單糖和雙糖分析方法研究進展

◎ 張 蕾

（唐傳生物科技（廈門）有限公司，福建 廈門 361026）

糖類物質是多羥基醛、多羥基酮及其縮聚物的總稱，又稱為碳水化合物。糖類物質是自然界分布最廣泛、數量最多的一類化合物，由植物通過光合作用合成，屬于天然合成化合物。自然界中，幾乎所有的生物體內均含有糖類物質。其中，植物體內含糖類物質最多，占其干重的50%～90%，動物體中含糖較少，僅占組織器官干重的2%，但是卻對動物的生命活動起著重要作用。

我國在戰國時期就開始食用蔗糖，到晉朝時有了制糖技術。北宋時期，王灼撰寫了我國第一部制糖專著《糖霜譜》，詳細記錄了自甘蔗栽培到制作冰糖的全過程，揭開了制糖的新篇章。雖然人們很早就掌握了甘蔗的栽培、糖的提取和食用技術，但是直到19 世紀后期，隨著科學的發展，人們才對糖的化學結構、性質有了認識。20 世紀70 年代之后，隨著現代分離、分析技術的迅速發展，人們獲得了更多糖的結構信息；而細胞生物學的飛速發展，不斷揭示了糖的諸多生物學功能。尤其是近年來的研究，使人們對糖有了更深的認識。糖是除核酸和蛋白質之外另一類重要的生命物質，是生命體內重要的信息分子，參與了多細胞生命的受精、著床、分化、發育、免疫、感染、癌變和衰老等全部時間和空間過程。糖在細胞之間的相互識別、相互作用，水和電解質的輸送，癌癥的發生和轉移，機體的免疫和免疫抑制，以及細胞凝集等生物過程中都起著關鍵作用[1]。

糖類分為單糖、雙糖、多糖，單糖是糖類組成的基本單元。分析多糖時，需先將其分解為單糖、雙糖、低聚糖等再進行檢測分析，表明對單糖與雙糖展開分析是糖類分析的基礎。因此，本文基于當前單糖、雙糖研究現狀，就單糖、雙糖分析測定方法進行概述，以期為日后單糖和雙糖分析研究提供參考。

1 單糖、雙糖分析方法

1.1 化學方法

常用的化學方法有苯酚-硫酸法[2]，該方法基于490 nm 波長下芳香絡合物吸光度與糖含量的線性關系測定并計算得到總糖量。苯酚-硫酸法簡單、快速，適用于復雜樣品中單糖、多糖測定，但由于不同單糖的吸收率不同，這種方法只能在特定條件下應用。

化學方法多是基于糖的還原性來分析單糖和多糖，而測定還原糖最常使用的是酮基反應，主要有蘭-埃農法、奧夫奈爾法、奈特-艾倫法、姆松-華爾格法，反應后可用分光光度法檢測或稱重法檢測[3-4]。部分還原糖反應可以分為醛糖反應和酮糖反應。間苯二酚反應是酮己糖的特征反應，在酸性溶液中將糖轉化為羥甲基糠醛，與間苯二酚反應，得到的紅色配合物在398 nm 和480 nm 波長處有強特征吸收，該方法已成功應用于藥物樣品中乳果糖的光度定量測定[5]。乳果糖在酸性條件下的水解產物還能與半胱氨酸鹽酸鹽-色氨酸試劑反應，生成在518 nm 有最大吸收的粉色復合物，該反應也已應用于藥品中乳果糖的測定[6]。分析復雜組分時，如果存在其他還原性物質，則會對糖的檢測產生較大影響。

1.2 物理方法

物理方法的研究對象一般為液體，如旋光法、液體比重測定法和折光測定法。由于每種糖在總液體密度、折射率和光束偏振中的作用都是單獨的，并非化學計量反應中簡單的相加，所以物理方法局限于僅受單糖影響折射率的雙糖樣品[7-8]。這些物理方法測量簡單且設備價格不高，仍被廣泛使用于制糖工業。此外，還有常用的糖量計，即特別設計的旋光計和折光計，可以根據蔗糖濃度的折射率或旋轉角度重新計算比例，分析過程簡單、使用方便。

