肺結核快速檢測技術在肺結核早期診斷中的作用分析

常斐，張建英

菏澤市傳染病醫院檢驗科，山東菏澤 274000

結核病（tuberculosis, TB）是臨床中一種常見的疾病，主要由結核分枝桿菌（mycobacterium tuberculosis, MTB）感染所致，而WHO 有關報道中指出每年新發TB 高達800 萬左右，其中死于肺結核（pulmonary tuberculosis, PTB）者高達300 萬左右，屬于嚴重危害人類健康的公共衛生問題[1]。PTB也是傳染性疾病，近年來本病在全球范圍內發病率均有升高，也是傳染病中最主要的一種致死因素，同時在我國本病發生率在局部地區有明顯升高趨勢[2]，需引起重視。對于PTB 而言，若能盡早及時、準確診斷及治療，可控制傳染源，避免PTB流行[3]。結核痰涂片法在結核病診斷中應用廣泛，主要是取患者痰液實施抗酸桿菌染色涂片鏡檢，不過從既往報道可以看出，此法檢出陽性率不高，而且即便是陰性也無法排除肺結核，須持續檢查≥3 次才能提高其診斷準確率[4]。Xpert MTB∕RIF法則是相對新穎的快速檢測技術，集樣品制備與擴增及檢測于一體，可自動化完成核酸擴增檢測，提高檢測靈敏度，減少非特異性擴增，從而提高特異度[5]。為了進一步探討PTB 快速檢測技術用于PTB 早期診斷中的作用，本次選擇2021年1 月—2022年12 月菏澤市傳染病醫院收治的疑似PTB 患者140 例進行研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇本院收治的疑似PTB 患者140 例為研究對象，男76 例，女64 例；年齡20～70 歲，平均（45.62±10.71）歲。本研究經本院醫學倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①入組對象有疑似PTB 癥狀與體征，如乏力、午后低熱、咯血等；②自愿配合本研究；③接受PTB 快速檢測技術進行早期診斷。

排除標準：①無典型影像學特征者；②已確診有肺結核感染者；③有嚴重心肝腎病變或惡性腫瘤者；④臨床資料不完整者；⑤精神疾病或配合度較差者。

1.3 方法

1.3.1 結核痰涂片法 采集檢查對象痰標本1 mL，置入尖底離心管（有蓋，50 mL），加少量生理鹽水與痰液標本混合，然后倒入干凈塑料管中，采取高壓滅菌，離心處理，時間15 min，速度3 000 r∕min，將上清液棄去，以接種環挑取沉淀物涂抹在載玻片上，制作成厚薄相當的涂片。涂片制作好后，采取改良-尼氏法抗酸染色與脫色及復染等處理，最后采用顯微鏡完成檢查，對100 視野進行觀察，若檢出3～9 條則判斷為陽性。

1.3.2 Xpert MTB∕RIF 法 采集檢查對象痰標本1 mL，置入尖底離心管（有蓋，50 mL），采集標本后將SR痰標本處理液2 mL 加入管內，旋緊前處理管，放于振蕩器內進行20～30 s 震蕩，震蕩結束，取下靜置15 min，保障痰標本能完全液化。處理后的痰標本取2 mL，經加樣孔將其加入Gene Xpert 反應盒，而反應盒則放于Gene Xpert 檢測模塊，實施自動檢測，經檢測系統窗口下對檢測結果直接觀察。結核痰涂片法檢出陽性痰標本，經上述方法測定MTB 對利福平的藥敏情況。

1.3.3 臨床最終診斷 用改良羅氏固體培養法嚴格根據標準化程序操作執行。

1.4 觀察指標

①將最終診斷結果作為金標準，分析結核痰涂片法的診斷結果。

②將最終診斷結果作為金標準，分析Xpert MTB∕RIF 法的診斷結果。

③比較兩種方法診斷效能，準確度=（真陽例數+真陰例數）∕總例數×100%，敏感度=真陽例數∕（真陽例數+假陰例數）×100%，特異度=真陰例數∕（真陰例數+假陽例數）×100%。

1.5 統計方法

采用SPSS 20.0 統計學軟件處理數據，計數資料以例數或(%)表示，進行χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 結核痰涂片法診斷結果

140 例疑似PTB 患者金標準證實PTB 有125 例、非PTB 有15 例，結核痰涂片法診斷PTB 有93 例、非PTB 有47 例，見表1。

表1 結核痰涂片法診斷結果

2.2 Xpert MTB/RIF 法診斷結果

Xpert MTB∕RIF 法診斷PTB 有110 例、非PTB 有30 例，見表2。

表2 Xpert MTB/RIF 法診斷結果

2.3 兩種檢測方法的診斷效能比較

Xpert MTB∕RIF 法診斷的靈敏度、準確度均高于結核痰涂片法，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 兩種檢測方法的診斷效能比較（%）

