NUCB-2 在Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

王慧慧 李紅雨

（鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院婦科 河南鄭州 450000）

子宮內(nèi)膜癌（Endometrial Carcinoma）是一組上皮惡性腫瘤，起源于子宮內(nèi)膜，發(fā)病率逐年上升，2020 年中國(guó)子宮內(nèi)膜癌新發(fā)病例81 964 例，死亡病例16 607 例[1]。一般認(rèn)為子宮內(nèi)膜癌根據(jù)發(fā)病機(jī)制和生物學(xué)行為特點(diǎn)可分為雌激素依賴型（Ⅰ型）和非雌激素依賴型（Ⅱ型），雌激素依賴型子宮內(nèi)膜癌，即Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌絕大部分為子宮內(nèi)膜樣癌，預(yù)后較好，占子宮內(nèi)膜癌的75%～90%；非雌激素依賴型子宮內(nèi)膜癌，即Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌，包括透明細(xì)胞癌、癌肉瘤、漿液性癌等，預(yù)后較差[2]。子宮內(nèi)膜癌是最常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，好發(fā)于圍絕經(jīng)期和絕經(jīng)后女性，在子宮內(nèi)膜癌患者病程中腫瘤細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡及預(yù)后不良的重要因素[3]。子宮內(nèi)膜癌約占女性生殖道惡性腫瘤22%，是常見女性生殖系統(tǒng)的三大惡性腫瘤之一[4]，在歐美發(fā)達(dá)國(guó)家居首位，在中國(guó)女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的第二位，超過(guò)90%的子宮內(nèi)膜癌病例發(fā)生在圍絕經(jīng)期婦女，約25%發(fā)生在絕經(jīng)前[2]。

Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展與DNA 錯(cuò)配修復(fù)基因的異常有關(guān)，包括基因靜止、基因啟動(dòng)子超甲基化、基因失活[5]；肥胖、糖尿病、高血壓并稱為子宮內(nèi)膜癌三聯(lián)征[6]。臨床研究表明，子宮內(nèi)膜癌患者的發(fā)病年齡、病理學(xué)類型、病理分期等均與其預(yù)后有關(guān)，其中高齡、病情重的患者預(yù)后普遍更差[7]。因此，盡早明確診斷和給予有效治療是提高子宮內(nèi)膜癌患者生活質(zhì)量、延長(zhǎng)生存周期的有效手段。隨著臨床研究進(jìn)展，靶向治療和免疫治療在子宮內(nèi)膜癌的診斷、治療中表現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢(shì)。NUCB-2（Nucleoprotein-2）是一種富含酸性氨基酸的EF-手型鈣結(jié)合蛋白，于1994 年在急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞系中首次被發(fā)現(xiàn)[8]。NUCB-2 是一種癌癥相關(guān)基因，NUCB-2 高表達(dá)是癌癥發(fā)生和進(jìn)展的一個(gè)重要因素，NUCB-2的高表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，與乳腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、甲狀腺癌、膀胱癌、神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的不良結(jié)局相關(guān)[9]。Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率高，疾病負(fù)擔(dān)重。本研究通過(guò)組織病理及定量檢測(cè)Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌中NUCB-2 的表達(dá)，并對(duì)其臨床意義進(jìn)行探究。現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院婦科2021 年12 月至2022 年6 月收治的156 例患者為研究對(duì)象，依據(jù)子宮內(nèi)膜的病理結(jié)果分為四組，其中正常子宮內(nèi)膜組38 例、不伴有不典型增生性內(nèi)膜組30 例、不典型增生性內(nèi)膜組32 例、Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌56 例。本研究符合《赫爾辛基宣言》的相關(guān)要求，入組患者及家屬均知情同意，并簽署知情同意書。所有新鮮病理組織均于無(wú)菌條件下獲得，然后置于液氮中進(jìn)行低溫冷凍保存?zhèn)溆谩Ｊ占虢M患者的對(duì)應(yīng)子宮內(nèi)膜組織石蠟標(biāo)本進(jìn)行研究。所有病理組織閱片由2 位資深病理學(xué)專家獨(dú)立完成。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過(guò)（倫理編號(hào)：202300103）。依據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（Federation International of Gynecology and Obstetrics,FIGO）的FIGO 分 期（2009 年版）標(biāo)準(zhǔn)對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者進(jìn)行臨床分期。見表1。

表1 子宮內(nèi)膜癌2009 年FIGO 手術(shù)-病理分期

1.2 入組標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡＞18 歲；（2）無(wú)臨床病歷資料缺失；（3）研究前未接受其他相關(guān)腫瘤治療；（4）預(yù)期生存時(shí)間不少于3 個(gè)月。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）正參與其他研究者；（2）合并神經(jīng)系統(tǒng)病變者；（3）合并心、肝、腎等其他臟器嚴(yán)重病變者；（4）合并嚴(yán)重感染性疾病或免疫性疾病者；（5）伴有血液性疾病；（6）合并急性、慢性炎癥者；（7）研究過(guò)程中因各種原因退出或者失訪者。

