土家藥竹節參多糖通過Nrf2-ARE信號通路對四氯化碳致大鼠急性肝損傷的抗氧化保護作用

唐 浪，宋添力，吳廣陽，王一民，石廷玉，劉 緒，黃 勝

? 藥理與臨床?

土家藥竹節參多糖通過Nrf2-ARE信號通路對四氯化碳致大鼠急性肝損傷的抗氧化保護作用

唐 浪，宋添力#，吳廣陽，王一民，石廷玉，劉 緒，黃 勝*

湖北民族大學醫學部，湖北 恩施 445000

基于核因子E2相關因子2（nuclear factor E2 related factor 2，Nrf2）-抗氧化反應元件（antioxidant response element，ARE）信號通路研究竹節參多糖（polysaccharide）保護四氯化碳（carbon tetrachloride，CCl4）所致大鼠急性肝損傷的作用機制。通過CCl4間隔誘導法建立急性肝損傷大鼠模型，給予水提醇沉法制備的竹節參多糖治療7 d后取材，通過蘇木素-伊紅（HE）染色觀察肝組織病理變化；全自動生化儀檢測大鼠血清中肝功能相關指標；ELISA法檢測肝組織氧化應激水平；免疫組化法觀察大鼠肝組織Nrf2表達；Western blotting測定大鼠肝組織Nrf2-ARE通路相關蛋白表達。與模型組比較，竹節參多糖組大鼠血清中肝功能相關指標呈不同程度的降低（＜0.05、0.01），肝組織中Nrf2-ARE信號通路明顯激活（＜0.01），肝臟中脂類過氧化產物丙二醛（malondialdehyde，MDA）水平降低（＜0.01），抗氧化酶活性明顯升高（＜0.05、0.01），細胞質中氧化應激效應物Nrf2陽性的細胞數有所減少（＜0.01），大鼠肝臟損傷程度明顯減輕。竹節參多糖可激活Nrf2-ARE信號通路，增強機體的抗氧化酶系表達，減輕CCl4引起的氧化損傷。

竹節參多糖；急性肝損傷；Nrf2-ARE信號通路；氧化應激；氧化損傷

急性肝損傷（acute liver injury，ALI）是指各種因素引起的突發性肝細胞大面積壞死或嚴重肝功能損害，出現以黃疸、腹水、凝血功能障礙或肝性腦病等為主要特征的一種臨床綜合征，部分患者可能進一步發展為急性肝衰竭（acute liver failure，ALF）[1]。ALI發病機制與氧化應激、炎癥反應、細胞纖維化和細胞凋亡等的進程有關，在酒精、中毒、病毒性肝炎、免疫、血管障礙或藥物的影響下，肝臟氧化與抗氧化系統的平衡被打破，物質傾向于被氧化，進而導致氧化應激，產生大量的活性氧、活性氮等自由基[2-3]。大量自由基的產生引起蛋白質、核酸和脂類等生物大分子被不同程度的氧化，導致蛋白質變性、DNA斷裂、脂類過氧化等改變，引起脂類過氧化產物丙二醛（malondialdehyde，MDA）的升高，進而致使細胞內的相關結構破壞及功能異常[4]。

核因子E2相關因子2（nuclear factor E2 related factor 2，Nrf2）-抗氧化反應元件（antioxidant response element，ARE）信號通路的激活是機體內一種重要的細胞適應性應答抵制氧化應激和其他類型應激的抗氧化防御機制，參與細胞增殖、3大營養物質代謝、細胞衰老和凋亡等多種生物學過程，是預防和治療機體氧化應激和炎癥的一條重要途徑[5-8]。土家族藥用植物竹節參為五加科人參屬植物竹節參C. A. Mey.的干燥根莖，其性溫，味甘、微苦，有活血化瘀、滋補強壯、祛風除濕的功效[9-10]。現代藥理學研究表明，竹節參有保護肝損傷的作用，其多糖成分有減輕自由基損傷、提高過氧化物酶系統活力、減少炎癥相關因子表達等藥理學活性[11-13]。本研究通過建立四氯化碳（carbon tetrachloride，CCl4）間隔誘導的急性肝損傷模型，探究竹節參多糖對肝損傷的保護作用，并基于Nrf2-ARE信號通路探討竹節參多糖改善肝損傷的作用機制，為竹節參多糖作為護肝藥物的藥理學機制研究和臨床防治ALI提供理論參考。