3 討論

MTB 是TB 的主要病原菌，也是人體重要的胞內病原微生物，感染機體后可侵犯全身器官，以肺部最為多見，即PTB[6]。我國是PTB 高發國，且耐藥現象普遍，導致這種情況的原因較多，比如缺乏高靈敏度的診斷技術，延誤診治[7]；金標準方法培養時間較長，比臨床診治需求滯后，從而造成耐藥TB 傳播風險增加[8]。基于此，如何快速完成檢測，為早期診斷提供依據，成為PTB 防治重點。傳統診斷技術中痰涂片法十分常用，可從形態學檢測病原菌，同時熒光定量聚合酶鏈反應技術（fluorescence quantitative polymerase chain reaction, FQ-PCR）在臨床中也被廣泛應用。這類方式診斷PTB 有著較高的特異度，但其敏感度不強，而影響特異性的主要是非結核分枝桿菌。FQ-PCR 在臨床應用中會受到樣本干擾物質的影響，在不同的檢驗樣本中敏感度不一，導致其臨床檢驗結果可能偶爾出現假陽性，同時與傳統痰涂片比較，價格也更昂貴，無法完全替代痰涂片法用于PTB 快速檢測中。此外，這兩種方法均有特異度高但敏感度低的特點，容易誤診或漏診，加上肺結核病確診依舊以培養法為主，但其耗時較長，為此為了確保快速獲取檢測結果，臨床上依舊以X 線片、結核痰涂片、熒光定量PCR 等技術進行診斷，避免早期延誤治療。近幾年，隨著臨床技術發展，Xpert MTB∕RIF 法作為WHO 新推薦的PTB 診斷快速檢測技術，可同時檢測MTB 及其利福平耐藥情況，成為研究熱點。

本研究結果顯示：140 例疑似PTB 患者經金標準證實：PTB 有125 例、非PTB 有15 例；結核痰涂片法診斷PTB 有93 例、非PTB 有47 例；Xpert MTB∕RIF 法診斷PTB 有110 例、非PTB 有30 例。Xpert MTB∕RIF 法診斷靈敏度、準確度均高于結核痰涂片法（85.60% vs 65.60%、85.00% vs 61.43%）（P＜0.05）。本研究結果與同類報道類似，曾松芳等[9]學者針對疑似PTB 患者200 例進行研究，收集痰標本，完成比例法藥敏試驗、改良羅氏固體培養、痰涂片抗酸染色鏡檢及Xpert MTB∕RIF 檢測，將改良羅氏固體培養結果作為金標準，Xpert MTB∕RIF 檢測法檢測MTB 敏感度為88.18%，而特異度為87.74%；以痰涂片抗酸染色法為金標準，Xpert MTB∕RIF 檢測法檢測MTB 敏感度為88.18%，特異度為100.00%；以比例法藥敏試驗為金標準，Xpert MTB∕RIF 檢測法測定利福平耐藥性敏感度為83.33%，特異度為100.00%。說明Xpert MTB∕RIF檢測法與其余3 種方法之間有良好的一致性，其診斷效能較高。Xpert MTB∕RIF 檢測法即結核分枝桿菌∕利福平耐藥實時熒光定量核酸擴增檢測法，這種檢測方法以全自動半巢式實時PCR 作為基礎，靶基因是rpoB 基因，2 h 內就可檢測MTB 及其利福平耐藥情況[10]。Xpert MTB∕RIF 法作為PTB 快速檢測技術，在臨床早期診斷PTB 中逐漸發展，這種檢測方法有全封閉的檢測系統，相關操作能自動化完成，而且污染小、人為干擾因素少，在既往臨床研究中也看出其診斷準確度高，檢測周期較短，利于早期快速診斷[11-12]。不過，Xpert MTB∕RIF法在國內起步較晚，其早期診斷是否明顯優于其他快速檢測技術有必要進一步探討。通過本次研究看出，相比傳統結核痰涂片而言，Xpert MTB∕RIF法有更高的陽性檢出率，同時診斷效能也更高[13-14]。結核痰涂片操作復雜，耗時較長，不利于早期診斷[15]。而Xpert MTB∕RIF 法是一種綜合檢測分析系統，包括樣本準確與定量PCR 擴增及熒光檢測法，其操作簡單方便，無需培訓，只需標本試劑盒加待檢樣本，系統可自動化完成相關操作，24 h 內便可獲取結果。同時，此法檢測期間有良好密閉性，無交叉感染風險[16]。

綜上所述，PTB 早期診斷中采取PTB 快速檢測技術可取得不錯的效果，但比較而言，Xpert MTB∕RIF 法比結核痰涂片可更好地檢出PTB 患者，而且其診斷靈敏度、準確度更高，值得于PTB 早期診斷中應用。