動物性食品中地西泮殘留檢測研究進展

李國烈

(南充農產品質量監測檢驗中心，四川 南充 637000)

1 概述

地西泮(Diazepam)又叫苯甲二氮卓，屬苯二氮卓類鎮靜催眠藥。苯二氮卓類藥物具有良好的鎮靜催眠、抗驚厥、抗焦慮以及促食欲過盛等優點，在20世紀60年代發展起來，并逐漸取代了巴比妥類藥物[1，2]。《食品動物禁用的獸藥及其它化合物清單》(第193號公告)規定地西泮不準以抗應激、提高飼料報酬、促進動物生長為目的在食品動物飼養過程中使用。《GB 31650-2019 食品安全國家標準食品中獸藥最大殘留限量》規定允許作治療用，但不得在動物性食品中檢出地西泮。

地西泮具有能夠使動物體重增加，提高出肉率，降低動物感知外界的能力，減少應激和在畜禽養殖中提高飼料轉化率的作用[3，4]。因此，在生產過程中存在非法使用的情況，近年來我國多地檢出動物性食品中地西泮殘留。王守英等[5]對上海2018年市售水產品地西泮殘留狀況及其風險進行了調查分析，在市售水產品中檢測出地西泮殘留；四川省市場監督管理局于2020年10月9日發布關于26批次食品不合格情況的通告(2020年第42號)，3家水產店的鳙魚和鰱魚中檢出地西泮；天津市薊州區市場監督管理局于2020年12月8日發布2020年第7期食品安全監督抽檢信息，2家水產店的鯽魚和鯉魚中檢出地西泮[6]。地西泮不易被動物機體代謝出去，從而蓄積在食品動物體內，當長期攝入含有地西泮及其代謝物殘留的食物后，會對人身體健康造成危害[7，8]，動物排泄物進入土壤和水中導致生態環境問題，同時會對人類健康產生間接危害。因此，快速高效的檢測方法對動物源性食品中地西泮殘留監測具有十分重要的意義。本文擬綜述動物性食品中地西泮殘留檢測研究進展，以期為動物性食品中地西泮的殘留檢測提供參考。

2 檢測方法

目前，動物性食品中地西泮殘留檢測的分析方法主要包括免疫分析方法、色譜法和色譜質譜聯用法等檢測方法。

2.1 免疫分析方法

免疫分析方法是利用抗原與抗體特異性結合而建立的高選擇性生物化學方法，目前報道應用在動物性食品中地西泮殘留檢測的方法有酶聯免疫吸附法和膠體金免疫層析法。該類方法不需要昂貴儀器設備，操作簡單快捷，可對現場大批量樣品進行快速檢測。但該類方法不能準確定量，只能作為初篩方法。賈濤[9]報道了采用酶聯免疫反應測試盒檢測豬肝中地西泮的殘留量，該方法不需要有機溶劑，并在10～30min完成提取過程，檢測過程不到2h；該方法檢測下限為0.01μg·kg-1，標準曲線的斜率(r值)達到0.9959，高于規定的0.98，離散系數(CV值)不高于3.9%，陽性添加回收率平均達到97.4%，檢測結果準確可靠；另外，其還提出了酶聯免疫法測定過程中8個方面的注意事項，對采用酶聯免疫吸附法開展檢測工作具有很強的指導性。

膠體金免疫層析法是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型檢測方法，通過將抗原抗體特異性免疫反應和色譜層析分離技術相結合的方式實現檢測目標物的快速檢測，因其無需特殊設備，結果直觀，操作簡便，現已成為食品安全快速檢測的常用方法。桑麗雅等[10]報道了采用膠體金免疫層析法快速檢測水產品中地西泮殘留量；該方法利用免疫磁珠選擇性吸附、分離水產品中地西泮殘留，操作簡便，靈敏度高，特異性強，穩定性好，可在25min內完成單個樣本檢測；方法檢出限為0.5μg·kg-1，在加標濃度為1.0μg·kg-1、5.0μg·kg-1、10.0μg·kg-1和15.0μg·kg-1時，方法的回收率為78.34%～90.40%，相對標準偏差為5.03%～8.96%，在添標檢測試驗和盲樣檢測試驗中，該方法的檢測結果與儀器分析方法(氣相色譜-質譜法)的檢測結果一致，可用于樣品中地西泮殘留的現場快速檢測。