1.3 生物方法

糖類物質參與多種酶催化的生物轉化過程，因此可利用酶的高效性和專一性進行分析。LUZZANA 等[9]通過酶的反應，使牛奶中乳糖和乳果糖含量與pH 值成正比，分別在不到2 min 和4 min 的時間內對乳糖和乳果糖直接進行分析，方法簡單、準確，重復性好，經實驗優化，乳果糖的靈敏度可達0.1 mmol·L-1。VARGAS 等[10]在轉化酶/果糖脫氫酶INV/FDH 系統的基礎上構建了蔗糖雙酶生物傳感器，將該傳感器與果糖和葡萄糖生物傳感器相結合，可在單個實驗中同時測定蔗糖、果糖、葡萄糖。

雖然已有多種使用酶和生物催化材料對各種糖進行生物識別分析，但迄今為止還沒有開發出用于糖類物質測定的免疫測定方法。這是因為某些糖缺乏免疫原性，無法培育抗體，而有的糖如麥芽糖和乳糖，雖有抗體可用，但其分析應用在文獻中未見報道。

1.4 儀器分析法

1.4.1 高效液相色譜法

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是單糖、雙糖分析檢測中最常用的方法，技術較成熟，穩定性好，是國際AOAC 分析化學家協會推薦的常規糖類物質分析的官方技術。高效液相色譜儀可耦合的檢測器較多，常用的有紫外吸收檢測器（Ultraviolet Detector，UV）、熒光檢測器（Fluorescence Detectors，FLD）、示差折光檢測器（Refractive Index Detector，RID）、蒸發光散射檢測器（Evaporative Light Scattering Detector，ELSD）及荷電氣溶膠檢測器（Charged Aerosol Detection，CAD）等。

（1）紫外吸收檢測器。紫外吸收檢測器是高效液相色譜儀應用最多、最廣的檢測器，它是依據光吸收原理，以適當的光路和電路，輸出一個與試樣組分濃度成正比的紫外-可見光吸收信號，其結構與一般光度計相似。紫外吸收檢測要求被檢測樣品組分有紫外可見光吸收，而使用的流動相無吸收，或在被測組分吸收波長處無吸收。而單糖和雙糖沒有紫外吸收，需要經過衍生化處理，使待測組分帶上生色團后才能進行光學檢測[11]。目前，常見的紫外衍生化試劑有1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one，PMP）、4- 氨 基 苯 甲酸乙酯（4-aminobenzoic acid ethyl ester benzocaine，ABEE）、 異 硫 氰 酸 苯 酯（phenyl isothiocyanate，PITC）、甲氧基苯胺以及對硝基甲苯氯等。

現今，PMP 反應條件較溫和，無需酸催化，是最為常用的衍生化試劑。周熙等[12]將葛仙米水解處理后，用PMP 衍生水解多糖后用HPLC-UV 法測試，結果顯示，葛仙米多糖提取物中主要含有甘露糖、葡萄糖、氨基葡萄糖、葡萄糖醛酸、半乳糖和木糖，該方法線性關系良好，準確性、重復性和專屬性好。SPIRO 等[13]先將中性糖轉化為氨基葡萄糖，經異硫氰酸苯酯衍生化處理后，用紫外檢測器測定糖綴合物中存在的中性糖和己糖胺，該方法靈敏度高，且對在糖蛋白和糖肽上測定的單糖組成與先前其他技術相比較具優勢。GOMIS 等[14]用ABEE 對蘋果酒進行衍生后，采用HPLC-UV 法測定醛糖（葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、核糖、焦糖和鼠李糖）和糖醛酸（d-葡萄糖醛酸、d-半乳糖醛酸）含量，平均回收率為90%～102%，準確度較高，RSD ＜5%。ABEE 適用于各種糖的衍生，它可以消除因旋光作用而形成的對偶物，衍生反應無副產物產生，衍生化試劑峰在最后流出，不會干擾待測物的檢測，衍生后的物質可直接進樣。與其他衍生化試劑相比，ABEE 減少了衍生后處理這一步驟，進樣更加方便。UV 檢測器靈敏度高，線性范圍寬，對流速和溫度變化不敏感，可用于梯度洗脫分離，但因其復雜的衍生過程，HPLC-UV 測定糖的實驗耗時都較長。

