承德市部分病死豬10 種主要病毒病原學檢測

李曉麗，佟虎成，邱 晨

承德市動物疫病預防控制中心，河北承德 067000

近年來，隨著生豬養殖業的快速發展，生豬疫病呈現出新的特點，主要表現為動物疫病種類繁多，老的疫病還未凈化消滅，新的疫病不斷出現，而且多種豬病混合感染的情況越來越普遍，發病率升高，豬病防控和凈化工作面臨巨大挑戰。

豬圓環病毒病是由豬圓環病毒（PCV），主要是豬圓環病毒2 型（PCV2）引起的多種臨床癥狀的總稱，PCV2 是引起斷奶仔豬多系統衰竭綜合征（PMWS）和皮炎與腎病綜合征（PNDS）的主要病原[1]，豬圓環病毒病近年呈現逐年上升的發病趨勢，河北各地市PCV2 感染率在65%～83%之間[2]，該病可引起患病豬只體質下降、腹瀉、呼吸困難、消瘦等臨床表現，導致患豬飼料轉化率降低、生殖能力受到影響，造成嚴重的經濟損失[3]，同時豬圓環病毒病是一種免疫抑制類疫病，可導致其他疫病的免疫失敗，繼發其他細菌和病毒感染，給生豬養殖業造成巨大的間接經濟損失[4～6]。圓環病毒病是嚴重影響豬群健康和危害豬場生產的主要病毒病[7]，其單獨感染癥狀一般不會比較嚴重，但混合感染或免疫刺激后，其致病性會提高。

豬細小病毒病是由豬細小病毒（PPV）引起的一種豬繁殖障礙性疫病，在全球許多國家廣泛流行，主要表現為胚胎和胎兒的感染和死亡，特別是初產母豬發生死胎、畸形胎和木乃伊胎，母豬本身無明顯的臨床癥狀。豬細小病毒嚴重影響仔豬生長和母豬繁殖[8]，同時，豬細小病毒病也是一種免疫抑制類疫病，與圓環病毒病一樣，會對養豬業造成巨大的間接性經濟損失。

1 材料與設備

1.1 材料

1.1.1 檢測病料

無菌采集河北省承德市各縣區養殖場（戶）病死豬組織樣品，包括病死豬的肝臟、脾臟、肺臟、淋巴結、小腸等，按常規方法采集冷藏送檢，共41 頭病死豬樣品。

1.1.2 主要試劑

TGuide 病毒DNA/RNA（磁珠法）提取試劑盒，購自天根生化科技有限公司；非洲豬瘟病毒熒光PCR 檢測試劑盒，購自北京森康生物技術開發有限公司；豬圓環病毒2 型、豬偽狂犬病病毒、豬瘟病毒、豬細小病毒、豬藍耳病病毒（經典型）、高致病性藍耳病病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒和豬輪狀病毒熒光PCR 檢測試劑盒均購自石家莊圣博生物科技有限公司。

1.2 主要儀器設備

多功能組織研磨儀（Tissuelyser-24），Tguide S32 自動核酸提取儀，Roche Light Cycler 96熒光定量PCR儀，BHC-1300IIA2Ⅱ級生物安全柜。

2 實驗方法

2.1 流行病學調查

調查病死豬免疫情況、發病日齡、主要臨床癥狀、病理變化及用藥情況等相關流行病學資料。

2.2 病毒核酸提取

將每頭病死豬的組織樣本合成1 份，加入鋯珠和1 mL 1×PBS 溶液，放入多功能組織研磨儀中研磨，離心取上清待測。

按照提取試劑說明書，提取上述上清液中的病毒DNA 或RNA。提取的病毒DNA 或RNA 暫存于4 ℃冰箱中，盡快檢測完成。

2.3 病毒的熒光PCR 檢測

按照檢測試劑盒說明書，設定不同病種的反應程序，于Roche Light Cycler 96 熒光定量PCR 儀中進行檢測。

3 結果

3.1 主要流行病學特點

承德市2022年生豬免疫豬圓環病毒疫苗的免疫率僅為12.54%，本次檢測的41 頭病死豬中免疫豬圓環病毒疫苗的有6 頭，免疫率為14.63%，整體免疫率較低，本次檢測的病死豬未有免疫過豬細小病毒疫苗的。病死豬為集中在40 ～200日齡的生豬，臨床癥狀主要表現為食欲不振甚至采食廢絕、消瘦、腹瀉、發熱、咳嗽、關節腫大和呼吸困難，個別病死豬臀部和腹部有少量出血點。對部分病死豬進行了剖檢，主要表現為肺淤血和水腫。曾用抗生素對個別病死豬進行治療，但治療效果不明顯。

3.2 實驗室病毒核酸檢測結果

對采集的41 頭病死豬組織樣品，采用熒光定量PCR 方法進行檢測，檢測了非洲豬瘟病毒、豬圓環病毒2 型、豬偽狂犬病病毒、豬瘟病毒、豬細小病毒、豬藍耳病病毒（經典型）、高致病性藍耳病病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒和豬輪狀病毒共10 個項目，檢測到豬細小病毒核酸陽性豬2 頭，陽性率為4.88%，豬圓環病毒2 型核酸陽性豬27 頭，陽性率為65.85%，豬圓環病毒2型和豬細小病毒混合感染2 頭，占總陽性的7.41%（2/27），其他病種未檢出核酸陽性樣本。詳見表1 和表2。

表1 豬病病原學檢測結果統計表

表2 混合感染情況統計表

從表中可以看出，感染了豬細小病毒的病死豬均同時感染了豬圓環病毒2 型，導致其致病性增強。

4 討論

通過本次對河北省承德市部分病死豬10 種主要病毒病的病原學檢測，發現河北省承德地區生豬圓環病毒2 型的感染率較高，達到了65.85%，筆者認為這主要與圓環病毒的疫苗免疫率較低有關，同時也發現，即使免疫過圓環病毒疫苗的生豬，也檢測到了圓環病毒2 型核酸陽性，最終發病死亡的，這可能與圓環病毒基因突變較快，疫苗毒株與實際流行毒株不匹配有關，所以疫苗毒株的選擇應在流行病學調查的基礎上，以實際流行毒株為依據，選擇相適應的疫苗毒株。

通過本次檢測發現，承德地區豬細小病毒有一定的感染，與豬圓環病毒2 型混合感染占總陽性的7.41%，但是未發現臨床典型的流產和死胎等癥狀，主要影響的是仔豬的生長。未檢出其他疫病感染情況，說明可能整體防控措施比較到位，也可能樣品數量有限或采樣等原因，未能檢測到相應病毒核酸。

豬圓環病毒和豬細小病毒均為免疫抑制類疫病，可導致豬體的免疫抑制[8]，進而導致其他疫病的免疫失敗，降低機體的抵抗力，繼發細菌或病毒感染，加重疫情，造成嚴重的經濟損失。

目前，對兩種病毒病的治療主要是采用注射抗生素的方法，但抗生素主要作用是防止或治療繼發感染，也就是說，對于病毒病沒有很好的治療藥物，僅是對癥治療。因此，接種疫苗是現階段防控豬細小病毒病和豬圓環病毒病的主要且有效的手段。豬細小病毒的血清型比較單一，且具有較高的免疫原性[9]，因此接種疫苗是防控豬細小病毒的有效措施。市售豬圓環病毒疫苗種類繁多，因為其基因突變速度較快的原因，應根據實際流行毒株選擇疫苗種類。

在生豬生產過程中，應加強飼養管理，做好生物安全措施，采用綜合防控措施，提高豬只抵抗力，有效減少疫病的發生，進而提高養豬業經濟效益。