非轉(zhuǎn)移性23 蛋白和錯配修復(fù)蛋白在散發(fā)性結(jié)直腸癌組織中的表達及與臨床特征的關(guān)系

車冠華，張騰宙

運城第一醫(yī)院病理科，山西 運城 0440000

結(jié)直腸癌是臨床常見的消化道惡性腫瘤。國家癌癥中心統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，2015 年中國結(jié)直腸癌的發(fā)病率居全部惡性腫瘤第3 位，病死率居全部惡性腫瘤第5 位[1]。結(jié)直腸癌的發(fā)生與多種因素有關(guān)，涉及多種原癌基因和抑癌基因的突變。非轉(zhuǎn)移性23 蛋白（non-metastatic 23，NM23）基因被認(rèn)為具有抑癌和促癌雙向功能，編碼的蛋白在細胞侵襲、轉(zhuǎn)移以及細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用，與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[2]。錯配修復(fù)蛋白（mismatch repair protein，MMRP）缺失造成的微衛(wèi)星不穩(wěn)定狀態(tài)是結(jié)直腸癌發(fā)生的重要分子途徑，包括10%～15%的散發(fā)性結(jié)直腸癌（sporadic colorectal cancer，SCC）及90%以上的林奇綜合征[3]，且與患者的預(yù)后密切相關(guān)[4]。采用免疫組化法檢測MMRP 預(yù)測微衛(wèi)星不穩(wěn)定狀態(tài)的靈敏度和特異度均高于85%，與聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）法檢測結(jié)果具有較高的一致性，二者符合率＞90%[5-6]。目前大多數(shù)研究僅對結(jié)直腸癌進行NM23 或MMRP 其中一項表達水平的檢測，同時檢測二者的報道極少，因此，本研究探討NM23 和MMRP 在SCC 組織中的表達及與臨床特征的關(guān)系，并分析二者的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015 年7 月至2020 年12 月運城第一醫(yī)院收治的SCC 患者的病歷資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①根據(jù)臨床癥狀以及相關(guān)檢查確診為SCC；②臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①符合阿姆斯特丹Ⅱ（AmsterdamⅡ）診斷標(biāo)準(zhǔn)的林奇綜合征；②在手術(shù)治療前進行過放化療。根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)，共納入87 例SCC 患者，男50 例，女37 例；年齡40～86 歲，平均（65.34±11.23）歲，≥60 歲60 例，＜60 歲27 例；腫瘤最大徑：≥5 cm 52 例，＜5 cm 35 例；病理分級：低度惡性50 例，高度惡性37 例；浸潤深度：未侵及漿膜10 例，侵及漿膜77 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移49 例；臨床分期：0～Ⅰ期9 例，Ⅱ期39例，Ⅲ～Ⅳ期39 例。取87 例SCC 患者手術(shù)切除的SCC 組織及癌旁正常黏膜上皮組織。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)通過，所有患者均知情同意。

1.2 檢測方法

標(biāo)本采用中性甲醛固定，常規(guī)脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋、切片、常規(guī)蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色，鏡下確認(rèn)病理分型。免疫組化染色采用Lumatus 全自動免疫組化儀及SABC 法完成，免疫組化試劑盒和二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色試劑盒均購自福建邁新生物技術(shù)有限公司。

1.3 結(jié)果判定

1.3.1 病理分級根據(jù)腫瘤形成的腺樣結(jié)構(gòu)百分比進行分級。高分化（1 級）：腺樣結(jié)構(gòu)＞腫瘤的95%；中分化（2 級）：腺樣結(jié)構(gòu)占腫瘤的51%～95%；低分化（3 級）：腺樣結(jié)構(gòu)占腫瘤的5%～50%；未分化（4 級）：腺樣結(jié)構(gòu)＜腫瘤的5%。管狀腺癌分為低度惡性（相當(dāng)于高分化或中分化）和高度惡性（相當(dāng)于低分化或未分化）。需要注意的是，這種分級主要用于管狀腺癌，其他類型不進行分級。

1.3.2 NM23 及MMRP 表達NM23 表達定位于細胞質(zhì)，MMRP 表達定位于細胞核。二者均采用半定量積分法，結(jié)果判定由兩位經(jīng)驗豐富的具有高級職稱的醫(yī)師采用雙盲法進行，每張切片先在低倍鏡下尋找組織結(jié)構(gòu)清晰、細胞染色均勻的區(qū)域，轉(zhuǎn)高倍鏡（400 倍）后，于該區(qū)域隨機選取5 個不重疊的視野。按染色強度評分：無著色為0 分，淺黃色為1 分，棕黃色為2 分，深褐色為3 分；按陽性細胞百分比評分：≤10%為0 分，11%～50%為1 分，51%～80%為2 分，＞80%為3 分。將兩項評分的結(jié)果相乘，最終評分＜3 分為低表達，設(shè)為陰性；≥3 分為高表達，設(shè)為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示；計數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗、Fisher 確切概率法或McNemar 檢驗；相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析法；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NM23 和MMRP 表達情況的比較

SCC組織中NM23陽性表達率為72.4%（63/87），高于癌旁正常黏膜上皮組織的71.3%（62/87），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；SCC 組織中MMRP 陽性表達率為73.6%（64/87），低于癌旁正常黏膜上皮組織的100%（87/87），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 不同臨床特征SCC 患者SCC 組織中NM23 表達情況的比較