（2）熒光檢測器。FLD 適用于痕量組分和能顯示熒光的物質檢測，而糖類無熒光特性，需衍生處理后才能進行檢測。可用作糖類熒光衍生化試劑的有對氨基苯甲酸（Para Aminobenzoic Acid，PABA）、苯并吖啶酮-5-乙酰肼（BAAH）、芴甲氧基羰酰氯（Fluorene Methoxy Carbonyl Chloride，FMOC-Cl）等。PABA 是HPLC-FLD 法中最常用的衍生化試劑，XU 等[15]將多糖經脫酯、萃取、水解、PABA 衍生，得到熒光標記的單糖化合物，最后通過HPLC-FLD 檢測黃精和玉竹中7 種單糖，其建立的方法靈敏度高、特異性強、線性關系好、回收率高，為多糖的研究提供了一種可行的分析工具，對黃精和玉竹多糖的研究結果可為天然藥物工業提供一定指導。ZHANG 等[16]用BAAHHPLC-FLD 法處理分析寬葉羌活根、莖和葉中多糖中單糖組成，結果表明，BAAH 衍生化大大增加了單糖的疏水性，并使它們在增加的保留時間下洗脫，而寬葉羌活根、莖和葉中多糖主要由D-半乳糖和D-葡萄糖組成。林啟山等[17]用FMOC-肼和FMOC-Cl 對10 種單糖進行衍生后用熒光檢測器測定，且用同樣的方法測定了胎球蛋白和轉鐵蛋白中寡糖鏈的單糖組成。FMOC-Cl 因有毒有害且具有腐蝕性，在糖分析處理中較少使用。FLD 選擇性好、準確度高，但是與UV衍生類似，操作煩瑣、耗時較長。

（3）示差折光檢測器。RID 通過連續測定色譜柱流出物的光折射率變化測定溶質濃度，所以凡是與流動相光折射率有差別的樣品都可以用其檢測。陳智毅等[18]采用HPLC-RID 法檢測5 個白色金針菇子實體中的單糖和雙糖，結果表明，這5 個樣品中共含有木糖、果糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、蔗糖和乳糖7 種糖，每個樣品中各種糖含量、種類都有差異，但都以果糖和乳糖為主。劉玉峰等[19]用HPLC-RID 法檢測食品中的單糖和雙糖，外標法定量，每份樣品測試3 次，其結果RSD 均小于5%，精密度較高，回收率＞99.7%， 準 確 度 較 高。ZAKHAROVA 等[20]用HPLC-RID 法測定葡萄酒、果汁、蜂蜜、乳制品及餅干中的單糖、雙糖和甜味劑，液體樣品中葡萄糖、果糖和蔗糖的檢測限為0.1 g·L-1，木糖、乳糖、麥芽糖、甘露糖和山梨醇的檢測限為1 g·L-1；固體樣品中葡萄糖、果糖和蔗糖的檢測限為0.1%，木糖、乳糖、麥芽糖、甘露糖和山梨糖的檢測限為0.6%。RID 操作簡單，對糖類靈敏度較高，是食品中應用較多、較廣泛的方法，但其對溫度、流動相組成變化敏感，不能梯度洗脫，檢測限與UV 相比較低，不適合含量低的雜質糖檢測。

（4）蒸發光散射檢測器。蒸發光散射檢測器先用惰性氣體霧化洗脫液，然后讓流動相在加熱管中蒸發，最后剩下的未揮發溶質顆粒在光散射檢測池中被檢測。NOGUEIRA 等[21]采用ELSD 對啤酒中碳水化合物的HPLC 方法進行了優化和驗證，分別在果糖0.05 ～5.00 g·L-1，葡萄糖0.05 ～5.00 g·L-1，麥芽糖0.05 ～15.00 g·L-1，麥芽三糖0.05 ～10.00 g·L-1，麥芽四糖0.05 ～5.00 g·L-1的線性范圍內進行測定，檢出限 分 別為0.005 g·L-1、0.008 g·L-1，0.010 g·L-1、0.010 g·L-1和0.010 g·L-1，RSD 為1.59%～5.95%，回收率為94 %～98.4%。林慧等[22]采用HPLC-ELSD法測定食品中的5 種糖（葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖）和5 種糖醇（赤蘚糖醇、木糖醇、山梨糖醇、甘露醇、麥芽糖醇），結果表明，5 種糖和5 種糖醇均在0.2 ～20.0 mg·mL-1線性關系良好，RSD ＜5%，回收率為91.53%～105.20%，靈敏度高，重現性好。HPLC-ELSD 法可以檢測不含發色團的化合物，操作簡單，對溫度變化不敏感，基線穩定，適合梯度洗脫，但其靈敏度和重現性差，且過程需蒸發溶劑，故只能選擇有揮發性的流動相，且樣品的揮發性必須小于流動相揮發性。HPLC-ELSD 法是現今食品中糖類物質檢測最常用的方法。

