紫蘇籽粕迷迭香酸的亞臨界水提取工藝優化及其抗氧化活性

閆林林，王艷輝，張佳嬋，鄭光耀,

（1.中國林業科學研究院林產化學工業研究所，生物質化學利用國家工程實驗室，國家林業和草原局林產化學工程重點實驗室，江蘇省生物質能源與材料重點實驗室，江蘇省林業資源高效加工利用協同創新中心，江蘇南京 210042；2.北京工商大學，北京市植物資源研究開發重點實驗室，北京 100048）

迷迭香酸（Rosmarinic acid，RA）是一種優質的天然抗氧化劑，具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒、抗過敏等多種活性功效，在制藥、食品和化妝品等領域具有重要的應用價值[1-5]。迷迭香酸廣泛存在于唇形科、紫草科和傘形科的多種植物中，尤以唇形科和紫草科含量較高[6-7]。紫蘇（Perilla frutescensL.）為唇形科一年生芳香草本植物，具有較高的營養價值和藥用價值，長期以來一直用于食品、香料和傳統中草藥領域[8-11]。研究發現，紫蘇籽榨油后的餅粕（即紫蘇籽粕）中含有大量的迷迭香酸[12-15]，是一種價格低廉、資源豐富的迷迭香酸提取原料。

目前，迷迭香酸的常用提取方法有浸漬法[12,15-16]、加熱回流提取法[4,14]、酸水解法[17-19]、索氏提取法[20]、超聲輔助提取法[13,21]、酶輔助提取法[22]、微波輔助提取法[23]等，這些方法大多存在耗時長、成本高、效率低、提取溶劑有毒性、易造成環境污染等問題，不符合綠色化學的理念[24-25]。近期，也有研究者使用離子液體作為溶劑提取植物材料中的迷迭香酸[26]，但離子液體的成本較高且并非完全無毒，存在生物不可降解性、溶質分離困難、溶劑殘留等問題[27-28]。

相較于上述提取方法，亞臨界水提取（Subcritical water extraction，SWE）是以安全、價廉、環境友好的水為提取介質，近年來受到越來越多的關注[24-25,29]。亞臨界水在一定的高溫高壓條件下依然能夠保持液體狀態，但理化性質發生了改變，如介電常數降低、極性降低、擴散系數增加、溶解力增加等，具有與有機溶劑相似的性質，使得提取效率顯著提高[29-31]。目前，亞臨界水提取法已被應用于多酚、黃酮、多糖、生物堿、萜類等多種活性成分的提取[29,32-36]。例如，Shi 等[37]利用亞臨界水提取紅心火龍果種子中的酚類物質；Wang 等[38]利用亞臨界水提取覆盆子中的花青素；Dazh 等[39]利用亞臨界水提取苦蕎多酚，研究結果均顯示亞臨界水提取的目標物質得率和生物活性顯著高于傳統溶劑提取法。然而，目前尚未有利用亞臨界水提取紫蘇籽粕中迷迭香酸的相關報道。

因此，本研究以紫蘇籽粕為原料，采用亞臨界水提取法提取其中的迷迭香酸，考察提取溫度、提取時間、料液比等參數對提取得率的影響，用響應面法優化迷迭香酸的亞臨界水提取工藝，并評價其抗氧化活性，以期為紫蘇籽粕中迷迭香酸的提取提供一種綠色、高效、經濟的技術途徑。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

紫蘇籽粕 甘肅靈臺縣隴香食品有限公司；沒食子酸（純度≥98%）、蘆丁（純度≥98%）、迷迭香酸（純度≥98%） 南京春秋生物工程有限公司；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、2,2'-聯氮-二（3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸）二銨鹽（ABTS）、抗壞血酸（VC）Sigma 公司；甲醇、乙腈、甲酸 色譜級，阿拉丁試劑（上海）有限公司；碳酸鈉、六水氯化鋁、鐵氰化鉀、氯化鐵、三水乙酸鈉和甲醇等其他試劑 國藥化學試劑有限公司。

