紫外線對狂犬病毒的滅活效果

曲曉蒙,張志剛

(北京民海生物科技有限公司,北京 102600)

0 引言

狂犬病毒(Rabies virus,RV)屬于彈狀病毒科(Rhabdoviridae)狂犬病毒屬(Lyssavirus),其頭部為半球形,末端常為平端,形態呈典型的子彈狀,長約130～240 nm,直徑65～80 nm[1],是引起狂犬病的病原體。它是一種高神經營養及高度可變病毒,發病期通常會持續數月,病毒感染周邊神經進而上升到背根神經節,一旦感染到脊髓,病毒迅速擴散至大腦,引發致命性腦炎,最終殺死宿主。該病毒易被日光、紫外線、甲醛、新潔爾滅、50%～70%酒精等滅活,病毒懸液經56 ℃ 30～60 min或100 ℃ 2 min即滅活,病毒于-70 ℃或凍干后置0 ℃～4 ℃中可保持活力數年,被感染的組織可保存于50%甘油內送驗[1]。

紫外線殺菌消毒是利用適當波長的紫外線破壞微生物機體細胞中的DNA (脫氧核糖核酸)或RNA(核糖核酸)的分子結構,造成生長性細胞死亡及再生性細胞死亡,達到殺菌消毒效果。根據國際紫外線協會(International Ultraviolet Association)報道,在254 nm的光照下,40 mJ/cm2的劑量至少可以殺死99.99%的任何病原微生物[2-3]。紫外線殺菌消毒不會取代清潔消毒,而是對其他經過驗證的消毒方法的一種補充。為確認紫外線對狂犬病毒的滅活效果,于2022年3月30日—2022年5月10日在北京某生物科技有限公司狂犬5C車間進行實驗,以期為狂犬病疫苗生產車間的生物安全風險防控提供參考。

然而胡塞爾始終認為：“這個共同的、客觀的世界是被設想的，它是被我與他人所意識到的，但它不是被我體驗到的，因為它隱含著對沒有真正被體驗到的和無法真正被體驗到的、而是被他人體驗到周圍世界。”（轉引自耿寧2011：10）這決定了交互主體性語境下，譯者無法像作者本人那樣領會原作的完整意義，讀者同樣也無法完整領會譯作。在翻譯的實際操作層面，所謂愛的共同體和譯者三級交互是終極目標，只是理論上的存在，但譯者交互隱形所強調的主體交互正是限制譯者過度發揮主觀能動性的無形尺度。據此，我們進一步探究譯者交互隱形對譯本呈現的尺度價值，繼而提出譯者交互隱形梯升度。

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1 試驗材料與設備

狂犬病毒懸液。狂犬病病毒固定毒(PM株)購自于法國巴斯德,由北京民海生物科技有限公司狂犬5C車間保存培養,接種于MRC-5細胞,經培養、收獲制成狂犬病毒懸液,初始病毒懸液滴度為7.31 gLD50/mL。

2.2.1 病毒載體的制備

凈化設備層流傳遞窗為中科圣杰科技有限公司制造,安裝于北京某生物科技有限公司狂犬5C車間,符合《消毒與滅菌效果的評價方法與標準GB 15981-1995》的要求,紫外線輻照強度≥70 μw/cm2。

2 實驗方法

2.1 殺菌紫外線強度確認

需獲得測試病毒并進行培養、擴增,以得到充足的病毒量。制備狂犬病毒懸液,確認初始病毒懸液的滴度,在生物安全柜下將其稀釋至>31 g LD50/mL,抽取稀釋后的病毒液1 mL均勻涂布于φ 9 cm玻璃平皿內,此病毒載體需現制現用,按照上述方法配置陽性對照,要求陽性對照病毒滴度>31 g LD50/mL,制備完成后,置于生物安全柜內風干(此試驗連續進行3次測試,測試用量共配置9皿,其中試驗用6皿,對照3皿)。

2.2 病毒滅活試驗

試驗動物選擇SPF級的小鼠。KM小鼠為2022年4月11日購自于斯貝福(北京)生物科技有限公司,級別為SPF級,規格為11～13 g♀,合格證編號:110324221101842963,小鼠數量共432只。

在殺菌過程中,紫外線強度是一個非常重要的因素,它能夠影響殺菌效果及速度。因此,需對紫外線強度進行確認,以確保殺菌的有效性。一種常用的方法是使用紫外線強度計或紫外線強度指示卡來測量紫外線強度。測量前,將紫外線燈管清潔干凈,以免燈管表面的污垢及灰塵影響紫外線透過率。將紫外線強度計或指示卡置于紫外線輻射下,按照說明書上的操作步驟進行測量,記錄下測得的數值。為了確保殺菌的有效性,紫外線強度通常應達到一定的標準。例如:對于一些常見的病毒及細菌,要求紫外線強度達到30 μW/cm2以上,輻照時間為15～30 min。需要注意的是,不同的細菌及病毒對紫外線的敏感程度不同,因此在確定紫外線強度標準時,需結合具體情況進行評估。試驗人員用在效期內的紫外線強度指示卡對層流傳遞窗的紫外線強度進行檢測,指示卡顏色深于或與標準色塊一致。

2.2.2 測試方法及布點圖

將病毒置于一定條件下進行滅活處理,滅活方法包括熱處理、化學處理、紫外線輻照等。待玻璃平皿內的病毒液風干后,立即按照布點圖在層流傳遞窗內放置含病毒載體的玻璃培養皿,關閉傳遞窗門,15 min紫外線消毒完成后,取出平皿,立即添加1 mL病毒培養液于平皿內進行復溶,收集至樣品管中。待玻璃平皿內的病毒液風干后,陽性對照中立即添加1 mL病毒培養液于平皿內進行復溶,并完成收集。將供試品與陽性對照進行檢測。