（5）荷電氣溶膠檢測器。CAD 是在檢測器內將分析物轉化成溶質顆粒，溶質顆粒與帶正電荷的氮氣相撞，電荷隨之轉移到顆粒上，溶質顆粒再把它們攜帶的電荷轉移到收集器，然后通過高靈敏度的靜電檢測計測出溶質顆粒的帶電量，由此產生的信號電流與溶質的含量成正比。CAD 可實際應用于任何非揮發或半揮發性化合物的測定，如藥物、碳水化合物、蛋白質、多肽、類固醇和脂類等。GREMBECKA 等[23]采用HPLC-CAD法，經Shodex Asahipak，NH2P-50 4E，5 μm殼狀顆粒填充柱（4.6 mm×250 mm）分離后，同時測定葡萄糖、果糖、蔗糖、麥芽糖、赤蘚糖醇、甘露醇、麥芽糖醇、山梨醇和木糖醇，實驗驗證了該方法的線性、精密度和準確度，9 種樣品的檢出限和定量限分別為0.12 ～0.44 μg·mL-1、0.40 ～1.47 μg·mL-1。張雪等[24]利用HPLC-CAD 法同時測定白及中的果糖、葡萄糖、甘露糖、蔗糖，采用Xbridge Amide 色譜柱進行分離，結果顯示分離效果良好，25批白及樣品的果糖、葡萄糖、甘露糖、蔗糖的平均含量分別為5.90 ～28.51 mg·g-1、11.53 ～ 37.86 mg·g-1、0.40 ～ 2.19 mg·g-1、11.13 ～53.72 mg·g-1。CAD 與ELSD 相比，靈敏度更高、檢測限更低，可以檢測納克級別的化合物，且檢測與化學結構無關，具有反應重復性好、操作簡單、維護成本低等特點，是常規食品分析的理想選擇，但是CAD 價格是其他檢測器的數倍，維護較麻煩。

1.4.2 氣相色譜法

氣相色譜（Gas Chromatography，GC）是基于樣品中各組分在氣相和固定液液相間的分配系數不同而進行分離。GC 分離效能高、分析速度快、靈敏度高，適合復雜混合物的分析。糖是不易揮發和熱不穩定的化合物，熔點較高，用GC 檢測前必須進行衍生化處理，極大地限制了GC 用于糖類分析的發展。對于糖的衍生，常用方法有甲基化、乙酰化、三氟乙酸鹽化和三甲基硅基化等[25]。氣相色譜檢測單、雙糖時主要耦合火焰離子化檢測器（Flame Lonization Detector，FID）和質譜檢測器（Mass Spectrometry，MS）使用。

（1）火焰離子化檢測器。FID 利用氫火焰作為能源，當待測物進入火焰則在高溫下電離，產生比基流高幾個數量級的離子，在高壓電作用下形成離子流，其經高電阻放大轉化為電信號，再根據電信號進行定量分析。CAI 等[26]將煙草進行加壓液體萃取，用乙酸醛腈法與鄰甲氧基肟-三甲基硅基法聯用進行衍生化和超聲輔助分散液液微萃取處理后，采用GC-FID法分析主要碳水化合物，在最優實驗條件下，對3 個烤煙品種的碳水化合物含量進行了分析，檢測到葡萄糖、果糖、蔗糖、麥芽糖和肌醇。KA?KONIEN? 等[27]采用1-(三甲基硅基)咪唑衍生樣品，GC-FID 法分析26 份蜂蜜樣本，結果表明，所有樣品均含果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、異麥芽糖、松二糖、海藻糖、異麥芽酮糖、纖維二糖、棉子糖和潘糖，其中有22 個樣品以葡萄糖為主。FID 靈敏度高，線性范圍寬，但對含羰基、羥基、鹵代基和胺基的有機物靈敏度很低或根本無響應，所以測試糖類物質時需經衍生處理。

