高效液相色譜法測定3%辛硫磷顆粒劑

洪陳艷，王學林，顏高俊，安燕萍

(昆明農(nóng)藥有限公司，云南 昆明 650401)

辛硫磷(phoxim)屬于高效、低毒、廣譜硫代磷酸酯類有機磷殺蟲劑[1]。辛硫磷具有觸殺和胃毒作用，作用于通過抑制昆蟲體內(nèi)神經(jīng)組織上的乙酰膽堿酯酶或膽堿酯酶的活性從而使害蟲中毒死亡，無內(nèi)吸性，持效期短，可用于防治危害糧食、棉花、蔬菜、果樹、茶葉、桑等的害蟲，以及土壤害蟲(在土壤中的持效期可達一個月以上)、倉儲害蟲、衛(wèi)生害蟲和家畜體內(nèi)外的寄生蟲[2]。3%辛硫磷顆粒劑主要用于防治農(nóng)作物上的蠐螬、地老虎等地下害蟲。

3%辛硫磷顆粒劑目前尚無國家標準。本文使用以C18為填料的不銹鋼柱和紫外檢測器，對試樣中的辛硫磷進行反相高效液相色譜分離和測定，外標法定量。

1 實驗部分

1.1 試劑

辛硫磷標樣(w=99.04%)；甲醇：色譜級(用于流動相)；甲醇：分析純；水：蒸餾水(新蒸二次蒸餾水)。

1.2 操作儀器

液相色譜儀：高效液相色譜儀(具有可調(diào)節(jié)波長紫外檢測器和定量進樣閥)；色譜數(shù)據(jù)工作站：N2000色譜工作站；色譜柱：150 mm×φ4.6 mm 不銹鋼柱，內(nèi)裝DOS(C18)5 μm 填充物，微量進樣注射器：50 μL；定量進樣器 5 μL；超聲波清洗器。

1.3 操作條件

柱溫：室溫，溫度變化不高于 2 ℃；流動相：V(甲醇)∶V(水)=80∶20，經(jīng)濾膜過濾，并進行脫氣；檢測波長：254 nm；流速：1.0 mL/min；進樣量：5 μL；保留時間：約 6 min。

1.4 操作步驟

1.4.1 標樣溶液的制備

稱取 0.1 g 辛硫磷標樣(精確至 0.0002 g)，置于 50 mL 的容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，超聲波振蕩 10 min，使標樣中的辛硫磷完全溶解，冷卻至室溫，搖勻。用移液管移取 5 mL 上述溶液于另一 50 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。

1.4.2 試樣溶液的制備

稱取 3.3 g 辛硫磷試樣(精確至 0.0002 g)，置于 50 mL 的容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，超聲波振蕩 10 min，使試樣中的辛硫磷完全溶解，冷卻至室溫，搖勻。用移液管移取 5 mL 上述溶液于另一 50 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。

1.4.3 測定

在上述色譜操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，直至相鄰兩針標樣溶液中的辛硫磷響應(yīng)值變化小于1.5%后，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進樣進行分離測定[3]。3%辛硫磷顆粒劑高效液相色譜圖見圖1，辛硫磷的保留時間為 6.078 min。

圖1 3%辛硫磷顆粒劑高效液相色譜圖

1.4.4 計算

將測得的兩針試樣溶液以及試樣前后兩針標樣溶液中辛硫磷峰面積分別進行平均。試樣中辛硫磷的質(zhì)量分數(shù)w(%)按公式計算：

式中：A2為試樣溶液中辛硫磷峰面積的平均值；m1為標樣辛硫磷的質(zhì)量，g；w標為標準品辛硫磷的質(zhì)量分數(shù)，%；A1為標樣溶液中辛硫磷峰面積的平均值；m2為試樣的質(zhì)量，g；w1為試樣辛硫磷的質(zhì)量分數(shù)，%。

1.4.5 允許差

辛硫磷質(zhì)量分數(shù)兩次平行測定結(jié)果之差應(yīng)不大于0.2%，取其算術(shù)平均值作為測定結(jié)果。

2 結(jié)果與討論

2.1 液相色譜操作條件的選擇

為了保證3%辛硫磷顆粒劑樣品中辛硫磷的峰型能夠較好地分離，分別取不同配比的甲醇和水為流動相進行分析檢測。通過比較和對比分析辛硫磷以及雜質(zhì)峰的峰型、出峰時間、分離完全度等因素，確定使用甲醇-水體積比80∶20為流動相時，樣品色譜圖基線平穩(wěn)，峰型好，分離效果較好，出峰時間適宜。因此確定選用V(甲醇)∶V(水)=80∶20作為流動相。

2.2 波長的選擇

使用紫外可變波長檢測器，在不同波長下對辛硫磷進行掃描，當掃描波長為 254 nm 時，辛硫磷的響應(yīng)值最大，并且能與雜質(zhì)峰分離徹底，因此選擇 254 nm 作為檢測波長。

2.3 溶劑的選擇

根據(jù)辛硫磷的性質(zhì)，當選用甲醇為試樣溶劑時，能較好地溶解試樣，且峰型分離較好，滿足試劑的選擇條件。

2.4 分析方法線性關(guān)系測定

配制一系列質(zhì)量濃度梯度的辛硫磷標樣溶液，按本文1.3、1.4中的方法進行分析檢測。每個質(zhì)量濃度分析兩次，求其峰面積的平均值，得出了一系列色譜峰面積(表1)。以辛硫磷的質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制線性相關(guān)曲線，得出辛硫磷的線性方程y=1.0×107x-14709，線性相關(guān)系數(shù)為R2=0.9998，結(jié)果表明，該方法對辛硫磷的分析具有良好的線性相關(guān)性，完全滿足定量分析的要求。

表1 不同質(zhì)量濃度辛硫磷標樣與對應(yīng)的峰面積

2.5 分析方法精密度測定

分別稱取6個平行試樣，按照上述色譜條件和測定步驟測定，辛硫磷的標準偏差為0.06%，變異系數(shù)為1.98%，具有良好的精密度(表2)。

表2 分析方法的精密度測定結(jié)果

2.6 分析方法準確度測定

稱取辛硫磷顆粒劑試樣配制成試樣溶液，分別稱取相同體積的上述溶液制備7份相同的樣品，其中6份加入一定量的辛硫磷標樣。如此配制成6個混合樣品溶液和1個空白溶液，按本標準操作條件進行分析，分別測定每個樣品的辛硫磷總質(zhì)量，計算回收率，測定結(jié)果見表3。表3表明，該測定方法可靠性較高。

表3 分析方法的準確度測定結(jié)果

3 結(jié)論

本文建立的高效液相色譜法測定3%辛硫磷顆粒劑中有效成分辛硫磷質(zhì)量分數(shù)的檢測方法，具有較寬的線性范圍和較好的準確度、精密度，方法方便、快捷，能滿足定量分析要求，可用于該劑型質(zhì)量分數(shù)檢測和質(zhì)量控制。