不同產地、部位、采收期及加工方式槐角中槐角苷的含量測定

李 歡 馬夢雪 劉華石 寧 夏

黑龍江省中醫藥科學院，黑龍江 哈爾濱 150036

槐角是豆科植物槐SophorajaponicaL.的干燥成熟果實，藥用歷史可追溯到兩千多年前，始載于《神農本草經》[1]。研究[2]表明，槐角中所含的化學成分包括槐角苷、染料木素、染料木苷、槐屬雙苷、蘆丁、槲皮素、山奈酚等，且前四個成分為槐角中的主要化學成分，約占槐角異黃酮類成分的86%以上，其中槐角苷含量最高，2020版《中國藥典》也以槐角苷作為槐角的指標性成分。近年來，大量研究[3]表明槐角苷具有抗氧化、抗炎、抗癌、抑菌及抗骨質疏松等作用，在動物體內，槐角苷主要通過轉化為染料木素來發揮作用。染料木素作為一種植物雌激素，對絕經期婦女雌激素減少導致的骨質疏松癥、心腦血管疾病、腫瘤等疾病都具有一定的預防和治療作用[4]。杜寧等[5]對槐角苷的抗骨質疏松作用進行了研究，結果表明槐角苷在治療大鼠骨質疏松癥的劑量下僅對生殖系統具有微弱的雌激素樣作用，具有開發為天然選擇性雌激素受體調節劑的可能。因此，對槐角苷進行定量研究可為槐角創新藥物的研發奠定基礎。

由于槐角來源豐富，價格低廉，產區分布廣泛，但缺乏化學物質基礎的系統性研究，市場上的槐角藥材質量參差不齊，資源浪費嚴重，開發利用受限。文獻研究[6]表明槐角中槐角苷含量易受產地、采收期、加工方式和藥用部位的影響。因此，本研究以槐角苷含量為檢測指標，對不同產地、采收期、加工方式及不同部位的槐角進行高效液相含量測定，為槐角資源的開發利用提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LC-20A高效液相色譜儀(日本島津)；BSA224S-CW電子天平[賽多利斯科學儀器(北京)有限公司]；BP-10電子天平(德國賽多利斯集團)；KQ-800KDB高功率數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；DHG-9140A電熱鼓風干燥箱(上海一恒科學儀器有限公司)；ATC2-5-U超純水系統(美國艾科浦國際有限公司)；AF-04A中藥粉碎機(溫嶺市奧力中藥機械有限公司)。

1.2 材料 槐角苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號111695-201703，質量分數> 98%)；甲醇(色譜級，默克股份兩合公司)和乙腈(色譜級，默克股份兩合公司)；色譜用磷酸(天津市科密歐化學試劑有限公司)；屈臣氏水飲用水(廣州屈臣氏食品飲料有限公司)；乙醇，AR級。槐角藥材分別于2021年9月下旬采摘于河北衡水、山西運城、陜西渭南、山東聊城，山西運城槐角藥材從2021年9月上旬至2021年12月上旬每半月采集一次。經黑龍江省中醫藥科學院霍金海研究員鑒定為豆科植物槐SophorajaponicaL.的干燥成熟果實。具體產地見表1。

表1 槐角藥材產地統計表

2 方法與結果

2.1 樣品制備 對同一批槐角藥材分別進行以下處理。

2.1.1 干燥 將采摘的槐角除去雜質及果柄，分別進行以下處理：曬干、陰干、50 ℃烘干、70 ℃烘干、90 ℃烘干。所有槐角藥材粉碎后過三號篩，備用。

2.1.2 炮制 生槐角：將采摘的槐角除去雜質及果柄，放于烘箱中50 ℃烘干。蜜炙：取凈槐角，用文火炒至表面微黃或鼓起，再將適量煉蜜加適量開水稀釋，燜潤。用文火炒至外皮光亮不黏手，放于烘箱中50 ℃烘干。炒黃：取凈槐角約100 g，文火炒至表面發黃膨脹。炒炭：取凈槐角約100 g，置于熱鍋中，用武火炒至表面焦黑，內部焦褐，噴清水少許，熄滅火星，取出晾干。蒸制：取凈槐角，略潤，置于適宜的蒸制容器內，用蒸汽加熱至黑褐色，放于烘箱中50 ℃烘干。所有槐角藥材炮制品粉碎后過三號篩，備用。

2.1.3 部位 將采摘的槐角藥材除去雜質及果柄，剝離果皮與種子，放于烘箱中50 ℃烘干。將槐角全藥材、果皮和種子粉碎后過三號篩，備用。經測定，所有樣品的水分均小于13%，符合中國藥典(2020版)的相關規定。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；色譜柱型號Kromasil 100-5-C18，4.6 mm×250 mm；以甲醇-乙腈-0.07%磷酸水溶液(12∶20∶68)為流動相進行洗脫；檢測波長為260 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫為室溫；進樣量10 μL。理論板數按槐角苷峰計算應不低于3000。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取槐角苷對照品12.42 mg于100 mL容量瓶中定容，搖勻，作為對照品儲備液。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密稱取2 g槐角藥材，置于100 mL錐形瓶中，精密加入70%乙醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率100 kHz)45 min，放置至室溫，再稱定重量，用70%乙醇補足失去的重量，搖勻，濾過，取續濾液2.5 mL，于100mL容量瓶中定容，即得[7]。

