血清hsa-miR-34a-3p及hsa-miR-206表達(dá)對(duì)妊娠合并甲減患者子代心肌損害的預(yù)測(cè)研究*

杜 麗,程 佳△,歐陽龍,萬鳳超

1.宜賓市第二人民醫(yī)院婦產(chǎn)科,四川宜賓 644000;2.宜賓市中醫(yī)院檢驗(yàn)科,四川宜賓 644000

妊娠合并甲狀腺功能減退(簡(jiǎn)稱甲減)是婦產(chǎn)科常見疾病,其發(fā)病機(jī)制主要是母體甲狀腺素合成和分泌減少,從而造成機(jī)體的代謝功能衰退[1]。妊娠合并甲減易誘發(fā)流產(chǎn)、胎兒生長受限、胎盤剝離、胎兒心肌損害等并發(fā)癥,嚴(yán)重影響妊娠結(jié)局[2]。伴隨生活方式的改變,妊娠合并甲減的發(fā)病率呈上升趨勢(shì),不利于孕婦及胎兒健康。目前,臨床多采用藥物治療妊娠合并甲減,可調(diào)節(jié)孕婦甲狀腺激素水平[3],改善妊娠結(jié)局,但經(jīng)藥物治療后仍有部分妊娠合并甲減患者存在子代心肌損害的情況,因此,及時(shí)有效地預(yù)測(cè)妊娠合并甲減子代心肌損害情況以制訂有效治療方案至關(guān)重要。近年來,微小核糖核酸(miRNA)逐漸受到臨床研究關(guān)注,有研究報(bào)道,miRNA可通過調(diào)控靶基因表達(dá)水平進(jìn)而參與心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展過程[4]。hsa-miR-34a-3p和hsa-miR-206是miRNA家族的重要成員,相關(guān)研究表明,二者水平變化異常與心率失常及冠狀動(dòng)脈病變關(guān)系密切[5-6]。但目前關(guān)于hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206與妊娠合并甲減患者子代心肌損害的關(guān)系報(bào)道較少,故本研究通過分析血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206在妊娠合并甲減患者血清中的表達(dá)水平,探討二者對(duì)妊娠合并甲減患者子代心肌損害的預(yù)測(cè)價(jià)值,以為臨床病情評(píng)估及干預(yù)提供參考。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年8月至2021年8月宜賓市第二人民醫(yī)院收治的妊娠合并甲減患者248例作為觀察組,另選取同期健康體檢孕婦236例為對(duì)照組。觀察組年齡為22～41歲,平均(31.08±2.21)歲;孕周27～36周,平均(31.42±2.36)周;孕產(chǎn)史:初產(chǎn)婦152例,經(jīng)產(chǎn)婦96例。對(duì)照組年齡為23～39歲,平均(30.35±2.47)歲;孕周28～35周,平均(31.15±2.24)周;孕產(chǎn)史:初產(chǎn)婦138例,經(jīng)產(chǎn)婦98例。兩組年齡、孕周、孕產(chǎn)史比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)觀察組均符合妊娠期合并甲減臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[7],均遵醫(yī)囑用藥;(2)孕婦年齡均>18歲;(3)所有研究對(duì)象均為單胎妊娠。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并妊娠期糖尿病、妊娠期高血壓等妊娠期合并癥;(2)基因遺傳病孕婦;(3)既往有甲狀腺相關(guān)病史;(4)宮內(nèi)感染;(5)精神疾病孕婦;(6)近1個(gè)月內(nèi)服用過免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素。本研究已通過醫(yī)院倫理委員會(huì)審批(批號(hào):201906-002),受試者或家屬均知曉情況并簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平檢測(cè) 采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法檢測(cè)血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平,分別采集對(duì)照組體檢當(dāng)天及觀察組入院時(shí)靜脈血5 mL,分別保存于抗凝試管中,常溫靜置血液30 min后采取離心處理,于10 min后分離上清液,-80 ℃保存以待使用。使用miRNA提取試劑盒(北京百奧萊博科技有限公司)提取血清中miRNA,用cDNA合成試劑盒(北京天根生化科技公司)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對(duì)hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè),條件為95 ℃反應(yīng)5 min、95 ℃反應(yīng)30 s、58 ℃反應(yīng)30 s、72 ℃反應(yīng)30 s,共循環(huán)40次;以U6為內(nèi)參,采用2-ΔΔCt法計(jì)算每個(gè)miRNA的相對(duì)表達(dá)量,為保證數(shù)據(jù)準(zhǔn)確,每個(gè)樣本重復(fù)3次。引物序列見表1。

