血清長基因間非編碼RNA00511、微RNA-515-5p在子宮內膜癌中表達與臨床病理特征及預后的關系

王麗娟，吳文，林秀芬

作者單位：1海南醫學院第二附屬醫院婦產科，海南 海口 571100；

2文昌市人民醫院婦產科，海南 文昌 570000

子宮內膜癌在婦科癌癥中較為常見，其發病年齡逐漸趨于年輕化［1］。子宮內膜癌根據臨床病理特征可分為低風險或中等風險類別，低級別、早期的子宮內膜樣子宮內膜癌病人總體預后良好，然而仍有部分病人會出現局部或遠處復發，這些病例的早期識別仍具有挑戰性［2］。長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）及微RNA（microRNA，miRNA）均是不編碼蛋白質的RNA，參與子宮內膜癌的發生發展［3］。長基因間非編碼RNA00511（long intergenic non-coding RNA 00511，LINC00511）是一種lncRNA，在多種腫瘤發生發展中異常高表達［4-5］。前期生物信息學網站分析發現LINC00511 與微RNA-515-5p（microRNA-515-5p，miR-515-5p）存在靶向結合位點，因此本研究通過檢測子宮內膜癌病人血清LINC00511 與miR-515-5p 表達水平，探討二者與臨床病理特征及預后的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集海南醫學院第二附屬醫院2017年3月至2019年2月住院行手術治療的子宮內膜癌病人（子宮內膜癌組）82 例，病人年齡范圍為20~72 歲，年齡（60.10±9.72）歲。收集整理子宮內膜癌組年齡、絕經狀態、病理類型、組織分化程度、腫瘤長徑、肌層浸潤深度、淋巴結轉移、臨床分期、手術方式、術后是否進行輔助放化療等臨床資料。同時收集子宮內膜不典型增生病人（不典型增生組）67例及健康體檢者（對照組）79例，不典型增生組年齡范圍為21~73 歲，年齡（60.25±8.89）歲；對照組年齡范圍為20~75歲，年齡（60.79±8.92）歲。

納入標準：①子宮內膜癌和子宮內膜不典型增生分別符合其診斷標準［6-7］，均經病理證實；②研究對象年齡均>18 周歲，資料完整且配合度高；③首次確診，所有病人術前未進行放化療及其他抗腫瘤治療；④病人或其近親屬知情同意，符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求。排除標準：①有肝腎等臟器實質性病變者；②伴有呼吸系統疾病、急慢性感染性疾病及自身免疫系統缺陷性疾病者；③伴有除子宮內膜外的第二原發惡性腫瘤者。

1.2 方法

1.2.1 實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈式反應（qRTPCR）檢測血清LINC00511、miR-515-5p 表達水平采集研究對象確診后24 h 內肘靜脈血樣，靜置后離心15 min（離心轉速為3 000 r/min）收集血清，保存至?80 ℃冰箱。取出凍存的血清按照Trizol 試劑盒（上海研謹生物科技有限公司）說明書操作分離提取血清總RNA，并采用反轉錄試劑盒（北京伊塔生物科技有限公司）反轉錄合成cDNA，于qRT-PCR 儀上進行反應，并進行CT 值（循環閾值）分析，LINC00511、miR-515-5p 相對表達量計算公式為2?ΔΔCt，內參分別為GAPDH、U6，引物經軟件設計后由上海生工生物工程有限公司合成，引物序列見表1。qRT-PCR 反應總體系為20 μL，反應程序設置為：95 ℃、5 min；95 ℃、15 s，60 ℃、60 s，40個循環。

表1 qRT-PCR引物序列

1.2.2 隨訪自術后起開始隨訪82 例子宮內膜癌病人，病人均未失訪，隨訪率為100%，隨訪內容包括了解病人疾病復發及生存情況。隨訪截止日期為2022年2月，終點為隨訪結束（3年）或病人死亡。

1.3 統計學方法數據采用SPSS 25.0 軟件包分析。計量資料服從正態分布以表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，三組比較采用單因素方差分析，進一步組間兩兩比較采用SNK-q檢驗；采用Pearson 相關分析子宮內膜癌病人血清LINC00511與miR-515-5p 表達水平的相關性；采用Kaplan-Mei?er 法分析子宮內膜癌病人血清LINC00511、miR-515-5p 表達水平與預后的關系，生存率比較采用log-rank 檢驗；多因素Cox 回歸分析影響子宮內膜癌病人預后的因素。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組血清LINC00511、miR-515-5p 表達水平比較子宮內膜癌組血清LINC00511表達水平明顯高于不典型增生組、對照組，miR-515-5p 表達水平明顯低于不典型增生組、對照組（P<0.05）。不典型增生組血清LINC00511 表達水平明顯高于對照組，miR-515-5p 表達水平明顯低于對照組（P<0.05）。見表2。

表2 各組血清LINC00511、miR-515-5p表達水平比較/

表2 各組血清LINC00511、miR-515-5p表達水平比較/

注：①與對照組比較，P<0.05。②與不典型增生組比較，P<0.05。

?

