貝類副溶血性弧菌污染情況分析及其預防措施

◎ 肖 穎，方成俊，陳 暉

（東山海關綜合技術服務中心，福建 東山 363401）

根據世界衛生組織的統計，在發達國家中約有80%的疾病與33%的死亡原因與當地水源、水產、食品遭到致病性微生物污染有著密切的關系。近年來，海水中的病原菌與人類感染的關系密切，人們因為接觸或攝入污染水源和海產品而出現細菌性感染的事件在新聞中時有報道。水產品中致病性微生物污染已經成為影響我國水產品出口的主要因素之一。

副溶血性弧菌已經成為我國這幾年由細菌引起的食源性疾病暴發的主要原因之一，人們常因食用了被副溶血性弧菌污染的水產品而出現食物中毒[1-2]。國家食源性病原菌監測網統計結果顯示，近年來我國由副溶血弧菌引起的食物中毒呈顯著上升趨勢，發生規模已經躍居細菌性食物中毒首位，特別是在沿海城市的細菌性食物中毒總數中，由副溶血性弧菌所引起的食物中毒占60%以上[3]。貝類作為我國沿海地區主要的海產品食物來源之一，已經成為漳州市海水養殖產業的重要組成部分，該地區居民對食用貝類的需求較高，其食品安全問題不容忽視[4]。

牡蠣等貝類為濾食性軟體動物，活動性低，在濾食的同時也可將水體中的有害物質吸入體內并蓄積，具有很強的生物富集能力。近岸海域擁有豐富的微生物資源、富含大量的有機物質，是海產品尤其是貝類重要的天然養殖區域。海域水體環境是影響這些海產品生長和分布的主要因素。水體中病原菌會直接或間接地影響海產品的衛生質量，或者以食物鏈的方式傳遞給人類，給人類的身體健康造成危害[5]。本文以東山海灣養殖貝類為研究對象，以在該區域海水養殖貝類中檢出了副溶血性弧菌為例，旨在了解該地區海水養殖貝類產品的污染水平，并為副溶血性弧菌的預防提供一定的參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

樣品采集：在東山島海灣不同海域分別選取3個采樣點（采樣點1、采樣點2、采樣點3），在各采樣點采集扇貝、牡蠣、翡翠貽貝和鮑魚等4種海水養殖貝類樣品，共采集樣品36份。

試劑：3% APW、TCBS瓊脂、3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂、3% NaCl TSA瓊脂、氧化酶試劑、干制生化鑒定試劑盒（以上試劑為北京陸橋生物科技有限公司）；弧菌顯色培養基（法國科瑪嘉公司）；Thermo GNID革蘭氏陰性菌鑒定板。

1.2 儀器與設備

恒溫恒濕培養箱；Thermo Aris 2X全自動微生物鑒定儀。

1.3 方法

1.3.1 樣品的前處理

貝類樣本中病原菌檢測取樣前，應先在干凈的清水中洗凈貝類的外殼并將水分甩干，用75%的乙醇消毒，然后以無菌操作切斷閉殼肌，打開貝殼，將含有內臟的貝肉和貝液全部取出，每個檢測樣品至少應包含6個貝類個體。

1.3.2 試驗過程

以無菌操作稱取貝類樣品25 g，加入盛有3%APW（225 mL）的無菌均質袋中，將其放置于拍擊式均質器中拍打2 min，后置于（36±1）℃培養8～18 h；對所有變渾濁的增菌液，用接種環挑取一環前增菌液，劃線分離在TCBS平板和弧菌顯色培養基上，置于（36±1）℃培養18～24 h；若有可疑菌落生長，每個平板上挑取至少5個可疑菌落，劃線接種3% NaCl胰蛋白胨大豆瓊脂平板，置于（36±1）℃培養18～24 h；培養后進行氧化酶試驗（用無菌玻璃棒挑取純培養的單個菌落，涂布在氧化酶試劑浸潤的濾紙上，10 s內觀察顏色變化）、涂片鏡檢（將可疑菌落進行革蘭氏染色、鏡檢，觀察其染色情況及形態特性）、3% NaCl三糖鐵試驗[挑取純培養的單個可疑菌落，接種3% NaCl三糖鐵瓊脂斜面，接種時先斜面劃線后穿刺底層，（36±1）℃培養24 h觀察結果]及動力試驗；同時接種干制生化鑒定試劑盒和Thermo Aris 2X全自動微生物鑒定儀進行生化鑒定確認實驗。

2 結果與分析

2.1 副溶血性弧菌的鑒定結果

2.1.1 菌落形態

培養后在TCBS平板上，菌落形態呈圓形、表面突起且光滑的半透明綠色菌落，用接種環挑取可疑菌落時有類似口香糖質感；在弧菌顯色培養基上出現紫紅色的可疑菌落，如圖1所示。