圖1 實驗布點圖

2.2.3 動物法檢測

經過滅活處理后的病毒需要進行檢測,以確認其是否失去傳染性。常用的病毒檢測方法包括感染細胞、動物等或采用特定的檢測試劑及方法。供試品、對照組分別注射48只小鼠,注射量為0.03 mL/只,注射方式為腦腔注射。小鼠接種后飼養14 d。注射后第3 d開始逐日逐只觀察,觀察至第14 d。第14 d有麻痹、癱瘓等狂犬病癥狀的動物按死亡計算。前3 d內死亡動物不計。

3 結果

3.1 紫外線強度指示卡結果

① 1 mL初始病毒液+9 mL病毒培養液→10 mL。

如圖2所示,采用紫外線強度指示卡進行檢測,檢測結果符合要求,確認此次試驗中紫外線輻照強度≥70 μw/cm2。

圖2 紫外線強度指示卡

3.2 病毒懸液稀釋過程

初始病毒懸液滴度為7.31 g LD50/mL。

初始病毒懸液稀釋至>31 g LD50/mL:

紫外線強度指示卡是一種用于檢測紫外線輻射強度的工具。它通常由一個小卡片和一個特殊的化學試劑組成,化學試劑能夠在不同紫外線輻射強度下發生變色反應。使用時,將指示卡暴露在紫外線輻射下,一段時間后,觀察化學試劑變色程度及顏色,判斷紫外線輻射的強度范圍。

供試品無動物死亡,陽性對照組有動物死亡。

獨立學院法學專業在構建課程體系時要適當調整理論學時和實踐學時的比例，使理論學時和實踐學時的比例至少達到7∶3以上，著重訓練學生的法律職業素養與職業技能，強化學生的創新精神、實踐能力以及運用法律思維解決實際法律問題的能力。

③ 3 mL②+27 mL病毒培養液→30 mL。

[23]阿蘭·羅伯-格里耶：《自然本性、人本主義、悲劇》，《快照集/為了一種新小說》，余中先譯，長沙：湖南美術出版社，2001年，第118頁。

3.3 動物法檢測結果

② 1 mL①+9 mL病毒培養液→10 mL。

第一次測試結果見表1。

在服務體系方面，恒輪德國集團目前在全球擁有約500名員工、30個服務基地及超過40?000個專門用于售后服務的備品備件。“我們希望通過我們的服務能力、優秀的服務可靠性和持久性，與我們的用戶達成一種長期的，甚至是永久的合作伙伴關系。這不僅僅是我們的目標，同時也是我們通過努力已經取得的成果。”恒輪機床（常州）有限公司服務副經理呂虎林先生說道。

表1 第一次測試結果

第二次測試結果見表2。

表2 第二次測試結果

第三次測試結果見表3。

1.2 材料及設備 3shape Trios口內掃描儀(3shape，丹麥)，3shape 模型掃描儀 (3shape， 丹麥)，IPS E-max Press鑄瓷系統(Ivoclar，列支敦士登)，加聚型硅橡膠印模材(DMG，德國)，超硬石膏(賀利氏，美國)。

綜上所述，在小學低年級數學教學中應用游戲教學模式，能夠改變傳統教學模式的禁錮。教師應結合小學生的年齡特點和心理特點選擇適合的游戲，充分發揮其教學優點，針對教學中存在的問題，采取措施，深入探索和思考。數學教學方式和游戲教學模式的有效結合，能夠培養學生合作學習能力，引導學生將所學知識應用到生活中，應用數學知識解決實際問題，提升小學數學質量，拓展學生思維，為學生未來發展奠定良好基礎。

表3 第三次測試結果

4 討論

由于我國商業化規模滅活疫苗生產車間多采用大容量生物反應器開展全病毒培養活動,病毒濃度較高,一旦發生泄漏將引發重大生物安全事故[4],因此應從生產車間風險評估、人員機構、設施設備、檢測驗證、體系建設及生物安保等角度進行全面考慮,合理有效地控制病毒泄漏,減少生物安全事故的發生。目前,常用的病毒滅活方法包括高溫高壓蒸汽穿透滅活、甲醛熏蒸、汽化過氧化氫(VHP)熏蒸、化學試劑等,不同方法適用于不同的病毒滅活。有效滅活涉及病毒的傳播控制、生物安全等方面,因此探討紫外線對狂犬病毒的滅活效果具有重要的意義。商業化規模狂犬疫苗生產車間常需要從外界傳遞物品進入生產活動區域,部分物品不能進行高溫高壓蒸汽滅菌,為防止狂犬病毒泄漏,將物品安全傳遞至有毒區成為了關鍵。部分生產車間會使用傳遞窗,狂犬病毒從有毒區一側進入傳遞窗,但再次打開無毒區一側的傳遞窗門時,紫外線未能對病毒進行有效消殺,易造成有毒一側攜帶狂犬病毒的空氣進入無毒一側,導致病毒泄漏,引發生物安全風險。本研究證明,紫外線對狂犬病毒有滅活作用,輻照強度≥70 μw/cm2的紫外線照射下作用15 min能徹底殺滅狂犬病毒,為使用紫外傳遞窗殺滅病毒及狂犬病疫苗生產車間的生物安全風險防控提供了科學依據。