表1 hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206引物序列

1.2.2治療方法 妊娠合并甲減患者入院后采用左甲狀腺素鈉片治療,并根據(jù)患者甲狀腺激素功能情況調(diào)節(jié)用藥劑量。

1.3隨訪情況 兩組均隨訪至妊娠結(jié)束,觀察兩組子代心肌損害發(fā)生情況。其中心肌損害判定標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[8]:超聲心動(dòng)圖檢查顯示新生兒左心室舒末端內(nèi)徑或者左心房?jī)?nèi)徑大于同齡新生兒,或者新生兒右心室內(nèi)徑或右心房?jī)?nèi)徑大于同齡新生兒,或新生兒右心室心肌收縮峰速度、右心室舒張期峰值速度降低,或者收縮期峰值應(yīng)變、收縮期峰值應(yīng)變率降低;心電圖檢查可發(fā)現(xiàn)Q-T間期延長,或ST段水平壓低,或異常Q波,或T波倒置,或竇性心動(dòng)過緩/過速,或頻發(fā)室早,或QT離散度增大,或房室傳導(dǎo)阻滯等;血清心肌酶譜檢查可發(fā)現(xiàn)磷酸肌酸激酶、磷酸肌酸激酶同工酶、乳酸脫氫酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、α-羥丁酸脫氫酶水平較正常同齡新生兒明顯升高;或伴隨氣促氣急、呼吸困難、心律不齊(心跳加快、心跳節(jié)律紊亂)等臨床表現(xiàn)。根據(jù)觀察組子代心肌損害發(fā)生情況將觀察組患者進(jìn)一步分為發(fā)生組52例和未發(fā)生組196例。

1.4觀察指標(biāo) (1)觀察組與對(duì)照組血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平比較。(2)觀察組與對(duì)照組子代心肌損害發(fā)生情況。(4)發(fā)生組、未發(fā)生組血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平比較。(5)分析妊娠合并甲減患者子代心肌損害的影響因素:比值比(OR)、95%可信區(qū)間(95%CI)。(6)血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)妊娠合并甲減患者子代心肌損害的預(yù)測(cè)價(jià)值:最佳截?cái)帱c(diǎn)(cut-off值)、靈敏度、特異度、曲線下面積(AUC)、95%CI,其中聯(lián)合預(yù)測(cè)陽性以任一指標(biāo)預(yù)測(cè)陽性為準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

2.1對(duì)照組和觀察組血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206表達(dá)水平比較 觀察組血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 對(duì)照組和觀察組血清hsa-miR-34a-3p、hsa- miR-206表達(dá)水平比較

2.2觀察組與對(duì)照組子代心肌損害發(fā)生情況 隨訪至妊娠結(jié)束,對(duì)照組子代心肌損害的發(fā)生率為1.69%(4/236),觀察組子代心肌損害的發(fā)生率為20.97%(52/248)。

2.3發(fā)生組、未發(fā)生組血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平比較 發(fā)生組血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平高于未發(fā)生組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 發(fā)生組和未發(fā)生組血清hsa-miR-34a-3p、 hsa-miR-206表達(dá)水平比較

2.4妊娠合并甲減患者子代心肌損害的影響因素 發(fā)生組與未發(fā)生組年齡、孕周、孕產(chǎn)史及甲狀腺家族史占比比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),發(fā)生組促甲狀腺激素(TSH)高于未發(fā)生組(P<0.05),游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)、游離甲狀腺素(FT4)、總?cè)饧谞钕僭彼?TT3)、總甲狀腺素(TT4)低于未發(fā)生組(P<0.05)。見表4。收集影響妊娠合并甲減患者子代心肌損害的影響因素,如年齡、孕周、孕產(chǎn)史、甲狀腺家族史、TSH、FT3、FT4、TT3、TT4、血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平將其作為自變量,另將子代心肌損害發(fā)生情況作為因變量,對(duì)變量進(jìn)行賦值,見表5。經(jīng)Logistic回歸分析可知hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206、FT3、FT4、TSH、TT3、TT4是妊娠合并甲減患者子代心肌損害的影響因素(P<0.05),見表6。

表4 發(fā)生組和未發(fā)生組一般資料比較或n(%)]

表5 變量賦值

表6 多因素Logistic回歸分析

2.5血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)妊娠合并甲減患者子代心肌損害的預(yù)測(cè)價(jià)值 血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平聯(lián)合預(yù)測(cè)妊娠合并甲減患者子代心肌損害的靈敏度均高于單獨(dú)預(yù)測(cè)(χ2=7.386,P=0.007;χ2=5.283,P=0.022),AUC也高于單獨(dú)預(yù)測(cè)(Z=2.420,P=0.015;Z=2.332,P=0.019),特異度與單獨(dú)預(yù)測(cè)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.024,P=0.155;χ2=0.690,P=0.406)。見圖1、表7。

圖1 血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)妊娠合并甲減患者子代心肌損害的ROC曲線

表7 血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)妊娠合并甲減患者子代心肌損害的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討 論