2.2 子宮內膜癌病人血清LINC00511、miR-515-5p表達水平與臨床病理特征的關系不同年齡、絕經狀態、病理類型、組織分化程度、腫瘤長徑、手術方式、術后輔助放化療的子宮內膜癌病人血清LINC00511、miR-515-5p 表達水平比較，差異無統計學意義（P>0.05）。肌層浸潤深度≥1/2、有淋巴結轉移、臨床分期Ⅲ~Ⅳ期的子宮內膜癌病人血清LINC00511 表達水平明顯較高，miR-515-5p 表達水平明顯較低（P<0.05）。見表3。

表3 子宮內膜癌病人血清LINC00511、miR-515-5p表達水平與臨床病理特征的關系/

表3 子宮內膜癌病人血清LINC00511、miR-515-5p表達水平與臨床病理特征的關系/

?

2.3 子宮內膜癌病人血清LINC00511 與miR-515-5p表達水平的相關性Pearson相關分析結果顯示，子宮內膜癌病人血清LINC00511 與miR-515-5p 表達水平呈負相關（r=?0.48，P<0.05）。見圖1。

圖1 子宮內膜癌病人血清LINC00511與miR-515-5p表達水平的相關性

2.4 子宮內膜癌病人血清LINC00511、miR-515-5p表達水平與預后的關系以子宮內膜癌病人血清LINC00511（2.59）、miR-515-5p（0.43）表達水平的中位數為臨界值，將子宮內膜癌病人分為LINC00511高表達42 例，LINC00511 低表達40 例；miR-515-5p高表達41 例，miR-515-5p 低表達41 例。采用Ka?plan-Meier 法分析子宮內膜癌病人血清LINC00511、miR-515-5p 表達水平與預后的關系，結果顯示，子宮內膜癌病人血清LINC00511 高表達病人3 年生存率（29/42，69.05%）低于LINC00511 低表達病人（37/40，92.50%）（χ2=7.16，P<0.05）；miR-515-5p 高表達病人3 年生存率（39/41，95.12%）高于miR-515-5p 低表達病人（27/41，65.85%）（χ2=11.18，P<0.05）。

2.5 子宮內膜癌病人預后的影響因素分析將子宮內膜癌病人3 年內是否死亡作為因變量，將LINC00511、miR-515-5p、年齡、肌層浸潤深度、淋巴結轉移、臨床分期、手術方式、術后輔助放化療作為自變量進行多因素Cox 回歸分析，結果顯示，LINC00511、臨床分期是子宮內膜癌病人3年內死亡的獨立危險因素（P<0.05），miR-515-5p 是子宮內膜癌病人3年內死亡的保護因素（P<0.05）。見表4。

表4 子宮內膜癌病人預后的多因素Cox回歸分析

3 討論

子宮內膜癌多數為腺癌，且最常見的為子宮內膜樣腺癌，其主要影響絕經后婦女，低于45 歲以下的女性中并不常見［8-9］。本研究確診的82 例子宮內膜癌病人中，子宮內膜樣腺癌占74.39%（61/82），絕經后女性占73.17%（60/82），與既往文獻基本一致。盡管目前外科治療使許多早期子宮內膜癌病人預后良好，但晚期或出現轉移病人的5 年生存率仍呈降低趨勢［10-11］。尋找子宮內膜癌發生發展中關鍵基因的表達異常，是近些年來子宮內膜癌研究的熱點。

LINC00511 被廣泛證實為一種促癌基因，可通過高表達誘導癌細胞增殖、遷移及侵襲等許多惡性生物學行為，且與癌癥預后有關［12-15］。但對于LINC00511 在子宮內膜癌中的研究仍未見相關報道。本研究結果顯示，LINC00511 在子宮內膜癌中顯著高表達，且肌層浸潤較深、發生淋巴結轉移、臨床分期越高的病人LINC00511表達上升越明顯。提示LINC00511 在子宮內膜癌中發揮促癌基因作用，其可能通過高表達參與子宮內膜癌的發生發展，但目前具體機制尚不明確，推測可能與其促進腫瘤細胞惡性增殖有關。此外，本研究中子宮內膜癌病人血清miR-515-5p 低表達，且與LINC00511 呈顯著負相關。Qiao 等［16］研究結果顯示，LINC00673 可充當miR-515-5p 的海綿來上調微管親和調控蛋白激酶4表達，進而在乳腺癌中發揮促癌作用。基于既往研究結果，推測LINC00511 在子宮內膜癌中發揮促癌作用可能是通過調控miR-515-5p 及相關蛋白表達而實現的，有待今后基礎研究證實。部分研究［17-18］顯示，治療方式、臨床分期、淋巴結轉移、肌層浸潤深度等均有可能是影響子宮內膜癌病人預后的因素，而本研究結果中僅LINC00511、miR-515-5p、臨床分期與3 年生存率有關，且是影響子宮內膜癌病人預后的獨立因素。表明LINC00511、miR-515-5p的檢測水平異常可提示子宮內膜癌病人不良預后，二者有可能成為評估病人預后的生物標志物。與既往研究的差異可能與研究納入樣本量、地域、納入樣本時因納入排除標準而產生的選擇偏倚等因素有關，今后將僅進一步納入更多樣本量進行驗證。

綜上，子宮內膜癌病人血清LINC00511高表達，miR-515-5p 低表達，二者與肌層浸潤深度、淋巴結轉移、臨床分期及預后有關。LINC00511、miR-515-5p 可能成為新的子宮內膜癌腫瘤標志物，但在子宮內膜癌診斷、治療及預后評估中的具體臨床應用價值仍有待大樣本研究驗證。且本研究隨訪時間相對較短，需深入研究得出更為準確的結論。