圖1 副溶血性弧菌的鑒定結果圖

2.1.2 氧化酶試驗結果

可疑菌落經氧化酶試驗，濾紙在10 s之內呈現紫紅色，為氧化酶陽性結果。

2.1.3 涂片染色鏡檢結果

可疑菌落經革蘭氏染色鏡檢后為革蘭氏陰性菌，菌體呈棒狀、弧狀等形態，未發現有芽孢。

2.1.4 3% NaCl三糖鐵試驗結果

可疑菌落在3% NaCl三糖鐵瓊脂中，斜面培養基的顏色不變，底層培養基的顏色變黃且不變黑，同時沒有產生氣泡。

2.1.5 副溶血性弧菌生化反應結果

副溶血性弧菌生化反應結果見表1。根據菌落形態、氧化酶試驗、涂片染色鏡檢、三糖鐵試驗以及可疑菌落的嗜鹽性試驗、糖發酵等生化反應的結果可以看出，其符合副溶血性弧菌的反應特征，為陽性鑒定結果。

表1 副溶血性弧菌生化反應結果表

2.1.6 全自動微生物鑒定儀結果

全自動微生物鑒定儀結果見表2、表3。由鑒定結果可看出，副溶血性弧菌的概率為95.29%，結合可疑菌落形態特征、鏡檢、氧化酶、三糖鐵以及常規生化鑒定結果可以推斷其為副溶血性弧菌。

表2 鑒定結果詳細報告表

表3 微生物鑒定結果表

2.2 副溶血性弧菌的污染情況

經過檢測，在36份貝類樣品中，共檢出副溶血性弧菌7批次，檢出率為19.4%（7/36）。

2.3 不同采樣點副溶血性弧菌的污染情況

不同采樣地點副溶血性弧菌的污染情況如表4所示。副溶血性弧菌在3個采樣點均有一定的檢出率，其中采樣點1的檢出率高于其他采樣點，為28.6%（4/14）。采樣點2的檢出率最低，為10.0%（1/10），分析原因，與各采樣點養殖海域水體的污染程度、樣品類別和采樣時間等均密切相關。

表4 采樣點（1、2、3）副溶血性弧菌的污染情況表

3 副溶血性弧菌預防措施

副溶血性弧菌作為一種常見的病原微生物，多存在于海產品及貝類食品中。副溶血性弧菌目前已經成為引起我國食源性疾病的最主要的微生物致病因子，若食用了被其污染的相關海產品，可能會引起急性腸胃炎并引發食物中毒，如果治療不及時，甚至可能導致死亡。因此，充分了解副溶血性弧菌的預防措施，不僅有利于海水貝類的養殖業的發展，而且對人們的生命安全也具有極其重要的意義。

3.1 海水貝類養殖及加工產業的預防措施

海水貝類養殖是貝類產品副溶血性弧菌污染的源頭。①監管部門應加強對貝類養殖海域及貝類產品中副溶血性弧菌污染情況的監控，對不同污染程度的海域進行有效管理。②可利用貝類自身濾食性的特點，通過凈化處理，將貝類放入清潔干凈的海水域中，使其體內的微生物等污染物排出體外。③貝類產品在進行生產加工的過程中應加強對副溶血性弧菌的檢測，及時監測產品的質量，同時對原料及產品進行低溫保存，能有效地控制副溶血性弧菌生長。

3.2 日常生活中的預防措施

相關部門應當加強對餐飲等行業的食品安全監督，以保證餐飲行業食品的質量。在日常生活中食用海產品時，要采購新鮮的食材，及時置于低溫環境下保存，由于食物中的副溶血性弧菌可通過操作臺、菜板等工具污染其他食品，因此在處理食物時應生熟分開并隨時保持清潔，避免交叉污染。生食海產品是副溶血性弧菌最主要的傳播途徑，應避免生食水產品，食物要完全煮熟，食用前應徹底加熱，以達到滅菌目的，

4 結論

此次東山海灣養殖貝類中副溶性血弧菌檢出率處于較低的水平，分析原因，與東山灣養殖海域水體的污染程度較低、環境較好有關，同時與采樣時間非有利于副溶血性弧菌生長的高溫天氣等均有影響。副溶血性弧菌的檢出提醒本地區貝類產品在一定程度上可能也存有食品安全隱患。管理部門、養殖場、加工廠與消費者均應加以重視，采取必要的措施，以降低副溶血性弧菌感染的危害，預防由副溶血性弧菌引起的食物中毒，同時，也能夠有效地提高漳州市貝類產品的出口質量和國際競爭力。