1 材料

1.1 動物

SPF級雄性SD大鼠36只，體質量（200±20）g，8周齡，購自遼寧長生生物技術股份有限公司，實驗動物質量合格證編號No.210726210100500171，許可證號SCXK（遼）2020-0001。動物飼養于溫度（23±2）℃、相對濕度（55±5）%、明暗循環12 h的環境中，自由進食飲水。動物實驗倫理批準號（2021）56。

1.2 藥材

竹節參購自湖北省宣恩縣椿木營竹節參培育種植基地，經湖北民族大學文德鑒副教授鑒定為五加科植物竹節參C. A. Mey.的干燥根莖。

1.3 藥品與試劑

聯苯雙酯滴丸（批號H11020980）購自北京協和藥廠；CCl4購自天津市天力化學試劑有限公司；丙氨酸氨基轉移酶（alanine aminotransferase，ALT）試劑盒（批號S03030）、天冬氨酸氨基轉移酶（aspartate aminotransferase，AST）試劑盒（批號S03040）購自深圳生命科學股份有限公司；總膽紅素（total bilirubin，TBil）試劑盒（批號C120）、直接膽紅素（direct bilirubin，DBil）試劑盒（批號C119）購自生物技術有限公司；MDA試劑盒（批號A003-1）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）試劑盒（批號A001-1）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）試劑盒（批號A005）、過氧化氫酶（catalase，CAT）試劑盒（批號A007-1）均購自南京建成生物工程研究所；超敏ECL發光液（批號KR0016）、HRP標記的山羊抗兔IgG抗體（批號152203）購自科技有限公司；蘇木素-伊紅（HE）染色試劑盒（批號C0105S）、BCA蛋白定量試劑盒（批號P0010）、HRP標記的山羊抗小鼠IgG抗體（批號A0216）購自；免疫組織化學染色（immunohistochemical staining，IHC）試劑盒（批號16I14B07G2622）、二氨聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色試劑盒（批號16C08A17）購自武漢生物工程有限公司；Cul3多抗（批號11107-1-AP）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）單抗（批號60004-1-Ig）購自Proteintech公司；Kelch樣環氧氯丙烷相關蛋白1（Kelch-like ECH-associated protein 1，Keap1）多抗（批號WL03285）、Nrf2多抗（批號WL02135）、還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸醌氧化還原酶1（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate quinone oxidoreductase 1，NQO1）多抗（批號WL04860）均購自沈陽萬類生物科技有限公司。

1.4 儀器

Chemray 380型全自動生化檢測儀（深圳雷杜生命科學股份有限公司）；1510型全波長酶標儀、A44116型凝膠成像系統（美國Thermo公司）；RM2245型組織切片機（德國Leica公司）；CX41RF型正置光學顯微鏡（日本Nikon公司）；B212AT04E型電泳及轉膜系統（美國Bio-Rad公司）；JA2003N型高精度天平（上海精密科學儀器有限公司）；5811型高速冷凍離心機（德國Eppendorf公司）。

