甲氧西林耐藥及敏感金黃色葡萄球菌快速鑒定中梅里埃VTIEK MS 質譜儀的應用價值探究

陳卉，肖海娟

南京醫科大學康達學院附屬漣水縣人民醫院檢驗科，江蘇漣水 223400

金黃色葡萄球菌屬于臨床中比較常見的一種高病毒性致病菌，通過將多種細胞外毒素，如溶血素、腸毒素等釋放出來，而表現出比較強的致病力[1-2]。于社區獲得性感染或者醫源性感染等病灶中比較常見，除此以外，軟組織及皮膚感染也比較常見，也可以將其視為中毒性休克及敗血癥等疾病的致病菌。金黃色葡萄球菌被視為一種“超級病菌”，一旦感染后便會很難控制[3]。因此，及時且準確地對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（dumethicillinresistant staphylococcus aureus, MRSA）及甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（methicillin-sensitive staphylococcus aureus, MSSA）進行鑒定極為重要，并實時對MRSA 的流行情況展開監測，利于及時提供給臨床有效的治療方案及控制感染措施。由于質譜技術鑒定速度較快且具有極高的準確率，受到更多人的關注，且被更多醫務人員廣泛應用于細菌的快速鑒定及耐藥性研究[4-5]。為對質譜技術的應用效果展開進一步探究，本文共從2022年1 月—2023年1 月期間于南京醫科大學康達學院附屬漣水縣人民醫院檢驗科接受治療的患者中隨機選擇80 例作為研究對象，探究耐MRSA 及MSSA 快速鑒定中梅里埃VTIEK MS 質譜儀的應用價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

從本院收治的骨科患者中隨機選擇80 例作為研究對象，均接受迪爾96L 及藥敏板、梅里埃VITEK MS 質譜鑒定。男35 例，女45 例；年齡40～60歲，平均（50.25±3.17）周歲。本研究已通過本院倫理委員會審核。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①意識清晰者；②臨床資料完整者；③統一加入本研究并簽署知情同意書者。

排除標準：①診療依從性較差者；②患有嚴重臟器疾病者；③患有血液系統疾病者；④患有腫瘤疾病者；⑤患有傳染性疾病者。

1.3 方法

分離出致病菌后，采用全自動微生物鑒定和藥敏分析系統進行分析，最終確定金黃色葡萄球菌。所有樣本放在溫度為35℃的CO2溫箱內進行孵育，孵育時間為24 h。分別給予所收集到樣本同時使用DL-96llX 細菌藥敏檢定儀、梅里埃VITEK MS 質譜儀進行鑒定。

①挑取純菌落，涂布靶板，加基質液，放置于梅里埃VITEK MS 質譜儀中讀取，同時間觀察特征峰出現的峰值，并記錄。

②菌懸液制備：挑取純培養單個菌落于稀釋液瓶內壁研磨呈細菌懸液（0.5 M）。吸菌懸液50 μl，加至M-H 肉湯培養基內，充分混勻，繼續加入試劑板的其余各孔[所有抗菌藥物常規藥敏定量試驗（MIC）法測定試驗孔及生長對照孔C]，100 ul∕孔。用連續移液器（配無菌移液吸頭）吸取該菌懸液加入試劑板A1-A12 和B1-B10 孔內，100 ul∕孔。在A1～A3 孔分別滴加無菌石蠟油2 滴。撕開不干膠對齊貼于試劑板，35～37℃孵育24 h（個別生長緩慢者可延長至36～48 h）后判讀結果，將苯唑西林MIC 值≥4∕mL 作為MRSA 判定標準，苯唑西林MIC 值≤2∕mL作為MSSA 判定標準。

③將分離后得到的金黃色葡萄球菌菌株進行編號，利用無菌濾紙將其收集好，并放置于-80°C 冰箱內凍存。

1.4 觀察指標

采用布魯克公司所提供的Clinpro Tools（3.3.0版本）軟件建立模型并進行驗證。建立Clinpro Tools 模型，特異峰納入標準：所有菌株中，峰值分析分類值均超過70.00%、峰值強度超過2 000。對MRSA 及MSSA 特征圖譜重合率及峰質荷比展開分析。

1.5 統計方法

采用SPSS 26.0 統計學軟件對數據進行分析，計數資料采用[n(%)]表示，差異比較進行χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 梅里埃VITEK MS 質譜法與MIC 法對比

所有患者隨機分離出來80 株金黃色葡萄球菌，其中MRSA 42 株（52.50%），MSSA 38 株（47.50%）。分別從分離出來的金黃色葡萄球菌中抽取MRSA 22 株、MSSA 20 株，建立ClinPro Tools 模型，按照上述納入標準找出MRSA 主要特征峰質荷比，共找出兩個，即2 305.6 Da 和3 007.3 Da。利用其他的MRSA 20 株、MSSA 20 株驗證該模型。比對MIC 法，結果提示特征峰1 靈敏度為78.95%，特異度為76.19%；特征峰2 靈敏度為82.35%，特異度為73.91%；聯合兩點靈敏度為73.91%，特異度為82.35%，見表1。