（2）質譜檢測器。氣相色譜-質譜聯用儀（Gas Chromatography-Mass Spectrometry，GC-MS）具有高分辨率的氣相色譜和高靈敏度的質譜，被廣泛應用于復雜組分的分離和鑒定。MS 通過對樣品離子的質荷比分析而實現對樣品的定性和定量，是測定復雜化合物的有效手段。SANZ 等[28]用三甲基硅烷基化試劑將不同的水果汁衍生化后，用GC-MS 測定果汁中的肌醇和單雙糖，結果表明，果汁中均含有葡萄糖、果糖和蔗糖，不同類型的果汁中3 種糖含量的差異很大。DE LA FUENTE 等[29]用氯羥胺、六甲基二硅氮烷處理蜂蜜后，用GC-MS 定量測定出了2 個單糖，14 個雙糖和21 個三糖。GC-MS 可以分析出化合物的分子量、元素組成、分子式和分子結構，在定性檢測和定量檢測兩方面都很受歡迎。GC-MS 兼備了色譜的高分離能力和質譜的強定性能力，靈敏度高、檢測快速，但是其與GC-FID 一樣需要衍生處理。

1.4.3 離子色譜法

離子交換色譜（Ion Chromatography，IC）利用待測組分與固定相之間發生離子交換的能力差異而實現分離。離子交換色譜靈敏度高、分析效果好、分析速度快，幾分鐘內可完成一個樣品的檢測。分析糖類物質時，離子交換色譜-脈沖安培檢測（IC-PAD）法得到了廣泛應用，其無需衍生即可分析單糖和大多數寡糖、低聚糖。LO COCO 等[30]將巧克力樣品經適當稀釋和純化后，在PA10 色譜柱上注射，采用高效陰離子色譜-脈沖安培法檢測巧克力基質中葡萄糖、果糖、蔗糖和乳糖的含量，用外標法定量，實驗重復性好，準確率高。楊曉敏[31]采用離子交換色譜-脈沖安培檢測法分析乳制品中的果糖、葡萄糖、半乳糖、蔗糖和乳糖，結果表明，這5 種單雙糖含量在0.1 ～20.0 mg·kg-1線性關系良好，回收率高。離子交換色譜法測試不同樣品時，對溶液pH 要求較高，所以需根據不同樣品需求調節合適的pH 值。

1.4.4 毛細管電泳法

毛細管電泳（Capillary Electrophoresis，CE）是LC和GC 技術中一個新穎、有吸引力的替代技術，是一種具有高效益、高分離速度和大量的理論板等優點的電驅動分離技術。CE 不需過多樣品和試液，僅需要微量（微升)的緩沖液、有機溶劑和添加劑即可進行實驗。但有時會出現由于進樣量過低（納升）和毛細管內徑小而導致的檢測靈敏度低的現象。此外，CE可以很容易地與各種光學和電化學探測器耦合。毛細管電泳系統已成功地應用于單、雙糖的分離和測定。

在光度檢測中，由于糖類物質缺乏發色團，需要柱前衍生化或其他轉化，也可以采用間接吸光度檢測，需將離子發色團添加到背景電解質中，如2,6-吡啶二羧酸、馬來酸和鄰苯二甲酸、山梨酸、1-萘乙酸、2,6-吡啶二羧酸。林雁飛等[32]以α-萘胺為衍生劑，用毛細管電泳法對蜂蜜中7 種單雙糖的衍生物進行分離檢測，回收率為100%～105%，RSD ＜2%。郭建敏等[33]利用高效毛細管區帶電泳法直接分離和測定了不同果汁中的糖類物質，外標定量法分析果汁中的主要糖類物質，結果表明，4 種果汁中含量較高的糖類均為果糖、葡萄糖和蔗糖，木糖、麥芽糖和山梨醇含量較低，不同品種間差異較大。RAMíREZ 等[34]采用CE 間接紫外檢測法對蔗糖、麥芽糖、麥芽糖、葡萄糖和果糖5 種糖進行了全電泳分離，以1-萘乙酸為背景電解質，pH 值為12.5，間接紫外檢測波長為222 nm，毛細管（75 μm×120 cm），電壓為25 kV 的條件下，在50 ～400 mg·L-1得到線性校正曲線，測得結果準確度高，線性良好，此外，該方法無需標記即可確定單糖、二糖和三糖。

1.4.5 紅外光譜法

糖類物質在紅外波長范圍內具有特定的吸收，所以可以通過紅外光譜分析單糖和雙糖。紅外光譜在單、雙糖分析時需要同時在多個波長下測定吸光度，然后使用特殊的多元統計技術將光譜數據與所選組分的濃度聯系起來。采用多元線性回歸（MLR）或偏最小二乘（PLS）回歸方程等方法建模分析，可根據所選波長的吸光度值預測各組分的濃度[35]。紅外光譜法成本低、檢測速度快，但易受環境影響而導致基線不穩定，且糖的結構相似，它們的光譜會相互重疊，影響結果判斷。