2 方法

2.1 竹節參多糖的制備及含量測定

竹節參多糖的制備參考文獻方法[12-14]并加以改進：取一定質量的干燥竹節參藥材碎末，以20倍體積的95%乙醇80 ℃回流3 h，脫脂；以20倍體積的80%乙醇60 ℃回流2 h，脫單糖和低聚糖；濾過，收集藥渣后，10倍體積的純化水磁力攪拌80 ℃回流提取3次，每次2 h；合并3次濾液過D101大孔樹脂柱，脫皂苷、色素；收集濾液減壓濃縮至一定體積，用Svage法除蛋白（4 ℃、10 000 r/min離心4 min）直至無蛋白層出現，合并上清液，加無水乙醇（慢加快攪）直至乙醇體積分數達90%，4 ℃過夜，濾過，收集沉淀干燥，即得精制竹節參多糖。應用苯酚-硫酸法[15]測定竹節參多糖含量。

2.2 動物分組、造模與給藥

SD大鼠隨機分為正常組、模型組、聯苯雙酯（100 mg/kg）[16]組和竹節參多糖低、中、高劑量（50、100、200 mg/kg）組，每組6只。依據《中國藥典》2020年版中竹節參成人生藥劑量（6～9 g）與“實驗動物與人的體表面積換算關系”進行劑量確定，計算得到的劑量作為中劑量組，并按照0.5∶1∶2比例設置低、中、高劑量組[9,17]。采取間隔誘導法建立ALI大鼠模型[18]，除正常組ip生理鹽水外，其余各組大鼠在第1、4、7天ip 12% CCl4生理鹽水溶液（5 mL/kg）。此期間除正常組和模型組ig生活飲用水外，其余各組大鼠ig相應藥物（5 mL/kg），2次/d。第7天給藥后，晚上禁食不禁水，次日麻醉收集大鼠血清與肝臟組織。大鼠血液在4 ℃、4000 r/min離心15 min，分離血清于?80 ℃保存。

2.3 肝臟指數計算

大鼠肝臟稱定質量后，切取約1 cm×1 cm大小于4%多聚甲醛中固定，剩余肝組織分裝若干于?80 ℃下凍存后用于肝臟相關指標檢測。

肝臟指數＝肝臟質量/體質量

2.4 血清肝功能相關指標測定

使用全自動生化儀檢測各組大鼠血清中AST、ALT活性及TBil、DBil水平。

2.5 肝組織病理學觀察

大鼠肝組織經多聚甲醛固定24 h后，脫水、包埋，制作石蠟切片（5 μm），HE染色，使用光學顯微鏡對比觀察各組大鼠肝組織病理學變化。

2.6 肝組織中MDA水平及SOD、GSH-Px、CAT活性測定

大鼠肝組織與生理鹽水以1∶9的比例制成勻漿，4 ℃、10 000 r/min離心5 min，取上清液，按照試劑盒說明書測定MDA水平及SOD、GSH-Px、CAT活性。

2.7 免疫組化法檢測肝組織Nrf2表達

大鼠肝組織石蠟切片（5 μm），經二甲苯脫蠟、梯度乙醇復水，5% H2O2進行內源性過氧化物酶淬滅處理，于0.01 mol/L枸櫞酸鹽中進行高壓抗原修復，5%牛血清白蛋白封閉；滴加一抗（1∶200），4 ℃孵育過夜；滴加二抗（1∶100），37 ℃孵育30 min；滴加鏈霉親和素-生物素復合物（streptavidin-biotin complex，SABC），37 ℃孵育30 min；DAB染色5 min，蘇木素復染10 min，飽和碳酸鋰返藍50 s；經梯度乙醇脫水、二甲苯透明，中性樹脂封片后于顯微鏡下觀察并拍照，用Image J軟件分析Nrf2相對陽性表達面積。

2.8 Western blotting檢測肝組織Nrf2-ARE通路蛋白表達

提取大鼠肝臟中總蛋白，使用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。蛋白樣品經10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉至PVDF膜，于5%脫脂牛奶中封閉1 h，加入一抗（1∶1000），4 ℃孵育過夜；次日室溫孵育0.5 h回收一抗，加入二抗（1∶2000），室溫孵育1 h，使用超敏ECL化學發光底物顯影。用Image J軟件分析條帶灰度值。