2.2 色譜法

色譜法是利用混合物中各組分在流動相和固定相兩相間的分配系數的不同而獲得分離的方法，目前報道應用在動物性食品中地西泮殘留檢測的方法有氣相色譜法和液相色譜法。該類方法具有分離效率高，分析速度快，易于自動化等優勢，但存在定性分析易受基質干擾，無法對樣品進行準確的定性分析的問題，在檢測過程中一般都要采用不同極性的色譜柱或改變流動相極性等方式來輔助定性。

近年來，關于采用氣相色譜法和液相色譜法檢測動物組織中地西泮殘留量的報道較少。張玉潔等[11]報道了采用氣相色譜-微電子捕獲(GC-μECD)檢測法測定豬肉中地西泮殘留量；樣品經乙腈超聲提取，正己烷除脂，C18固相萃取小柱凈化，甲醇-水(體積比70+30)洗脫，外標法定量；該方法在1～1000μg·L-1質量濃度范圍內線性關系良好(r=0.9994)，檢出限和定量限分別為0.31μg·kg-1和1μg·kg-1，對空白豬肉進行1～50μg·kg-1范圍的藥物添加回收試驗，結果平均回收率(83.5%～94.9%)、日內變異系數(2.4%～8.1%)和日間變異系數(3.9%～6.4%)均滿足分析試驗要求；該報道還對提取溶劑的選擇進行了試驗，結果表明，相對于乙酸乙酯和乙腈-水(80+20)，乙腈的提取效果最好，且過程穩定易控制。丁宇琦等[12]采用高效液相色譜法、氣相色譜-質譜法以及液相色譜-串聯質譜法測定了豬肉、雞肉、魚肉和牛肉樣品中地西泮的殘留量；樣品的提取溶劑和凈化小柱與張玉潔等[11]方法相同，提取溶液未經正己烷除脂，洗脫溶液為甲醇-乙酸溶液(體積比70+30)，外標法定量；該方法質譜儀器的檢出限為0.5μg·kg-1，HPLC的檢出限為10.0μg·kg-1；在4種組織樣品中添加15.0μg·kg-1、30.0μg·kg-1、60.0μg·kg-13個濃度水平下，質譜類儀器檢測的回收率范圍為84.6%～99.0%，精密度(RSD)均小于10%；在4種組織樣品中添加100.0μg·kg-1、300.0μg·kg-1、500.0μg·kg-13個濃度水平下，液相色譜儀器檢測的回收率范圍為87.0%～97.3%，精密度(RSD)均小于3.5%。

2.3 色譜質譜聯用法

色譜質譜聯用法利用質譜的定性能力強、靈敏度高等優點克服了色譜法的不足，提高了分析的靈敏度和準確性，具有多組分同時分析和微量分析等優勢，在檢測工作中被廣泛應用。

譚磊等[13]報道了采用UPLC-MS/MS測定豬肉中地西泮殘留量，樣品在全程嚴格避光操作的條件下，經乙酸鈉溶液和β-鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶酶解，用碳酸鈉-酸氫鈉緩沖溶液和乙酸乙酯提取凈化，電噴霧離子源負離子模式，多反應監測方式進行檢測，內標法定量；該方法的檢出限為0.048μg·kg-1，線性范圍為1～30ng·mL-1(r=0.999578)；在添加濃度為1.00μg·kg-1、2.00μg·kg-1、4.00μg·kg-13個濃度水平下，方法的變異系數分別為7.82%、4.79%和8.14%，方法的回收率范圍為81.00%～96.00%、70.50%～81.50%和77.00%～89.75%。