HUANG 等[36]采用衰減全反射-中紅外光譜（ATR-MIR）法測定大麥芽中葡萄糖、果糖、麥芽糖和蔗糖，分析了100 個麥芽樣品，用HPLC 法測定單個糖的濃度，PLS 回歸模型對葡萄糖、果糖、麥芽糖和蔗糖的交叉驗證確定系數（R2）分別為0.64、0.84、0.80、0.60；交叉驗證標準誤差（SECV）分別為1.38 mg·mL-1、0.12 mg·mL-1、8.30 mg·mL-1、0.91 mg·mL-1。

CASCANT 等[37]利用衰減的全反射率傅里葉變換紅外光譜，建立了3 個獨立PLS 回歸模型，用于直接測定葡萄糖、果糖和麥芽糖，預測的均方根誤差在7.04 ～12.55 mg（糖）/g（樣品）。目前的ATRFTIR-PLS 方法能夠準確、快速的測定，無需消耗溶劑或產生有毒廢物。SHEN 等[38]采用傅里葉變換中紅外光譜快速測定黃酒中糖和酸的含量，采用PLSR 建立了與糖含量和酸度相關的11 個參數的校正模型，即總糖、非糖固體、葡萄糖、麥芽糖、異麥芽糖、異麥芽糖、泛糖、總酸、氨基酸氮、pH 值和乳酸，在校正步驟中，大部分參數能被準確確定，但異麥芽糖和異麥芽糖的預測結果不理想。LOHR 等[39]分別對菊花和天竺葵插枝的完整插枝和離體葉片上下側進行了近紅外光譜分析，建立了葉片中葡萄糖、果糖、蔗糖和淀粉的偏最小二乘校準模型，用逐步酶光度法對其進行了分析，單糖和可溶性糖含量的校正模型較差，而淀粉和淀粉可溶性糖含量的校正模型較好。

ILASLAN 等[40]利用拉曼光譜技術快速、低成本地定量分析商品軟飲料中的葡萄糖、果糖和蔗糖，利用拉曼光譜數據建立標定模型并繪制曲線，采用PLS回歸方法對光譜數據進行分析，對軟飲料中糖的含量進行預測，葡萄糖、果糖、蔗糖的回歸值的斜率分別為0.967、0.992、1.008，檢驗的決定系數（R2）值分別為0.913、0.998、0.993，并采用HPLC 方法驗證了拉曼光譜法的有效性。

2 展望

隨著現今分析儀器的快速發展進步，單糖、雙糖分析技術發展迅猛，方法多種多樣。目前最常用的檢測方法是HPLC 法，HPLC 可耦合多種檢測器，測糖時可分為需衍生與無需衍生兩類。需衍生的有UV、FLD，因為衍生化操作耗時長、步驟煩瑣，且衍生過程可能引入雜質，所以HPLC-UV、HPLC-FLD 通用性大大降低。RID、ELSD、CAD 無需衍生，操作簡單。物理方法和化學方法有一定局限性，誤差相對較大。生物法是最為通用的方法，其不需要任何特殊的重型儀器，但在一個分析系統中有兩種或更多的酶時會難以判斷，與色譜和電泳方法相比，這種生物分析系統的實際用途是有限的，只能測定某種特定的糖。GC不需要使用超純有機溶劑，但其也要進行衍生化處理，限制了GC 在糖類分析上的發展。IC 靈敏高，分析速度快，PAD 的應用增加了這種檢測方法的選擇性，但IC 有時存在信號不穩定的問題。CE 是一種比較經濟的新型技術，分離效率高、分析時間短，樣品和試劑消耗極低。IR 是一種相對便宜、非破壞性和非常快速的技術方法，可以應用于原始樣品的分析，并允許在一次運行中確定少數成分，但它需要通過化學計量來處理分析數據，而且對外部條件較為依賴，并需要對每個樣品基體的變化進行優化。

綜上所述，每種測定糖的方法都有其優缺點，可以進行破壞性或非破壞性分析、特殊分析物或多分析物的檢測、常規應用或偶然應用等。氣相色譜、生物酶法因其局限性與特殊性，難以發展，而由于色譜柱技術的發展，液相色譜將會不斷完善，成為更有前途的分析方法；離子色譜、毛細管電泳和紅外技術無需衍生化，無有毒物質產生，與綠色化學要求兼容，符合綠色發展要求，有望成為單糖和雙糖分析檢測的標準化方法。