2.9 統計學分析

3 結果

3.1 竹節參多糖的提取與含量測定

取200 g竹節參，按照“2.1”項下提取流程后獲得14.62 g精制竹節參多糖，提取率為7.31%；配制75.8 μg/mL精制竹節參多糖，用苯酚-硫酸法測得中性多糖的質量分數為91.84%。

3.2 竹節參多糖對CCl4致肝損傷大鼠肝臟指數及血清中肝功能指標的影響

如圖1所示，與正常組比較，模型組大鼠肝臟指數顯著升高（＜0.01），血清中ALT、AST活性及TBil水平顯著升高（＜0.01），提示在肝細胞壞死的情況下，肝臟對間接膽紅素（indirect bilirubin，IBil）代謝失常，IBil反流入血而致使TBil水平增高；與模型組比較，聯苯雙酯組和竹節參多糖中、高劑量組肝臟指數顯著降低（＜0.05、0.01），血清中ALT和AST活性均顯著降低（＜0.05、0.01），竹節參多糖高劑量組TBil水平顯著降低（＜0.05）。與聯苯雙酯組比較，竹節參多糖高劑量組上述各指標并無統計學上的差異。各組DBil水平無統計學差異。以上結果說明竹節參多糖對CCl4誘導的ALI大鼠肝功能有明顯改善作用。

3.3 竹節參多糖對CCl4致肝損傷大鼠肝組織病理變化的影響

如圖2所示，正常組大鼠肝組織細胞形態正結構正常，無炎性細胞浸潤，以匯管區為中心周圍肝細胞索呈放射狀排列。模型組大鼠肝臟細胞可見融合性壞死，空泡樣病變，匯管區形態結構紊亂，肝細胞索消失。與模型組相比，各給藥組肝臟組織壞死及空泡樣病變有不同程度的減輕，肝索形態結構相對改善。說明竹節參多糖對CCl4導致的肝組織細胞形態損傷具有保護作用。

3.4 竹節參多糖對CCl4致肝損傷大鼠肝組織氧化應激水平的影響

如圖3所示，與正常組比較，模型組大鼠肝組織MDA水平顯著升高（＜0.01），SOD、CAT和GSH-Px活性顯著降低（＜0.01），說明模型組氧化損傷嚴重，抗氧化酶系活性下降；與模型組比較，聯苯雙酯組和竹節參多糖中、高劑量組肝組織MDA水平顯著降低（＜0.01），SOD和GSH-Px活性顯著升高（＜0.05、0.01），竹節參多糖高劑量組CAT活性顯著升高（＜0.05）。與聯苯雙酯組比較，竹節參多糖高劑量組SOD、GSH-Px和CAT活力雖呈一定的提高，但差異無統計學意義。說明竹節參多糖增強了大鼠肝臟抗氧化酶的表達，對CCl4導致的肝損傷具有抗氧化應激的保護作用。

與正常組比較：#P＜0.05 ##P＜0.01；與模型組比較：*P＜0.05 **P＜0.01，下圖同

融合性壞死（→），空泡樣病變（↓），匯管區（←）

圖3 竹節參多糖對CCl4致肝損傷大鼠肝組織MDA水平及SOD、CAT、GSH-Px活性的影響(, n = 6)

3.5 竹節參多糖對CCl4致肝損傷大鼠肝組織Nrf2表達的影響

為進一步探索竹節參多糖導致的抗氧化酶系活性的上調作用是否是通過上游調節因子Nrf2的激活引起的，通過免疫組化法觀察各組大鼠肝組織中Nrf2的表達情況。如圖4所示，正常組大鼠肝組織細胞內基本未見Nrf2陽性；與正常組比較，模型組細胞中Nrf2陽性明顯增加（＜0.01）；與模型組比較，經給藥治療干預后，肝組織內Nrf2的表達顯著降低（＜0.01），其中竹節參多糖高劑量組和聯苯雙酯組最佳。提示竹節參多糖可能通過對肝臟組織Nrf2的表達產生影響，進而誘導細胞抗氧化酶系的表達以抑制氧化應激，改善氧化應激水平。