LC-20AT 液相色譜工作站配有自動進樣器（SIL-20A）、PDA 檢測器（SPD-20A）、柱溫箱（CTO-10AS）、UV-1700 型紫外-可見分光光度計 日本島津公司；TGL-16C 型高速臺式離心機 上海安亭科學儀器廠；亞臨界水萃取裝置（HAWG 型反應釜）江蘇華安科研儀器有限公司；KH5200DB 型數控超聲波清洗器 昆山禾創超聲儀器有限公司；Sigma HD 型熱場發射掃描電子顯微鏡 德國蔡司公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 紫蘇籽粕預處理 干燥的紫蘇籽經冷榨法萃取紫蘇油脂后立即收集其餅粕（即紫蘇籽粕），將紫蘇籽粕于50 ℃烘箱干燥，粉碎，過60 目篩，密封保存，使用前干燥至恒重。

1.2.2 亞臨界水提取 精確稱取紫蘇籽粕5 g，置于亞臨界水萃取罐中，按照一定的料液比加入去離子水，設定適當的提取壓力和提取溫度，提取一定時間后，得到紫蘇籽粕提取液，迅速將其抽濾，重復提取兩次，合并濾液上清，定容，備用。

1.2.3 單因素實驗 采用1.2.2 中的提取方法考察各單因素（提取溫度、提取時間、料液比和提取壓力）對紫蘇籽粕中迷迭香酸提取得率的影響。固定提取壓力為3.0 MPa、提取時間為20 min、料液比為1:20 g/mL 的條件下，設置提取溫度為100、120、140、160、180、200、220 ℃；固定提取壓力為3.0 MPa、提取溫度為160 ℃、料液比為1:20 g/mL 的條件下，設置提取時間為10、20、30、40、50、60 min；固定提取壓力為3.0 MPa、提取溫度為160 ℃、提取時間為30 min 的條件下，設置料液比為1:10、1:20、1:30、1:40、1:50、1:60 g/mL；固定提取溫度為160 ℃、提取時間為30 min、料液比為1:40 g/mL 的條件下，設置提取壓力為1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 MPa。

1.2.4 響應面試驗優化 在單因素實驗的基礎上，選擇對迷迭香酸提取得率影響較大的三個因素提取溫度（X1）、提取時間（X2）和料液比（X3）為自變量，以迷迭香酸提取得率為響應值（Y），按照Box-Benhnken實驗設計原理，設計3 因素3 水平響應面分析試驗（具體見表1），根據回歸模型分析各因素對響應值的影響，優化亞臨界水提取工藝參數。

表1 響應面試驗因素與水平Table 1 Factors and levels in response surface experiment

1.2.5 迷迭香酸含量的測定及其提取得率計算

1.2.5.1 高效液相色譜分析條件 采用高效液相色譜（HPLC）法測定紫蘇籽粕提取物中迷迭香酸的含量，色譜條件和方法參考文獻并稍作改進[14]。色譜柱：Diamonsil RP-C18色譜柱（250 mm，4.6 mm，5 μm）；流動相為0.2%甲酸水（A）:甲醇（B）；梯度洗脫程序為：0～40 min，流動相B 為5.0%～65%；40～45 min，流動相B 為65%～5%。40～45 min，流動相B 為5%；流速為1.0 mL/min；進樣體積20 μL；檢測波長為330 nm；柱溫35 ℃。

1.2.5.2 迷迭香酸標準曲線 精密稱取適量迷迭香酸標準品，用50%甲醇水溶液配制成濃度為0.1 mg/mL的母液，再用50%甲醇水溶液稀釋成一系列濃度的標準品工作液，分別進HPLC 測定其峰面積。以迷迭香酸的濃度為橫坐標（x），以峰面積為縱坐標（y）作圖，得到標準曲線y=68733.85x-70126.21，R2=0.9994，迷迭香酸在濃度0.01～0.10 mg/mL 范圍內線性良好。

1.2.5.3 迷迭香酸提取得率的計算 將紫蘇籽粕提取液用50%的甲醇水溶液稀釋，過0.22 μm 微孔濾膜后，進HPLC 分析。按照公式（1）計算迷迭香酸的提取得率[14]。

式中：Y 表示迷迭香酸的提取得率，mg/g dw（dry weight）；C 表示通過標準曲線計算得出的迷迭香酸濃度，mg/mL；n 表示樣品提取液的稀釋倍數；V 表示樣品提取液的體積，mL；m 表示紫蘇籽粕原料的用量，g。

1.2.6 不同提取方法的比較 比較亞臨界水提取法與常規溶劑提取法（如甲醇回流、水回流、甲醇超聲、水超聲）對迷迭香酸提取得率及其抗氧化活性的影響。其中，亞臨界水提取采用響應面實驗優化后的工藝參數，常規溶劑提取則參考相關文獻，具體如下。