宿書芳等[14]報道了采用超高效液相色譜串聯質譜測定水產品中地西泮殘留量，樣品經乙腈提取，Prime HLB固相萃取小柱凈化，在正離子模式下多反應監測方式檢測，基質匹配標準曲線外標法進行定量；該方法在0.1～10ng·mL-1質量濃度范圍內線性關系良好(r>0.99)，檢出限為0.5μg·kg-1；通過在黃花魚和蝦樣品中做添加回收試驗，得出該方法在1.5μg·kg-1、3.0μg·kg-1、15.0μg·kg-1添加濃度水平下，回收率范圍為88.2%～101.1%，方法的日內和日間精密度均小于10%；該研究還對提取方式、提取溶劑、凈化方式、SPE規格和上樣溶液的選擇、濃縮方式和基質效應等關鍵因素進行了考察與評價。

何連軍等[15]以通過型固相萃取柱Captiva EMR-Lipid(EMR)為凈化手段，采用液相色譜-串聯質譜法測定水產品中地西泮殘留量；該方法通過內標法定量，檢出限為0.03μg·kg-1，在2μg·kg-1、4μg·kg-1、10μg·kg-13個添加濃度水平下，草魚、中華鱉、南美白對蝦、大黃魚和貽貝樣品組織的的添加回收范圍為90.9%～98.3%，相對標準偏差為0.63%～6.68%。

崔瑞霞等[16]報道了物源性食品中地西泮殘留快速篩的方法，樣品經乙二胺四乙酸二鈉溶液螯合后，加入5mL乙腈渦旋離心，取乙腈層經Cleanert LipoNo凈化后，取上清液乙腈層過濾上機，采用UPLC-MS/MS進行測定，基質配制標準曲線，內標法進行定量分析；該方法出檢出限為0.05μg·kg-1，定量限為0.15μg·kg-1，在0.1～20ng·mL-1質量濃度范圍內線性關系良好(r=0.9997)；在1μg·kg-1添加濃度水平下，分別對牛蛙、雞蛋、羊肉、鯽魚等樣品進行加標回收和精密度實驗，結果表明，回收率在93.1%～98.6%，相對標準偏差在3.4%～6.7%。曾軍杰等[17]報道了水產品樣品經分散固相萃取技術進行前處理，采用超高效液相色譜-串聯質譜測定樣品中地西泮殘留量。該方法的檢出限和定量限分別為0.5μg·kg-1和1.0 μg·kg-1，在0.5～50μg·L-1質量濃度范圍內線性關系良好(r=0.997)，添加樣品的平均回收率為92.5%～95.4%，相對標準偏差(RSD)為5.2%～7.3%。張璇等[18]報道了采用液相色譜-串聯質譜測定水產品中地西泮藥物殘留量的方法，樣品加入NaOH(1mol·L-1)溶液后，采用乙酸乙酯提取，C18和PSA分散固相萃取材料進行凈化，基質匹配標準溶液中添加內標的方法進行定量分析；該方法地西泮藥物的檢出限為0.5μg·kg-1。在1μg·kg-1、5μg·kg-1、10μg·kg-1添加濃度水平下，分別對鳊魚等14種水產品樣品進行地西泮藥物的加標回收和精密度試驗。結果表明，該方法準確度(加標回收率)和精密度均滿足分析要求，對不同種類的水產品適用性較好。

綜上所述，采用液相色譜串聯質譜法測定動物性食品中地西泮殘留量，樣品采用液液萃取、固相萃取小柱和QuEChERS分散固相萃取等方式凈化，多反應監測電噴霧離子源正離子模式和負離子模式進行檢測。樣品的前處理方式各不不同，但方法的準確度和精密度良好，檢出限高(0.03～0.5μg·kg-1)，能滿足實驗室殘留分析檢測要求。

3 小結

在地西泮殘留檢測過程中，快速高效的前處理方法和定性定量能力好的檢測技術起著至關重要的作用。液相色譜串聯質譜法因其高靈敏度、準確度和高選擇性等優點，被廣泛應用于動物性食品中地西泮殘留檢測。另外，固相萃取小柱凈化和QuEChERS分散固相萃取凈化方法因其操作簡便，快速、高效、穩定性好，在地西泮殘留檢測的前處理中展現出很好的應用前景。