3.6 竹節參多糖對CCl4致肝損傷大鼠肝組織Nrf2-ARE通路相關蛋白表達的影響

如圖5所示，與正常組比較，模型組大鼠肝臟Nrf2表達顯著減少（＜0.01）；與模型組比較，竹節參多糖中、高劑量組Nrf2表達顯著增加（＜0.01），該結果與免疫組化的結果不一致，進而對Nrf2的結合蛋白Keap1、支架蛋白Cul3及其下游的效應蛋白NQO1的表達進行進一步的研究。與正常組比較，模型組大鼠肝臟Cul3表達無顯著性差異，Keap1、NQO1表達顯著減少（＜0.01）；與模型組比較，竹節參多糖中、高劑量組Keap1、NQO1表達顯著升高（＜0.05、0.01），提示竹節參多糖在治療過程中可能增強了機體Keap1、Nrf2的合成，在面對自由基團攻擊時啟動NQO1等抗氧化酶系的表達，進而降低了肝臟氧化應激水平。與模型組比較，聯苯雙酯組Keap1、Nrf2、NQO1的表達均無明顯差異，提示聯苯雙酯改善抗氧化酶活力的作用機制可能受其他因素的調節。

3.7 各組大鼠肝組織Keap1/Nrf2值比較

鑒于Keap1與Nrf2之間特殊的結構關聯性，擬將兩者與各自內參的相對比值進行比較，即分別用Keap1/GAPDH相對量與Nrf2/GAPDH相對量的比值進行兩兩處理，然后取平均值得Keap1/Nrf2的相對值，觀察各組兩者比值的相對變化，分析不同處理組對Keap1與Nrf2的整體影響（圖6）。結果顯示，與正常組比較，模型組Keap1/Nrf2值減小（＜0.05），提示可能通過減少Keap1的量，進而相對增加Nrf2的激活來應對CCl4所致的氧化應激，而從圖5來看，可能在持續的氧化誘導下，即便機體減少了Keap1的量，但Nrf2的量也存在不可避免的被降解而減少，同時提示機體新Nrf2合成不足，出現了Keap1與Nrf2表達同時減少的情況。與模型組一致，聯苯雙酯組Keap1/Nrf2值減小，進一步揭示，聯苯雙酯可能并無通過Nrf2蛋白發揮改善肝損傷的作用，其增加抗氧化的機制可能與其他因素有關。竹節參多糖各劑量組相對于正常組而言，其Keap1/Nrf2值無明顯差異，提示在機體減少Keap1的量以及Nrf2也因CCl4持續誘導肝損傷而減少的情況下，竹節參多糖治療后可能存在使新Nrf2合成增加的作用，同時增加了Keap1合成以錨定Nrf2，進而增加了肝組織細胞的抗氧化能力，緩解肝損傷。竹節參多糖促進Nrf2表達增加的更深層次分子作用機制有待進一步探究。

圖4 竹節參多糖對CCl4致肝損傷大鼠肝組織Nrf2表達的影響(, n = 3)

圖5 竹節參多糖對CCl4致肝損傷大鼠肝組織Nrf2、Keap1、Cul3和NQO1蛋白表達的影響(, n = 3)

圖6 各組大鼠肝組織Keap1/Nrf2值比較(, n = 3)

4 討論

本研究通過間隔式誘導肝損傷的方法模擬現實生活中ALI發病的突然性及長期處于有毒環境持續誘導造成ALI的持續性，并采取治療性給藥方式，探究竹節參多糖通過Nrf2-ARE信號通路對CCl4誘導ALI大鼠的保護作用機制。結果表明，竹節參多糖可改善肝損傷大鼠的肝功能，通過激活Nrf2-ARE信號通路增強抗氧化酶系的活力而發揮抗氧化作用（圖7）。