1.3 檢測(cè)方法 應(yīng)用免疫組化SP 法檢測(cè)Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組織中NUCB-2 蛋白表達(dá)，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。NUCB-2 染色以細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕褐色顆粒或棕黃色為染色陽(yáng)性。根據(jù)每張切片的陽(yáng)性細(xì)胞率和陽(yáng)性細(xì)胞的染色深度分別進(jìn)行分級(jí)計(jì)分：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜5%計(jì)0 分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為6%～25%計(jì)1 分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為26%～50%計(jì)2 分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為51%～75%計(jì)3 分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞75%計(jì)4分；陽(yáng)性細(xì)胞不著色計(jì)0 分，淺棕黃色計(jì)1 分，棕黃色計(jì)2 分，深棕色計(jì)3 分。將陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和染色深度二者得分相乘，≥1 分為陽(yáng)性（+），0 分為陰性（－）。NUCB-2 在上皮細(xì)胞膜頂點(diǎn)表達(dá)為A 模式；在整個(gè)細(xì)胞膜表面或細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)為A/C 模式。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0 軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用%描述，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料用（）描述，進(jìn)行t檢驗(yàn)；采用Kaplan-Meier 法分析子宮內(nèi)膜癌患者NUCB2 表達(dá)與生存期的關(guān)系。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NUCB-2 在非子宮內(nèi)膜癌組織及Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá) NUCB-2 在非子宮內(nèi)膜癌患者組織中不表達(dá)。見圖1。在Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌患者中，NUCB-2 主要表達(dá)于Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組織細(xì)胞漿內(nèi)，呈棕黃色至棕褐色。見圖2。非子宮內(nèi)膜癌組織NUCB-2 陽(yáng)性表達(dá)率為8%，Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組NUCB-2 陽(yáng)性表達(dá)率為75%（P＜0.05）。NUCB-2 在不典型增生性內(nèi)膜組和不伴有不典型增生性內(nèi)膜組表達(dá)為A 模式，NUCB-2 在不典型增生性內(nèi)膜組和Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組表達(dá)為A/C 模式，組間差異顯著（P＜0.05）。見表2。

圖1 NUCB-2 在非子宮內(nèi)膜癌組織中陰性（×200）

圖2 NUCB-2 在子宮內(nèi)膜癌組織中陽(yáng)性（×200）

表2 NUCB-2 的表達(dá)比較[例（%）]

2.2 四組患者NUCB-2 蛋白陽(yáng)性率比較 正常子宮內(nèi)膜組、不伴不典型增生性內(nèi)膜組、不典型增生性內(nèi)膜組和Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組患者子宮內(nèi)膜病理組織的NUCB-2 蛋白表達(dá)情況比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，NUCB-2 蛋白在子宮內(nèi)膜癌患者組織中高表達(dá)（P＜0.05）。見表3。

表3 四組患者NUCB-2 蛋白陽(yáng)性率比較

2.3 Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組不同臨床病理特征的NUCB-2 蛋白表達(dá)情況 NUCB-2 蛋白陽(yáng)性表達(dá)情況與年齡、月經(jīng)狀態(tài)、腫瘤發(fā)生部位無(wú)關(guān)，與體質(zhì)量指數(shù)（BMI）、腫瘤分化程度、FIGO 分期有關(guān)（P＜0.05）。見表4。

表4 Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組不同臨床病理特征的NUCB-2 蛋白表達(dá)情況（例）

2.4 NUCB-2 蛋白陽(yáng)性表達(dá)與Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌患者生存曲線 NUCB-2 蛋白陽(yáng)性表達(dá)患者生存時(shí)間與陰性表達(dá)患者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖3。

圖3 NUCB-2 蛋白陽(yáng)性表達(dá)與Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌患者生存曲線

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是臨床常見的惡性腫瘤，隨著人們飲食習(xí)慣、生活習(xí)慣的不斷改變，子宮內(nèi)膜癌發(fā)病人群呈現(xiàn)出年輕化趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅女性健康[10～11]。腫瘤的發(fā)生發(fā)展是多因素相互作用和多基因變異積累的復(fù)雜過(guò)程，癌基因的過(guò)度激活、抑癌基因的滅活使大量遺傳和表觀遺傳學(xué)改變，導(dǎo)致正常細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞惡性發(fā)展[12]。因此，進(jìn)一步明確子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生機(jī)制，研究疾病演變病理生理過(guò)程，已成為亟待解決的問(wèn)題。基因檢測(cè)的廣泛應(yīng)用為子宮內(nèi)膜癌診斷和治療提供了新的方向，尤其是對(duì)中晚期局部及全身轉(zhuǎn)移的子宮內(nèi)膜癌患者，具有很大的潛在優(yōu)勢(shì)。