1.2.6.1 加熱回流提取 參考Yan 等[19]的方法并稍作修改。精確稱取紫蘇籽粕5 g 置于圓底燒瓶中，按料液比1:40 g/mL 分別加入80%甲醇水溶液和純水，設置提取溫度為80 ℃，加熱回流提取1 h 后，得到紫蘇籽粕提取液，迅速將其抽濾，在上述相同條件下重復提取兩次，合并濾液上清，定容，測定提取液中迷迭香酸的含量并計算得率。

1.2.6.2 超聲輔助提取 參考Tang 等[13]的方法并稍作修改。精確稱取紫蘇籽粕5 g 置于圓底燒瓶中，按料液比1:40 g/mL 分別加入80%甲醇水溶液和純水，設置超聲提取溫度60 ℃，超聲功率為90 W，超聲頻率50 Hz，提取1 h 后，得到紫蘇籽粕提取液，迅速將其抽濾，在上述相同條件下重復提取兩次，合并濾液上清，定容，測定提取液中迷迭香酸的含量并計算得率。

1.2.7 抗氧化活性的測定 本研究通過DPPH 和ABTS 自由基清除試驗比較不同提取方法下紫蘇籽粕提取液的抗氧化活性。

1.2.7.1 DPPH 自由基清除能力測定 參考文獻[14,40]方法并稍作修改。首先，用去離子水配制一系列濃度的VC標準品溶液（0.05、0.10、0.15、0.20 mg/mL），取0.1 mL 的VC標準品溶液，加入0.25 mL 新鮮配制的DPPH 甲醇溶液（濃度為1 mmol/L），再加入2 mL 甲醇，充分混合后于室溫下避光放置20 min，以甲醇為空白對照，于517 nm 下測定其吸光值，按照公式（2）計算VC標準品溶液的DPPH 自由基清除率（%）。以VC濃度為橫坐標（x），以DPPH 自由基清除率（%）為縱坐標（y），繪制標準曲線，得到其線性方程y=492.7x+6.4747，其R2=0.9994，在濃度0.05～0.20 mg/mL 范圍內線性良好。將紫蘇籽粕提取液樣品稀釋一定倍數，按照上述方法測定其DPPH 自由基清除率（%），代入線性方程，計算其DPPH 自由基清除能力的VC當量（mg VC/g dw），即每g 紫蘇籽粕干樣的自由基清除能力相當于多少mg 的VC[41]。

式中，A0表示空白對照在517 nm 處的吸光值；As表示VC標準品（或紫蘇籽粕提取液樣品）溶液在517 nm 處的吸光值。

1.2.7.2 ABTS 自由基清除能力測定 參考文獻[14,40]方法并稍作修改。首先，用去離子水配制一系列不同濃度的VC標準溶液（0.01、0.015、0.02、0.03、0.04、0.06、0.08 mg/mL）。取0.15 mL 的VC標準品溶液，加入2.85 mL 用甲醇新鮮配制的ABTS+·工作液，充分混合后于室溫下避光放置6～10 min，以甲醇為空白對照，在734 nm 下讀取樣品吸光值，按照公式（3）計算VC標準品（或待測樣品）溶液的ABTS 自由基清除率（%）。以VC濃度為橫坐標（x），以ABTS 自由基清除率（%）為縱坐標（y），繪制標準曲線，得到線性方程y=1036.8x-2.1096，其R2=0.999，在濃度0.05～0.20 mg/mL 范圍內線性良好。同上，將測得的紫蘇籽粕提取液樣品的ABTS 自由基清除率（%）代入線性方程，計算其ABTS 自由基清除能力的VC當量（mg VC/g dw）。

式中，A0表示空白對照在734 nm 處的吸光值；As表示VC標準品（或紫蘇籽粕提取液樣品）溶液在734 nm 處的吸光值。

1.2.8 紫蘇籽粕粉末的物理形態觀察 將紫蘇籽粕原料和經過不同提取方法處理后的殘渣于50 ℃烘干至恒重后，取適量在掃描電鏡（SEM）下觀察其在提取前后的微觀結構變化。

1.3 數據處理

通過SPSS 22.0 軟件進行實驗數據分析，每個實驗條件下均進行3 次平行操作，結果以平均值±標準差來表示。采用Design-Expert 8.0.6 軟件進行響應面分析，并進行模型優化。P＜0.05 表示差異顯著，P＜0.01 表示差異極顯著。