血清轉氨酶ALT、AST是評價肝功能損傷的有效指標，當肝細胞受損時，ALT和AST大量釋放到血液中，血清ALT和AST活性升高。本實驗中模型組血清ALT、AST活性均顯著升高。竹節參多糖治療后血清ALT、AST活性顯著降低，說明竹節參多糖可在一定程度上緩解CCl4誘導的ALI，與組織病理學結果一致。同時，竹節參多糖中、高劑量組的降酶效果與聯苯雙酯組相比無明顯差異。作為脂質過氧化的最終代謝產物，MDA水平反映了由CCl4引起的氧化應激的程度[19]。SOD、GSH-Px、GSH和CAT等是體內重要的抗氧化酶，能有效清除自由基，抑制自由基引起的脂質過氧化[20-21]。本研究結果表明，竹節參多糖可以通過增加肝組織細胞SOD、GSH-Px和CAT活力并降低MDA含量改善CCl4誘導的肝損傷，表明竹節參多糖的護肝作用可能與抗氧化應激有關。此外，與聯苯雙酯組比較，竹節參多糖高劑量組抗氧化酶活力無統計學差異。為了進一步探究上述竹節參多糖增加了肝組織抗氧化酶活力結果的原因，了解竹節參多糖改善CCl4誘導的ALI可能的作用機制，以Nrf2、NQO1、Keap1和Cul3作為研究對象，檢測了各組大鼠肝組織中Nrf2、NQO1、Keap1和Cul3的表達。

圖7 竹節參多糖治療CCl4致肝損傷大鼠的作用機制

Nrf2是抗氧化防御系統重要調節因子[22-23]。SOD、GSH-Px、GSH、CAT和NQO1、HO-1等抗氧化酶的基因受Nrf2調控。正常情況下，Nrf2被Keap1錨定在細胞質中，少部分進入細胞核與ARE結合，調控機體抗氧化酶的正常表達，維持氧化與抗氧化的動態平衡。出核后Keap1能夠使Nrf2發生泛素化被蛋白酶體降解，在這個過程中機體反饋調節合成新的Nrf2以維持基礎水平。當存在較為劇烈或持續的氧化刺激或損傷時，細胞通過增加Nrf2的合成、降低出核Nrf2的泛素化及減緩Nrf2的降解，使已出核的Nrf2重新入核以應對氧化損傷，即便如此Nrf2入核次數也是有限的，依然會被降解，這種應對氧化損傷的策略也是有一定限度的[24-28]。Western blotting實驗結果中，與正常組比較，模型組Keap1、Nrf2減少可能是由于在間斷誘導氧化損傷情況下，肝細胞需要不斷地合成足夠的Nrf2去應對氧化應激，而持續的損傷使Nrf2合成不足，機體可能通過減少Keap1的含量使Nrf2泛素化降低維持Nrf2的相對水平，從而出現了Keap1、Nrf2蛋白總量都減少的情況，致使胞質中Nrf2以持續解離狀態對抗氧化損傷，在IHC結果中表現出Nrf2的高陽性，而氧化損傷未得到治療性改善。竹節參多糖中、高劑量組Keap1、Nrf2表達量高于模型組，Keap1/Nrf2值也高于模型組，提示竹節參多糖組可能在治療過程中通過增加Keap1、Nrf2的合成，使之基礎水平得到提升，在面對自由基團攻擊時更有能力提高下游NQO1及SOD、GSH-Px和CAT等抗氧化酶系的活力，減輕CCl4間斷性誘導的肝臟損傷，使機體氧化應激水平降低或逐漸趨于正常，進而反饋調節Nrf2的泛素化和降解，而同時新合成的Nrf2則被Keap1錨定維持動態平衡，從而使Nrf2游離態減少，在免疫組化結果中表現出比之模型組低的陽性水平。聯苯雙酯組與模型組相比，Keap1、Nrf2和NQO1的表達均無明顯差異，提示聯苯雙酯改善抗氧化酶活力的作用機制可能并非通過Nfr2-ARE信號通路發揮作用，可能與其他抗氧化調節機制有關。對于Cul3表達的影響，各組之間無顯著性差異，可能與其作為支架蛋白參與構成泛素連接酶復合物的有關，泛素-蛋白酶體系統是生物體內高度保守且不可或缺的生物過程，調控體內多種生物學過程[26]。

