味壯藥材，成分復雜，再加上多種藥材含有相似的黃酮類成分，干擾成分較多。研究采用薄層色譜法對姜黃、三叉苦進行定性鑒別，采用紫外可見分光光度法測定壯藥前列舒外洗劑總黃酮的含量，建立簡便可行的質量控制方法。今后研究可增加其他藥味的薄層色譜鑒別及主要藥效成分的含量測定，進一步完善壯藥前列舒外洗劑的質量標準。

參考文獻

［1］戴芳，陸智華，朱閩，等.壯藥前列舒外洗劑對ⅢA型前列腺炎患者相關細胞因子表達水平的影響［J］.西部中醫藥，2021（8）：136-138.

［2］朱閩，荀建寧，覃兆偉，等.壯藥前列舒外洗劑治療慢性前列腺炎的臨床研究［J］.西部中醫藥，2015，28（8）：57-59.

［3］朱閩，荀建寧，覃兆偉，等，壯藥前列舒外洗劑治療慢性前列腺炎的臨床觀察［J］.中國性科學，2014，23（9）：62-65.

［4］朱閩，荀建寧，覃兆偉.壯藥前列舒外洗劑治療Ⅲ型前列腺炎40例臨床觀察［J］.中國當代醫藥，2010，17（36）：57-58.

［5］國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（四部）［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2020：39-40.

［6］熱毛先，熱增才旦，周加本，等.藏藥甘青青蘭總黃酮含量測定方法對比研究［J］.中國民族醫藥雜志，2021（6）：49-51.

［7］胥秀英，吉光見稚代，石誠岑，等.紅花配方顆粒制備及總黃酮含量測定研究［J］.時珍國醫國藥，2020（1）：109-110.

［8］韋瑀龍，黃小鷗，藍曉慶.固本補腎口服液的總黃酮含量測定方法研究［J］.實用藥物與臨床，2016（10）：1287-1289.

［9］郝少君，李文俊，高延玲，等.復方黃櫨口服液中總黃酮含量測定方法［J］.實用醫藥雜志，2017（11）：1024-1026.

［10］張瑩，傅靜，王孝勛，等.把天門化學成分預試驗及其總黃酮含量測定［J］.湖北農業科學，2021（3）：137-140，192.

［11］張明，陳華國，趙超，等.杠板歸中總黃酮的含量測定［J］.中國實驗方劑學雜志，2012（18）：77-80.

［12］黨曉芳，曹颯麗，祁娟娟，等.鬼箭羽總黃酮含量測定方法的建立［J］.中國實驗方劑學雜志，2014（9）：96-98.

（收稿日期：2022-09-29 編輯：陶希睿）