2 結果與分析

2.1 單因素實驗結果分析

2.1.1 提取溫度對紫蘇籽粕中迷迭香酸提取得率的影響 由圖1A 中可知，隨著提取溫度的升高（100～160 ℃），迷迭香酸的提取得率也逐漸升高，在160 ℃時達到最大值（3.23 mg/g dw）；但是，當提取溫度超過160 ℃之后，其提取得率有明顯下降的趨勢；當溫度達到220 ℃時，只能檢測到微量的迷迭香酸（0.13 mg/g dw）。相關研究表明，在亞臨界水提取過程中，提取溫度起著關鍵性的作用，溫度的升高可加速分子的擴散運動，提高亞臨界水對原料中目標化合物的溶解性，從而提高目標化合物的提取得率[42]，但是由于迷迭香酸是熱敏感性化合物，過高的提取溫度會造成迷迭香酸的降解，從而導致其提取得率降低[26]。因此，在后續的單因素實驗中選取160 ℃作為亞臨界水提取紫蘇籽粕的溫度。

2.1.2 提取時間對紫蘇籽粕中迷迭香酸提取得率的影響 由圖1B 中可知，當提取時間在10～30 min內，隨著提取時間的逐漸增加，迷迭香酸的提取得率不斷升高，在30 min 時達到最大值（3.71 mg/g dw）；超過30 min 后，迷迭香酸的提取得率有下降趨勢，提取時間為50 min 時，其提取得率為2.37 mg/g dw。在一定提取時間范圍內，隨著提取時間的延長，亞臨界水溶解的物質不斷增加，原料中的活性成分與提取溶劑逐漸達到了固液平衡；當達到平衡之后，繼續延長提取時間不能再增加目標化合物的得率，相反長時間的高溫條件會導致目標化合物的降解，從而使其得率降低[42-44]。因此，在后續的單因素實驗中，選取30 min 作為亞臨界水提取紫蘇籽粕的提取時間。

2.1.3 料液比對紫蘇籽粕迷迭香酸提取得率的影響

由圖1C 中可知，迷迭香酸的提取得率隨料液比的增加而增加；但是當料液比超過1:40 g/mL 后，迷迭香酸的提取得率逐漸趨于穩定。在一定范圍內，增加料液比有利于加快介質傳遞，提高目標化合物的得率[45]；但是當達到平衡之后，目標化合物的提取得率便趨于穩定、不再增加，過多的提取溶劑不僅會造成資源浪費，還會增加后期除去溶劑過程的工作量。因此，在后續的單因素實驗中，選取1:40 g/mL 作為亞臨界水提取紫蘇籽粕的料液比。

2.1.4 提取壓力對紫蘇籽粕迷迭香酸提取得率的影響 由圖1D 中可知，起初隨著壓力的增加，迷迭香酸的提取得率有升高趨勢，但達到3.0 MPa 后不再變化。相關文獻表明，亞臨界水提取過程中提取壓力的作用是使水能夠保持液體狀態，提取壓力對提取得率的影響較小，甚至可以忽略不計[29,46]。因此，本研究選取3.0 MPa 作為后續響應面優化實驗中亞臨界水提取紫蘇籽粕的提取壓力，且不再對提取壓力參數進行優化。

2.2 響應面優化設計及結果分析

2.2.1 響應面優化模型的建立 根據單因素實驗的結果，選取提取溫度（X1）、提取時間（X2）和料液比（X3）為自變量，以迷迭香酸提取得率為響應值（Y），根據Box-Benhnken 實驗設計原理，設計3 因素3 水平響應面試驗，具體實驗結果見表2。根據回歸模型分析各因素對響應值的影響，優化得到亞臨界水提取紫蘇籽粕迷迭香酸的工藝參數。