表1 梅里埃VITEK MS 質譜法與MIC 法對比

2.2 MRSA 及MSSA 質譜峰圖分析

選擇梅里埃VITEK MS 質譜儀分析MRSA 及MSSA 所產生的質譜儀m∕z，質譜m∕z 為322 000、263 000 即金黃色葡萄球菌特征峰，MSSA 組質譜峰m∕z在2 637 時小于MRSA 組，MRSA 質譜峰m∕z 為4 308時大于MSSA 組，菌株不同MRSA 的質譜峰稍有差異，MRSA 標本菌株來源于分泌物、血及痰；MSSA標本菌株來源于血、分泌物。見圖1、圖2。

圖1 部分MRSA 及MSSA 在2 000～7 000 質譜峰圖

圖2 部分MRSA 及MSSA 在2 000～7 500 質譜峰圖

3 討論

金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌致病菌，極易誘發肺炎、化膿感染、偽膜性腸炎，甚至會誘發膿毒癥及敗血癥等全身感染[6]。于1961年，MRSA 首次被發現，感染幾乎遍及到全球，感染率也呈現出逐年增加趨勢[7]。近幾年，臨床中由于金黃色葡萄球菌所誘發的感染性疾病逐漸增多，抗生素的應用也更加廣泛，耐藥菌株也日益增多，尤其是MRSA 具備多重耐藥性，對臨床中比較常用的抗生素，如四環素、大環內酯類、氯霉素及氨基糖苷類等均存在比較明顯的耐藥性[8-10]。曾有文件介紹，MRSA 對所有β 內酰胺酶藥物均表現耐藥[11]。值得注意的是，誘發感染的金黃色葡萄球菌不但包含MRSA，還含有MSSA，兩種治療方式并不相同，合理應用抗生素可以促使耐藥菌的產生有所延緩[12-13]。既往傳統診斷病原菌微生物的方式存在流程復雜及耗時長等局限性，且診斷后也會產生一定的誤差概率，不僅會在判斷微生物中產生差錯事件，診療方案的制訂和臨床療效的判斷均會受到一定影響[14-15]。因此，對以金黃色葡萄球菌為代表的病原菌微生物診療方案展開制訂，臨床應用價值較為顯著[16]。質譜技術為臨床中應用最為廣泛的一種優質鑒定方式，其具備通量高、敏感性高及準確率高等特點，基于蛋白質峰值的差異展開細菌判讀，并將其廣泛應用于食物檢驗及臨床檢驗等各領域中[17]。本研究結果提示，患者隨機選擇分離出來80 株金黃色葡萄球菌，其中MRSA 42 株（52.50%），MSSA 38 株（47.50%）。分別從分離出來的金黃色葡萄球菌中抽取MRSA 22 株、MSSA 20 株，共找出兩個MRSA主要特征峰，即2 305.6 Da 和3 007.3 Da。利用其他的MRSA 20 株、MSSA 20 株驗證該模型。比對MIC 法，結果提示特征峰1 靈敏度為78.95%，特異度為76.19%；特征峰2 靈敏度為82.35%，特異度為73.91%；聯合兩點靈敏度為73.91%，特異度為82.35%。吳文強等[18]在其研究中選擇1 153 例患者作為研究對象，通過對患者體液、血液和壞死性組織樣本進行檢測，分離出致病菌，通過利用全自動微生物鑒定及藥敏分析系統確定為金黃色葡萄球菌，利用質譜儀鑒定分析細菌，與ClinPro Tools軟件建立模型聯合對MRSA 及MSSA 質譜圖之間的差異展開分析，結果顯示，1 153 例患者共分離出100 株金黃色葡萄球菌，其中MRSA 58 株（58.00%）、MSSA 42 株（42.00%），分別從分離出來的金黃色葡萄球菌中抽取MRSA 26 株、MSSA 19株，共找出兩個MRSA 主要特征峰，即2 305.6 Da和3 007.3 Da。利用其他的MRSA 32 株、MSSA 23株驗證該模型。比對MIC 法，結果提示特征峰1靈敏度為71.9%，特異度為82.6%；特征峰2 靈敏度為68.8%，特異度為87%，與本研究結果相似。結果提示，質譜對MRSA、MSSA 的鑒定價值良好，靈敏度高，且特異性較好。

綜上所述，MRSA 及MSSA 快速鑒定中，梅里埃VTIEK MS 質譜儀特異性更好，且靈敏度更高。