2.2.4 標準曲線的繪制 精密量取對照品儲備液3 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，制成濃度為37.26 μg/mL的溶液，分別進樣8 μL、10 μL、12 μL、14 μL、16 μL，按“2.2.1”項下色譜條件進行測定，以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。得回歸方程：Y=219624X-7519.4(r2=1)。表明槐角苷濃度在0.03～0.06 mg/mL的范圍內與峰面積具有良好的線性關系。

2.2.5 精密度試驗 精密稱取槐角藥材2 g，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，連續進樣6次，測得6次槐角苷峰面積的RSD為0.11%。

2.2.6 穩定性試驗 精密稱取槐角藥材2 g，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h分別進樣測定，測得槐角苷峰面積的RSD為0.11%，表明槐角供試品溶液在8 h內穩定性良好。

2.2.7 重復性試驗 精密稱取槐角藥材2 g，共5份，按“2.2.3”項下方法項制備供試品溶液，分別進樣測定，測得槐角苷峰面積RSD為0.97%，表明該樣品重復性良好。

2.2.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的槐角藥材粉末5份，精密加入一定量的槐角苷對照品溶液，分別按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液。結果見表2。

表2 槐角苷加樣回收率統計表 (n=5)

2.2.9 樣品測定 分別按2.3.1和2.3.2項下方法制備對照品及供試品溶液，并采用“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，結果如下。槐角苷對照品色譜圖如圖1所示，槐角藥材樣品色譜圖如圖2所示。峰1為槐角苷色譜峰。

圖1 槐角苷對照品色譜圖

圖2 槐角藥材樣品色譜圖

2.2.9.1 產地 從結果可以看出，4個產地中河北衡水的槐角中槐角苷含量最高，陜西渭南和山東聊城次之，山西運城的槐角中槐角苷含量最低。這可能與地域的經緯度，日照時間，降雨量及海拔等因素有關。見表3。

表3 不同產地槐角中槐角苷含量統計表

2.2.9.2 采收期 由表4可以看出，槐角中的槐角苷含量隨著時間的推移呈逐漸降低趨勢。

表4 不同采收期槐角中槐角苷含量統計表

2.2.9.3 加工方式 由表5可知，在不同的加工方式中，曬干的槐角中槐角苷含量最高，炒炭的槐角中槐角苷含量最低。這可能是因為在槐角加工過程中，高溫破壞了槐角苷的結構，導致槐角苷含量降低。

表5 不同加工方式槐角中槐角苷含量統計表

2.2.9.4 不同部位 表6表明槐角中槐角苷大多在果皮中，種子中的槐角苷含量極低。

表6 不同部位槐角苷含量統計表

3 討論

由于地域及生長環境的不同，不同產地的槐角生長期有一些差別。河北槐角的生長期比山西及陜西推遲十天到半個月左右，山東槐角的生長期比河北推遲一周左右。山西及陜西的槐角8月初開始生長，而河北槐角到8月中旬才開始生長，山東比河北更晚，因此推測槐角的生長期可能與光照時間、降雨量、海拔、經緯度等因素有關。9月初山西及陜西的槐角果實較飽滿，且種子還未成形，此時槐角苷含量較高，綜合產量較高。因此，就槐角苷而言，山西及陜西槐角的最佳采收期為9月初期，河北槐角的最佳采收期為9月中旬，山東槐角最佳采收期為9月下旬。本研究依據《中國藥典》(2020年版)、《河南省中藥飲片炮制規范》(2022年版)及《貴州省中藥飲片炮制規范》(2005年版)對槐角藥材進行炮制，并對其進行初加工方式的考察。結果表明，曬干的槐角中槐角苷含量最高。同時，曬干節省人力物力，成本較低，因此確定槐角的最佳加工方式為曬干。本研究還對槐角的不同部位進行了考察，結果表明槐角中槐角苷主要存在于果皮中，槐角種子中含量很少。李彩霞等[8]對國槐種子進行了一系列研究，結果表明，國槐種子中的蛋白質含量較高，具有良好的抗氧化作用。因此，可以將槐角種子剝離出來，用于蛋白質的開發或抗氧化等其它方面的研究，以充分利用槐角資源。

槐角中的化學成分復雜多樣，單靠槐角苷的含量測定難以全面地評價藥材整體的質量。今后可對槐角進行指紋圖譜相關方面的研究，對中藥材的質量進行整體描述和評價。對于提高中藥材質量，促進中藥現代化具有重要意義。