表2 響應面優化試驗結果Table 2 Results of response surface optimization experiment

運用Design-Expert 軟件對表2 中的數據進行擬合，得到迷迭香酸提取得率（Y）的回歸模型方程為：Y=-63.51175+0.68414X1+0.44690X2+0.29283X3+0.000025X1X2-0.0001625X1X3-0.0002X2X3-0.00208187X12-0.0075025X22-0.0031775X32。通過表3 中的方差分析及和相關系數判斷該模型的可靠性。由表3 可知，該模型達到了極顯著水平（P＜0.01）；失擬項（P=0.4901＞0.05）不顯著，說明該模型的預測值和實驗值較吻合，能夠較好地反映自變量與各因素之間的關系，實驗可靠；該模型的決定系數R2=0.9877、調整決定系數R2Adj= 0.9719，說明三個自變量與響應值之間的關系顯著，模型和試驗較為可靠，可解釋97.19%的響應值變化[45]。變異系數（CV）是用平均值的百分比來表示標準偏差的量度，用來描述數據的分散程度，值越小說明模型的重現性越好、可靠性越高[42-43]，該模型中變異系數CV 值為2.84%，說明模型可靠。模型中的一次項X1對提取得率（Y）的影響極顯著（P＜0.01），X2和X3（P＞0.05）對其影響不顯著；二次項X12、X22和X32均影響極顯著（P＜0.01）；交互項X1X2、X1X3和X2X3的影響不顯著（P＞0.05），說明各因素之間的交互作用小，這與閆拯等[43]報道的結果相似，可能是因為各因素對其響應值的影響并不是簡單的線性關系[47]。由各因素的F值和P值可知，三個因素對迷迭香酸提取得率（Y）的影響程度依次是X1＞X2＞X3，即提取溫度（℃）＞提取時間（min）＞料液比（g/mL）。

表3 響應面回歸模型方差分析Table 3 ANOVA of variance for response surface quadratic model

2.2.2 模型的響應曲面分析及驗證實驗 通過回歸模型擬合了迷迭香酸提取得率（Y）隨各提取參數變化的二維和三維曲面圖（見圖3），可反映出提取溫度（X1）、提取時間（X2）和料液比（X3）三個因素對迷迭香酸提取得率（Y）的影響。曲面的曲線越陡峭，說明該因素對迷迭香酸提取得率的影響越大；相反，曲面越平緩，則影響越不顯著[48]。橢圓形的等高線說明兩個因素的交互作用強，等高線的形狀越扁平，說明各因素之間的交互作用就越強，等高線越密集說明該因素對響應值的影響越顯著[49]。由結果可知，對迷迭香酸提取得率（Y）的影響較大的因素是提取溫度和料液比的交互作用（X1X3），這與文獻[43]中結果相似；其次是提取時間和料液比的交互作用（X2X3）；但各交互作用均未達到顯著水平（P＞0.05）。

圖3 兩因素交互作用對響應值的影響Fig.3 Effects of the interaction between two factors on the response value

根據建立的模型進行優化，可得出亞臨界水提取紫蘇籽粕迷迭香酸的最佳工藝參數為：提取溫度162.90 ℃、提取時間29.51 min、料液比1:40.98 g/mL，迷迭香酸提取得率（Y）的理論值為4.80 mg/g dw。為驗證響應面法優化的可靠性，根據預測的工藝參數進行驗證性實驗，考慮到試驗的實際操作性將亞臨界水提取溫度設置為163 ℃、提取時間為30 min、料液比為1:41 g/mL，進行3 次平行實驗測得迷迭香酸提取得率為4.91±0.16 mg/g dw，與響應面預測的理論值接近，表明優化后的提取工藝可行。

2.3 不同提取方法的比較

2.3.1 迷迭香酸提取得率的比較 本研究比較了亞臨界水提取法與常規溶劑提取法（如甲醇回流、水回流、甲醇超聲、水超聲）對迷迭香酸提取得率及其抗氧化活性的影響。由圖4A 可知，亞臨界水提取法的迷迭香酸提取得率最高（4.91±0.16 mg/g dw），其次是甲醇回流提取（3.20±0.09 mg/g dw）、甲醇超聲提取（2.95±0.19 mg/g dw）、水回流提取（1.46±0.08 mg/g dw）和水超聲提取（0.70±0.03 mg/g dw），且各提取方法存在顯著差異（P＜0.05）。其中，亞臨界水的迷迭香酸提取得率約為甲醇回流提取的1.5 倍，約為甲醇超聲提取的1.7 倍。此前，Lee 等[12]采用甲醇浸漬法提取紫蘇餅粕中的迷迭香酸的得率為1.72 mg/g；閆拯等[43]采用超聲波輔助提取紫蘇餅粕中的迷迭香酸，優化工藝參數后迷迭香酸提取得率為0.289%（即2.89 mg/g），梅喜剛等[18]采用硫酸水解法提取紫蘇籽粕中迷迭香酸，優化工藝參數后迷迭香酸提取得率為0.541 mg/g，均低于本研究中亞臨界水提取法的迷迭香酸得率；而在張玥莉等[50]的研究中，采用超聲輔助提取紫蘇籽中迷迭香酸的得率為0.59%（即5.9 mg/g），略高于本研究中亞臨界水的提取得率，但其提取過程耗時較長，且使用大量乙醇溶劑，提取產品存在溶劑殘留等風險。