近年來(lái)，識(shí)別新的癌癥生物標(biāo)志物及其特征已成為癌癥研究的主要目標(biāo)。生物標(biāo)志物檢測(cè)有助于腫瘤明確診斷、監(jiān)測(cè)腫瘤疾病進(jìn)展、預(yù)測(cè)疾病復(fù)發(fā)和提高治療效率，可以在規(guī)范診治腫瘤性疾病的基礎(chǔ)上為患者定制個(gè)體化的治療措施。腫瘤免疫治療是近年來(lái)繼手術(shù)治療、化學(xué)治療和放射治療后的第4種腫瘤治療模式[13]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，NUCB-2 是一種新的腫瘤相關(guān)蛋白，參與了許多細(xì)胞內(nèi)過(guò)程的調(diào)節(jié)，包括食物攝入、葡萄糖代謝以及免疫、心血管和內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)節(jié)[14]，有助于腫瘤疾病的診斷、監(jiān)測(cè)腫瘤疾病進(jìn)展、預(yù)測(cè)疾病復(fù)發(fā)和評(píng)估治療效果[9]。增殖是所有惡性腫瘤細(xì)胞最終的特性之一，研究發(fā)現(xiàn)，在786-O（人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞）腎癌細(xì)胞系中下調(diào)NUCB-2 蛋白基因表達(dá)，可停止在細(xì)胞分裂周期的S 期，從而抑制細(xì)胞增殖[15]。本研究數(shù)據(jù)顯示，從正常子宮內(nèi)膜→不伴不典型增生→不典型增生→Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌，NUCB-2 表達(dá)A/C 模式逐漸增多，且表達(dá)信號(hào)有逐漸增強(qiáng)表現(xiàn)。NUCB-2 表達(dá)A/C 模式在不典型增生性內(nèi)膜組中表達(dá)相較于正常子宮內(nèi)膜組、不伴不典型增生性內(nèi)膜組中更高，在Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組中高于不伴不典型增生性內(nèi)膜組、不典型增生性內(nèi)膜組。表明NUCB-2 在促進(jìn)Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌病情發(fā)生發(fā)展過(guò)程中存在一定作用，可能參與子宮內(nèi)膜組織癌變進(jìn)程中的早期事件。

為了評(píng)價(jià)NUCB-2 在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中的作用，有研究將NUCB-2 敲除細(xì)胞注射到裸鼠中，結(jié)果顯示注射NUCB-2 敲除細(xì)胞組的腫瘤體積明顯小于對(duì)照組[14]。另有研究研究發(fā)現(xiàn)，22%的子宮內(nèi)膜癌中檢測(cè)到NUCB-2，且顯著高于非腫瘤性子宮內(nèi)膜腺體，該蛋白與增殖的Ki-67 標(biāo)記物呈正相關(guān)，單因素分析研究顯示，NUCB-2 狀態(tài)是無(wú)病生存和癌癥特異性生存的獨(dú)立預(yù)后因素。以上研究均表明，NUCB-2 的表達(dá)與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，可以作為惡性腫瘤性疾病潛在的治療靶點(diǎn)，為惡性腫瘤疾病的治療提供新的方法和途徑。

本研究通過(guò)免疫組化法檢測(cè)了NUCB-2 在不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)，并通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌患者的NUCB-2 表達(dá)率顯著高于非子宮內(nèi)膜癌（P＜0.05），且BMI 高的患者NUCB-2 表達(dá)率更高，病理提示為中低分化患者的NUCB-2 的表達(dá)率高于高分化的患者，F(xiàn)IGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期的患者NUCB-2 表達(dá)率顯著高于FIGO 分期為Ⅰ、Ⅱ期的患者，NUCB-2 陽(yáng)性表達(dá)的Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌患者生存期小于NUCB-2陰性表達(dá)的子宮內(nèi)膜癌患者（P＜0.05）。該結(jié)果進(jìn)一步提示Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組織中NUCB-2 的表達(dá)與Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生以及惡性進(jìn)展相關(guān)，可以用于Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌的監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)展及治療效果的評(píng)估。

綜上所述，NUCB-2 具有獨(dú)特的結(jié)構(gòu)及相應(yīng)的功能，是一種新近發(fā)現(xiàn)的、與惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)記物。NUCB-2 的表達(dá)在與Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，其表達(dá)水平對(duì)Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌的前期預(yù)防、診斷和鑒別診斷、治療效果監(jiān)測(cè)和預(yù)后評(píng)估都有一定幫助，可對(duì)早期Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌患者進(jìn)行更加明確的診斷，可作為Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌新的潛在治療靶點(diǎn)，為Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌的治療提供新的思路和途徑。但是目前關(guān)于NUCB-2 在Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的具體機(jī)制，仍需要進(jìn)一步詳細(xì)的研究。本研究因條件限制入組的病例數(shù)相對(duì)較少，缺少隨訪數(shù)據(jù)以及與相關(guān)腫瘤標(biāo)記物的相關(guān)性研究，因此研究結(jié)果有待在進(jìn)一步深入探究及在多中心大規(guī)模研究中完善。