醬鹵肉中酸性橙Ⅱ號檢測的不確定度分析

◎ 楊軍麗，馮所蘭，劉 真，王玉梅

（南京市食品藥品監督檢驗院，江蘇 南京 211198）

酸性橙Ⅱ號是一種色澤鮮艷、著色性強的水溶性化工染料，為了吸引顧客，增大銷量，部分不法商販會將其用作食品中的著色劑和添色劑。酸性橙Ⅱ號屬于工業染料，一旦食用后，就會對人體健康產生嚴重影響，我國衛生部在2008年已經明令禁止其在食品加工中使用[1]。本實驗室按照SN/T 3536—2013 中的方法，評定了醬鹵肉中酸性橙Ⅱ號殘留量的不確定度。不確定度是對檢測結果好壞與否的一個重要評判指標[2-5]。本文參照《測量不確定評定與表示》（JJF 1059.1—2012）、《化學分析中的不確定度的評估指南》[6]，測量并評定其不確定度，可確保檢測過程和結果的可靠性。

1 儀器與材料

1.1 試驗儀器

Agilent 1260 Infinity Ⅱ高效液相色譜儀；賽多利斯CPA225D 電子天平；色譜柱：Eclipse Plus C18（4.6 μm×250 mm）。

1.2 材料與試劑

酸性橙Ⅱ號 (曼哈格，100 mg，98.3%)；玻璃量器經檢定均為A 級；甲醇、乙酸銨及甲酸均為色譜純級；乙醇及氨水均為分析純級。

2 試驗與方法

2.1 樣品處理

醬鹵肉來自食品安全監督抽檢空白基質樣品，稱取2 g 加入400 μL 的標準酸性橙Ⅱ 號標準溶液（0.988 0 μg/mL），理論加標濃度為 0.2 mg/kg。 將其充分渦旋震蕩 5 min、超聲 5 min 混勻后，作為檢測樣品。

首先，準確稱取制備好的均勻樣品2 g（精確至0.01 g）于50 mL 離心管中，向其中加入20 mL 乙醇-氨水溶液，超聲波提取30 min，再振蕩提取10 min 后，以80 000 r/min 將其離心10 min，將試樣再重復提取一次后，合并提取液，將提取液濃縮至約10 mL，混勻后待凈化。接著，依次用3 mL 甲酸水溶液和3 mL甲醇溶液淋洗固相萃取柱，再將待凈化液轉移至固相萃取柱中，用氨水甲醇混合溶液6 mL洗脫固相萃取柱。最后，將洗脫液收集后進行氮吹至近干，向試管中準確加入2 mL超純水渦旋均勻，過濾后供液相色譜檢測。

2.2 色譜條件

色譜條件：流動相；甲醇∶20 mmol/L 乙酸銨=65 ∶35；色譜柱：Agilent Eclipse C18 150 mm×4.6 mm，粒徑為5 μm；檢測波長：484 nm；流速：1 mL/min；進樣量：10 μL；柱溫為室溫即可。

2.3 檢測方法

標準溶液的配制：準確稱取10.05 mg 酸性橙II 號標準品（純度＞95%），用水稀釋并定容至10 mL 容量瓶中，配成濃度為0.988 0 mg/mL 的標準儲備，4 ℃貯藏備用。采用外標法用水稀釋標準溶液，并配制成所需的標準工作曲線。

2.4 建立數學模型

測量不確定度數學模型如下所示：

式中，X為試樣中酸性橙II 號的含量，mg/kg；C為試樣中酸性橙Ⅱ號的濃度，μg/mL；V為試樣最終的定容體積，mL；m為稱取試樣的質量，g。

3 酸性橙Ⅱ號測定不確定度來源分析

3.1 總體分析

本文基于高效液相色譜法測定食品中酸性橙Ⅱ號殘留量的不確定度，主要來自以下幾個方面：標準溶液的配制及標準工作液的稀釋誤差、標準溶液配制過程中的器具刻線誤差、實驗室環境溫度的變化、樣品的稱量誤差、樣品的定容體積誤差、重復性的測定等。

3.2 標準溶液及其配置過程中引入的相對標準不確定度

3.2.1 標準溶液引入的相對不確定度urel(C1）

標準溶液引入的相對不確定度urel(C1），由標準物質純度、標準物質稱量過程及稀釋定容過程3 個不確定度分量組成。

（1） 標準物質純度誤差引入的不確定度urel（P1）

通過查閱其標準物質證書可知，其純度誤差是± 2.0%，參照均勻分布，，計算相對不確定度為：

（2）標準物質稱量誤差引入的不確定度urel(M1）

標準品稱量：稱取酸性橙II 號標準品質量為10.05 mg，使用天平的精度為0.01 mg，按照均勻分布。稱量重復性影響甚微，所以由其引入的不確定度不予考慮。由標準品稱量導致的相對標準不確定度為：