不同性別、年齡、腫瘤最大徑、病理分級、浸潤深度SCC 患者的SCC 組織中NM23 陽性表達率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；不同臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況SCC 患者的SCC 組織中NM23陽性表達率比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

2.3 不同臨床特征SCC 患者SCC 組織中MMRP表達情況的比較

不同性別、年齡、臨床分期、病理分級、浸潤深度SCC 患者的SCC 組織中MMRP 陽性表達率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；不同腫瘤最大徑及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況SCC 患者的SCC 組織中MMRP 陽性表達率比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征SCC 患者SCC 組織中MMRP 表達情況的比較

2.4 NM23 與MMRP 表達的相關(guān)性分析

經(jīng)Spearman 相關(guān)性分析得出，SCC 組織中NM23和MMRP表達無相關(guān)性（rs=-0.020，P=0.853）。

3 討論

結(jié)直腸癌分為散發(fā)性（約占80%）和遺傳性（約占20%）兩種，后者包括林奇綜合征、家族性腺瘤性息肉病、MUTYH-相關(guān)息肉病及其他罕見的綜合征（包括遺傳性色素沉著消化道息肉病綜合征、幼年性息肉綜合征、鋸齒狀息肉病綜合征等）[3]。與遺傳性結(jié)直腸癌相比，SCC 缺乏相應(yīng)的遺傳學(xué)基礎(chǔ)，目前研究認(rèn)為相關(guān)的分子途徑包括：染色體不穩(wěn)定性（chromosomal instability，CIN）、CpG 島甲基化表型（CpG island methylation phenotype，CIMP）及微衛(wèi)星不穩(wěn)定等[7-8]。傳統(tǒng)觀點認(rèn)為結(jié)直腸癌大多起源于腺瘤[9]，即“正常黏膜上皮細胞-腺瘤-腺癌”一系列序貫事件，其發(fā)生及發(fā)展涉及原癌基因和抑癌基因的突變，其中Kirsten鼠肉瘤病毒癌基因同源物（Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog，KRAS）及鼠類肉瘤病毒癌基因同源物B（v-raf murine sarcoma viral oncogene homolog B，BRAF）基因突變與結(jié)直腸癌患者的臨床特征和預(yù)后密切相關(guān)[10-12]。

NM23基因由Steeg[13]分離克隆成功。NM23H1是第一個被發(fā)現(xiàn)的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，具有抑制轉(zhuǎn)移和促進轉(zhuǎn)移的雙重作用。NM23 蛋白家族成員包括10 個不同的蛋白（NM23H1～H10），根據(jù)序列同源性分為兩組：NM23H1～H4 具有高度相似性及二磷酸腺苷酸激酶活性，NM23H5～H10 差異明顯，相似度低而且很少具有二磷酸腺苷酸激酶活性。NM23H1 與NM23H2 的序列同源性最高，并且基因相鄰，研究最為廣泛。越來越多證據(jù)表明，NM23H1 作為抑制因子和啟動子在腫瘤轉(zhuǎn)移中具有二分類作用。這與其生化特性，如核苷二磷酸激酶活性、組氨酸蛋白激酶活性和3'-5'核酸外切酶活性等的差異有關(guān)[14]。Dong 等[15]通過基因表達綜合數(shù)據(jù)庫和癌癥基因組圖譜發(fā)現(xiàn)NM23H1基因是一種特殊的癌基因，在肝細胞癌中高表達，在急性髓系白血病、神經(jīng)母細胞瘤和前列腺癌中發(fā)揮促轉(zhuǎn)移作用。在人非小細胞肺癌中NM23H2 通過促進原癌基因c-Myc表達促進腫瘤生長[16]。NM23H4可能作為一種促癌因子通過調(diào)控細胞周期來促進非小細胞肺癌的進展[17]。DNA 錯配修復(fù)是DNA 損傷修復(fù)的一個重要途徑，對維持基因組穩(wěn)定性和DNA 復(fù)制保真度至關(guān)重要，原核生物和真核生物中都有非常保守的錯配修復(fù)系統(tǒng)[18]，微衛(wèi)星不穩(wěn)定性及MMRP 表達與結(jié)直腸癌患者的化療效果及預(yù)后密切相關(guān)[19-20]。徐晉珩等[21]研究結(jié)果顯示，微衛(wèi)星不穩(wěn)定性及NM23 與SCC 患者的臨床特征關(guān)系密切，并且二者呈正相關(guān)。本研究通過免疫組化法檢測SCC 組織中NM23 和MMRP 的表達，進一步分析兩種蛋白的表達與SCC 患者臨床特征的關(guān)系。結(jié)果表明，SCC 組織中NM23 陽性表達率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)（P＜0.05），MMRP 陽性表達率與腫瘤最大徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），但二者并不存在相關(guān)性（P＞0.05）。提示通過檢測NM23 和MMRP 表達水平，可評估SCC 患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和臨床分期，作為評估患者預(yù)后的指標(biāo)。

綜上所述，NM23 及MMRP 表達與SCC 患者的臨床特征關(guān)系密切，對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期的預(yù)測和評估具有參考價值，但本研究樣本量較小，仍需進一步的大樣本研究加以驗證。