圖4 不同提取方法下紫蘇籽粕迷迭香酸提取得率及抗氧化活性比較Fig.4 Comparison of rosmarinic acid yields and antioxidant activities of perilla meal extracts obtained by different extraction methods

2.3.2 抗氧化活性比較 比較不同提取方法下紫蘇籽粕提取液的抗氧化活性（見圖4B）發現，亞臨界水提取物的抗氧化活性最高，其清除DPPH 和ABTS自由基能力的VC當量分別為10.62 和13.46 mgVC/g dw；其次是甲醇回流（7.51 和8.84 mgVC/g dw）、甲醇超聲（7.49 和8.69 mgVC/g dw）、水回流（5.53 和8.03 mgVC/g dw）和水超聲提取（4.56 和6.59 mgVC/g dw）。通過Pearson 相關性分析發現，紫蘇籽粕提取物對DPPH 和ABTS 自由基的清除能力與其迷迭香酸的提取得率之間均存在顯著的正相關性，相關系數分別是RDPPH=0.991 和RABTS=0.930。換言之，亞臨界水提取迷迭香酸的提取得率高，其提取物的抗氧化活性也越強[51]。在前人的研究中也證實了相似的結論，如Park 等[52]比較了亞臨界水提取和甲醇提取法對鼠尾藻中活性物質的提取得率及其抗氧化活性的影響，發現不同溫度條件下亞臨界水的提取效率均顯著地高于甲醇提取法，并且亞臨界水提取物的抗氧化活性約為甲醇提取物的8～100 倍；Wang 等[38]利用亞臨界水提取覆盆子中的花青素，提取得率及其提取物的抗氧化活性均顯著地優于常規熱水提取和甲醇提取法。綜上可知，相比于常規提取法，本研究利用亞臨界水提取紫蘇籽粕中的迷迭香酸更具優勢，不僅可以提高迷迭香酸的提取得率及其提取物的抗氧化活性，還可避免有機溶劑的使用，是一種安全環保、高效的提取方法。

2.3.3 電鏡掃描結果 通過掃描電子顯微鏡（SEM）觀察比較不同提取方法處理后紫蘇籽粕的微觀結構。從圖5 可知，未經過提取的紫蘇籽粕原料顆粒（見圖5A）表面光滑、無氣孔、結構相對完整；而提取后的紫蘇籽粕殘渣顆粒均遭到不同程度破壞，表面結構疏松、有孔隙。并且，亞臨界水提取（SWE）的紫蘇籽粕顆粒的孔隙呈片狀排列，空隙較大，疏松程度遠大于其它幾種常規提取方法。這可能是因為亞臨界水提取過程中，高溫和高壓條件使紫蘇籽粕的結構受到了較大程度的破壞，形成了多孔隙的疏松結構，更有利于目標化合物的釋放，從而獲得較高的提取得率[53-54]。

圖5 不同提取方法處理后的紫蘇籽粕SEM 形貌圖Fig.5 SEM morphology of perilla seed meal treated by different extraction methods

3 結論

亞臨界水提取技術作為一種綠色環保的新型提取技術，可顯著提高多酚、黃酮、多糖等多種天然活性成分的提取效率[31]。本研究中采用亞臨界水提取法提取紫蘇籽粕中迷迭香酸，優化后的最佳工藝條件為提取溫度163 ℃、提取時間30 min、料液比1:41 g/mL。在此條件下，紫蘇籽粕中迷迭香酸的提取得率為4.91±0.16 mg/g dw，其清除DPPH 和ABTS自由基能力的VC當量分別為10.62 和13.46 mgVC/g dw。通過比較發現，亞臨界水提取法的迷迭香酸提取得率及其抗氧化活性均顯著高于幾種常規提取法（P＜0.05），不僅提高了提取效率，還可避免有機溶劑的使用，節省提取時間。綜上，亞臨界水提取是一項綠色環保、高效的提取技術，可應用于紫蘇籽粕中迷迭香酸的提取，具有良好的開發前景。