（3）標準物質定容誤差的不確定度urel(V1）

標準溶液的配制：查得10 mL 單線容量瓶的允差規定為± 0.020 mL，根據矩形分布評定其相對標準不確定度為：

標準溶液所引入的不確定度：

3.2.2 標準溶液配制過程引入的相對標準不確定度urel(C0）

用1.0 mL 移液管移取酸性橙II 號標準儲備液1.0 mL，置于潔凈100 mL 容量瓶中，水定容、混勻，濃度為0.988 0 mg/L。按照標配配置標準溶液，酸性橙II 的標準色譜圖詳見圖1。依據JJG 196—2006《常用玻璃量器檢定規程》，采用容量允差法評定不確定度，分析稀釋標準溶液引入的不確定度。

圖1 酸性橙Ⅱ號的標準色譜圖

（1）玻璃量器引入的相對標準不確定度urel(V）

經查1.0 mL 移液管校準容量允差是± 0.007 mL，參照均勻分布，計算相對標準不確定度為：

查得100 mL 容量瓶校準容量允差是± 0.01 mL，參照均勻分布，計算相對標準不確定度為：

（2）環境溫度變化引入的不確定度urel(T）

得到酸性橙Ⅱ號標準溶液配制引入的相對不確定度為：

3.3 樣品制備引入的不確定度

試樣制備是將樣品經充分混勻后稱量，因此，樣品具備很好的均勻性，可以忽略取樣所產生的不確定度。

3.3.1 樣品的稱量引入的相對不確定度urel(M）

稱取2 g 樣品，使用的電子天平查得其最大允許誤差是0.01 g， 參照均勻分布，。得到稱量帶入的相對不確定度為：

3.3.2 樣品最終定容體積的相對標準不確定度urel(V）

2.0 mL 移液管容量允差為±0.012 mL，按三角分布，則2.0 mL 移液管相對不確定度為：

得到環境溫度變化引起的相對不確定度為：

試樣最終定容體積引入的相對不確定度為：

3.3.3 測量重復性引起的相對標準不確定度urel(Y）

本研究依據標準方法，對醬鹵肉樣品進行6 次重復測量，計算平均值及標準偏差，得出由測量重復性帶入的相對標準不確定度，測量結果和標準偏差的相對不確定度計算結果見表 1 。

表1 平行測量酸性橙II 帶入的相對標準不確定度表(n=6)

3.4 試劑空白

本實驗所用試劑均符合標準規定的要求，由于空白所產生的的影響很小，可忽略不計 。

3.5 合成不確定度

綜合上述所有關于不確定度的分析，樣品中酸性橙Ⅱ號的測定結果相對標準不確定度為詳見表2。

表2 酸性橙Ⅱ號測定的相對標準不確定度表

3.6 擴展不確定度urel（X）

取擴展因子K=2，在95%置信水平下，相對擴展不確定度為：urel(X) =K·urel(X) = 2 . 5 6 ×10-2。

3.7 測量結果

實驗數據中，稱樣量為2.000 1 g 樣品中酸性橙Ⅱ號含量為0.173 mg/kg，則其擴展不確定度為：U=ure（l(x）×0.173=0.00443 mg/kg。酸性橙Ⅱ號的測定結果表示為：(0.173±0.004 43) mg/kg。

4 結論

本實驗采用液相色譜法對醬鹵肉制品中酸性橙Ⅱ號含量進行了測定，由分析結果可知，標準物質的純度對結果的影響較大，而試樣的定容、稱量以及儀器進樣重復性，對結果的影響相對較低。因此，在今后的檢測工作中，檢測人員對于這種非法添加的物質，需時刻保持數據敏銳性，在檢測過程中，應當選用符合標準純度要求的標準品和玻璃器皿。同時，檢測人員要提高自身技術水平，開展測試前應該仔細研讀標準文書，把握好實驗操作中的各個關鍵控制點。例如，通過自行加標、內部質控樣、留樣待測等多種方式來確保回收率，以保證數據準確可靠。必要時，測試人員還可以對實驗結果進行不確定度評價，做到心中有數，不錯判、不誤判，為食品行業的健康發展以及守護人民群眾“舌尖上的安全”，貢獻一份綿薄之力。