妊娠合并甲減是妊娠期一種常見并發(fā)癥,且發(fā)病率較高,約占妊娠期合并癥的5.6%[9],嚴(yán)重威脅孕婦及胎兒健康。臨床多采用左甲狀腺素鈉片等藥物治療妊娠合并甲減,其可有效調(diào)節(jié)患者甲狀腺激素功能,但仍有部分患者在接受治療后出現(xiàn)子代心肌損害的情況。本研究結(jié)果顯示,觀察組子代心肌損害的發(fā)生率為20.97%,發(fā)病率較高,可能與所納入的妊娠合并甲減患者病情嚴(yán)重程度、個(gè)體特性及對(duì)藥物的耐受性等有關(guān)。因此早期預(yù)測(cè)妊娠合并加減患者子代心肌損害的發(fā)生情況以制訂有效干預(yù)措施意義重大,但目前尚缺乏早期預(yù)測(cè)妊娠合并加減子代心肌損害的有效指標(biāo)。

本研究結(jié)果顯示,觀察組血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平高于對(duì)照組,提示妊娠合并甲減患者體內(nèi)hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平異常表達(dá)。hsa-miR-34a-3p與動(dòng)脈粥樣硬化具有相關(guān)性,其水平高表達(dá)可加重冠狀動(dòng)脈粥樣硬化程度,這與hsa-miR-34a作用機(jī)制相同[10]。妊娠期合并甲減可使機(jī)體內(nèi)脂代謝紊亂,進(jìn)而使內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷,并通過氧化應(yīng)激反應(yīng)加重冠狀動(dòng)脈粥樣硬化[11],進(jìn)而使hsa-miR-34a水平升高。有研究發(fā)現(xiàn),hsa-miR-206在患有甲減的小鼠中的表達(dá)高于甲狀腺功能正常的小鼠[12]。相關(guān)研究指出,橋本氏甲狀腺炎患者血清hsa-miR-206顯著高于健康對(duì)照人群,證實(shí)hsa-miR-206可能與甲狀腺功能的調(diào)節(jié)作用密切相關(guān),且hsa-miR-206參與了甲狀腺功能減退的發(fā)生過程[13]。另有研究顯示,甲狀腺功能亢進(jìn)患者miR-206水平降低[14],本研究中妊娠合并甲減患者miR-206水平降低,與其研究結(jié)果具有相似性。

近年來研究發(fā)現(xiàn),miRNA參與多種疾病的發(fā)病進(jìn)程,與心肌損害密切相關(guān),異常表達(dá)的miRNA可預(yù)測(cè)心肌損害發(fā)生情況[15-16]。另有研究指出,hsa-miR-34a-5p在心肌纖維化的大鼠中表達(dá)上調(diào),進(jìn)一步提示miRNA與心肌損害具有相關(guān)性[17]。本研究結(jié)果顯示,發(fā)生組血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平高于未發(fā)生組,經(jīng)Logistic回歸分析可知hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206高表達(dá)是妊娠合并甲減患者子代心肌損害的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。hsa-miR-34a-3p可通過減少心肌細(xì)胞凋亡而減輕心肌損害,抑制hsa-miR-34a-3p表達(dá)可減少心肌細(xì)胞肥大、凋亡,改善心肌損害。有研究顯示,hsa-miR-34a-3p水平升高可增加冠狀動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程,進(jìn)而造成心肌細(xì)胞損傷[18]。hsa-miR-206是一種肌源性miRNA,心肌肥大以及心肌細(xì)胞存活密切相關(guān),在心臟的發(fā)育及心血管疾病中可發(fā)揮重要作用[19]。DING等[20]研究發(fā)現(xiàn),hsa-miR-206可通過抑制自噬相關(guān)基因的表達(dá),進(jìn)而降低心肌細(xì)胞的凋亡,使心肌損害減輕。另有研究證實(shí),炎癥性心肌病患者h(yuǎn)sa-miR-206異常高表達(dá),本研究結(jié)果與其具有一致性[21]。母體血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206可通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi),進(jìn)而對(duì)胎兒心肌細(xì)胞發(fā)育產(chǎn)生影響,導(dǎo)致子代心肌損害。本研究ROC曲線分析顯示,血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平聯(lián)合預(yù)測(cè)的靈敏度和AUC均高于單獨(dú)預(yù)測(cè),且二者均對(duì)妊娠合并甲減患者子代心肌損害具有預(yù)測(cè)價(jià)值。因此,臨床應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)測(cè)血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平,從而指導(dǎo)臨床工作者及時(shí)采取相應(yīng)干預(yù)措施,進(jìn)而降低妊娠合并甲減患者子代心肌損害發(fā)生率。另本研究結(jié)果顯示,FT3、FT4、TSH、TT3、TT4亦均是妊娠合并甲減患者子代心肌損害的影響因素,可能是TSH水平越高,FT3、FT4、TT3、TT4越低,妊娠合并甲減患者病情越嚴(yán)重,子代心肌損害的概率越大[22]。

綜上所述,妊娠合并加減患者血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平呈現(xiàn)高表達(dá),此兩項(xiàng)血清指標(biāo)對(duì)妊娠合并加減患者子代心肌損害具有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值,對(duì)臨床防控可能有指導(dǎo)意義。但本研究存在一定的局限性,未能深入研究血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206影響妊娠合并加減患者子代心肌損害的具體作用機(jī)制,缺少細(xì)胞/分子層面的研究,后續(xù)需進(jìn)一步對(duì)此展開探索分析。