本研究中竹節參多糖對Nrf2更深的影響機制尚未完全闡明，仍有待進一步的探究。竹節參具有滋補強壯、活血化瘀、祛風除濕的功效，竹節參多糖可能通過增加Nrf2調控ARE提升了機體抗氧化能力，增強了正氣對肝損傷致病邪氣的抵抗能力，從而達到扶正祛邪的治療效果。本研究在一定程度體現了竹節參的滋補強壯功效與抗氧化藥理作用的適應性。同時，聯苯雙酯作為短期降酶藥有著其局限性和不足，竹節參多糖對轉氨酶降低作用的長期性影響或可做進一步的研究，竹節參多糖可能具有成為長期降酶藥的潛能，將對天然降酶藥物和抗氧化護肝藥物的研究與開發具有積極意義。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Anti-oxidative protection ofpolysaccharide on CCl4-induced acute liver injury in rats based on Nrf2-ARE signaling pathway

TANG Lang, SONG Tian-li, WU Guang-yang, WANG Yi-min, SHI Ting-yu, LIU Xu, HUANG Sheng

Department of Medicine, Hubei Minzu University, Enshi 445000, China

To study the protective mechanism ofpolysaccharide (PSPJ) against carbon tetrachloride (CCl4) induced acute liver injury in rats through nuclear factor E2 related factor 2 (Nrf2)-antioxidant response element (ARE) signal pathway.A rat model of acute liver injury was established using the CCl4interval induction method. After 7 d of treatment with PSPJ prepared by water extraction and alcohol precipitation method, samples were taken and liver tissue pathological changes were observed by hematoxylin eosin (HE) staining; Liver function related indicators in serum of rat were detected by fully automated biochemical analyzer; ELISA method was used to detect oxidative stress level in liver tissue; Immunohistochemical method was used to observe the expression of Nrf2 in liver tissue of rats; Western blotting was used to determine the expressions of Nrf2-ARE pathway related proteins in liver tissue of rats.Compared with model group, liver function related indicators in serum of rats treated with PSPJ showed varying degrees of decrease (< 0.05, 0.01), Nrf2-ARE signaling pathway was significantly activated in liver tissue (< 0.01), level of lipid peroxidation product malondialdehyde (MDA) in liver was reduced (< 0.01), and activity of antioxidant enzymes was significantly increased (< 0.05, 0.01), the number of cells with Nrf2 positive oxidative stress effector in cytoplasm was decreased (< 0.01), and the degree of liver damage in rats was significantly reduced.PSPJ can activate the Nrf2-ARE signaling pathway, enhance the expression of antioxidant enzymes in body, and alleviate oxidative damage caused by CCl4.

polysaccharide; acute liver injury; Nrf2-ARE signal pathway; oxidative stress; oxidative damage

R285.5

A

0253 - 2670(2023)15 - 4866 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.15.012

2023-02-24

湖北省自然科學基金青年項目（2019CFB358）；國家自然科學基金青年基金項目（81801979）

唐 浪（1995—），男，碩士研究生，研究方向為常用土家族藥的制劑開發與應用。E-mail: 1411992456@qq.com

通信作者：黃 勝（1987—），男，博士，碩士生導師，湖北民族大學醫學部基礎醫學院副院長，從事天然藥物的藥理學、細胞生物學及分子機制研究。E-mail: hs19870604@163.com

宋添力（1998—），男，碩士研究生，研究方向為天然植物對肝病的防治。E-mail: stl15234839197@163.com

[責任編輯 李亞楠]